1. COMPARISON OF HUMAN
AND SOIL CANDIDA
TROPICALIS ISOLATES WITH
REDUCED SUSCEPTIBILITY
TO FLUCONAZOLE
Yun-Liang Yang, Chih-Chao Lin, Te-Pin Chang, Tsai-Ling
Lauderdale, Hui-Ting Chen,Ching-Fu Lee, Chih-Wen Hsieh,
Pei-Chen Chen, Hsiu-Jung Lo
Open Acces
Sebastian Quijano Mazo
Ana Milena Sanchez Henao
Medical Students
3 semester
Molecular Biology

2. INTRODUCTION

3. CANDIDA
4-6 um
Asexual
It is part of the reproduction
normal flora
and
mucocutaneous
membranes
Gram strain are
gram-positive,
aerobic Have more or less
metabolism is 100 species and
primarily Are into imperfect 10 causes
fungies ( frequently
deuteromycota) infections
of the type
Is a gener of blastomyceles
unicelulars and to the family
fungies  criptococcacease
yeast

4. CANDIDA TROPICALIS
 To infect it should be in yeast
form
 Species are associated with
vaginitis or bronchopulmonary
candidiasis
 Colonies white and smooth,
globoid or ovoid
 Produced true micelles

5. FLUCONAZOLE
Treatment and prevention
Antifungal of superficial and systemic
fungal infections
Inhibits of the fungal cytochrome P450 This inhibition
1 α demethylase enzyme
prevents the conversion of
lanosterol to ergosterol
incubation were considered
to have reduced susceptibility to azole
drugs.
Is used to prevent or
eliminate fungal growth

6. RELATION
C. tropicalis is a fungal type blastoconidia that
are in our organism for this reason they must
suffer adaptability to suit the environment in
which they live .
to survive had increased tolerance to stimuli
that is generated, They investigated the
possibility of presence in soil of such C.
tropicalis strains by pulsed field gel
electrophoresis (PFGE),
C. tropicalis exhibiting reduced susceptibility to
fluconazole from the human hosts and
environmental samples. Therefore, to prevent
patients from acquiring C. tropicalis with
reduced susceptibility to azoles, must be have
a prudent use of them to increase the
effectiveness of antifungal treatments

7. OBJETIVE
 Investigate the presence in soil of C.Tropicalis strains
exhibiting reduced susceptibility to fluconazole and
perform a comparison with the human strains

8. MATERIALES Y METODOS
Cepa
 Conjunto de especies bacterianas que comparten, al menos,
una característica
•NHUE10 NHUE11
•NHUE28 NHUE27
Cepa •NHUE33 NHUE36
•NHUE40 NHUE42
suelo •NHUE48 NHUE52
•NHUE56
•YM990275 YM990659
•YM990490
Cepas •YM990537
•YM990579
humanas •YM990592
•YM990649

9. CEPA
1 gr de suelo
9 ml de agua esteril
Incubación
por 3 dias
0.2 ml de suspension se a 24ºC
sembraron en YMA
3 colonias fueron
recogidas
Todas las cepas de levaduras fueron
identificadas por la secuencias del dominio
D1/D2 de los genes LSU rRNA

10. SUSCEPTIBILIDAD A LA DROGA
El crecimiento de cada cepa fue medida por la placa de Biotrak
II lector espectrofotométrico después de incubación a 24 h para
35ºC y 48 h.
El MIC de anfotericina B se define como el mínimo
concentraciones del fármaco capaz de inhibir la célula
crecimiento
Por la susceptibilidad a la anfotericina B, los aislamientos con
MIC § 2 mg / l fueron considerados resistentes y aquellos con
MIC -1 Mg / l fueron susceptibles

11.  La CIM para el fluconazol y voriconazol se define
como la menor concentración capaz de la
reducción de la turbidez de las células en más de
un 50%
 Los aislamietos con fluconazol MICs $ 64 mg / L
se consideraron como haber reducido
susceptibilidad y # 8 mg / L susceptible
 Las cepas con CIM en el intervalo de 16-32 mg / L
fueron consideradas sensibles a dosis dependiente
(SDD).
 Los aislamientos con CMI de 2 mg / L se conoce
como SDD.

12. PFGE
Es una técnica diseñada especialmente para la
separación de ADN de alto peso molecular (>100
kb). PFEG opera alternando dos diferentes campos
eléctricos sobre una matriz de agarosa; de esta manera
es posible alterar la migración del ADN hacia diferentes
direcciones facilitando la separación de dos grandes
moléculas de ADN.

13. 7 humanas + 11 suelo = 18 total
Todos mostraron
susceptibilidad
reducida a fluconazol
Pulsos alternos en un ángulo de 120
grados en un 5-50 s pulso-tiempo de
gradiente de 20 h
Una escalera de Salmonella El coeficiente de Dice se utilizó
se usó como marcador del para analizar las similitudes de los
peso patrones de bandas. La par no
molecular ponderado método grupo utilizando
medias aritméticas
(UPGMA) se utilizó para el análisis
de conglomerados.

14. SECUENCIA
 18 cepas exhiben sensibilidad reducida a
fluconazol
 El ADN fragmentos de seis genes: ICL1, MDR1,
SAPT2, SAPT4, XYR1 y ZWF1a se secuenciaron
para los análisis. Las secuencias resultantes se
alinearon con BioNumerics 3,0 y se compararon
con los de la base de datos de C. tropicalis para
obtener los identificadores

15. CURVAS DE CRECIMIENTO
 Bioscreen C
se utiliza para volver a evaluar el crecimiento de
diferentes aislamientos
 Aproximadamente 16104 células en 200 ml de
medio RPMI 1640 se cultivaron en ausencia o en la
presencia de diferentes drogas, incluyendo el
fluconazol, fluquinconazol,penconazol,
tebuconazol, y tridimenol, en 35ºC

16. CURVAS DE CRECIMIENTO
 Las neoplasias de células se determinaron
cada 15 minutos.
 Debido a la solubilidad de fluquinconazol, la
concentración más alta de este fármaco en el
presente estudio fue 16 mg /L en lugar de 64 mg / L
 2 veces

17. RESULTADOS
 Se analizaron 56 aislados de 26 muestras de suelo
de 477 muestras recogidas de los suelos entre
2006 y 2008 en Taiwán
 Suelo contaminado de petróleo, campo de
agricultura, suelo pantanoso y bosques
 Para diferenciar las múltiples cepas de una
muestra se tomaron 3 colonias individuales
representativas para el estudio

18. RESULTADOS
 10 solo tenia 1 aislado de C. tropicalis
 8 tenían 2 aislados de C. tropicalis
 5 tenían 3 aislados de C. tropicalis
 2 tenían 4 aislados de C. tropicalis
 1 tenia 7 aislados de C. tropicalis

19. RESULTADOS
 Todos fueron susceptibles a amfotericin B
 Se uso fluconazol en 18 muestras
 De estas 18, 17 recibieron voriconazol después de
48 h
 Para determinar si los aislados con susceptibilidad
reducida de muestras de suelo se relacionaban
genéticamente con las humanas se uso PFGE

20. RESULTADOS
 18 muestras: 11 del suelo y 7 humanas
 11 de suelo: 6 susceptibilidad reducida y 5
susceptibles
 7 humanas: todos susceptibilidad reducida
 Humanas: YM990275, 490, 537, 579, 592, 649 y
659

24. RESULTADOS

25. DISCUSSION

26. Was said by They said Right or wrong
. Cheng MF, Yu KW, Tang RB, Fan YH, Yang
YL, et al. 10. Pfaller MA, Jones RN, Doern GV,
Candida tropicalis is one of the most
frequently isolated nonalbicans

Sader HS, Messer SA, et al. Lord AT,. Candida species from patients
Barchiesi F, Calabrese D, Sanglard D,
Falconi DF, Caselli F, et al. Calvet HM,
Furthermore,
C. tropicalis develops drug resistance in

Yeaman MR, Filler SG the presence of fluconazole
much more rapidly than other Candida
species
28. Cowen LE (2001) Predicting the
emergence of resistance to antifungal drugs.
In fungi, drug resistance
is more likely to be the outcome of

FEMS Microbiol Lett 204: 1–7. sequential accumulation of
29. Cowen LE, Sanglard D, Calabrese D, adaptive mutations in the chromosomes
Sirjusingh C, Anderson JB, et al.
. Chen FJ, Lo HJ (2003) 34. McDonald LC,
Chen FJ, Lo HJ, Yin HC, Lu PL, et al.
The observation that azole-resistant Aspergillus
fumigatus isolates recovered from soil and compost 
(2001)35. Yang YL, Lauderdale TL, Lo HJ were genetically related to clinical resistant isolates
suggests the existence of an environmental route
(2004) 36. Akins RA (2005) 37. White TC, Marr
for developing drug resistance in fungi. Similar to
KA, Bowden RA (1998) 38. Yang YL,
some antibiotic resistance in bacteria, fluconazole
resistance in fungi also involves step-wise mutations
affecting more than one
Muller FM, Staudigel A, Salvenmoser S,
Tredup A, Miltenberger R, et al
Previous study has shown that in human
immunodeficiency virus infected patients, C. 
albicans and other yeast species were cross-
resistant to medical and agricultural azole drugs

27. CONCLUSIONS
 Isolates with reduced suceptibility grow better under
influence of azole drugs
 The human isolates share an electroforetic pattern
with soil isolates with reduced suceptibility
 The suceptibles one didn’t have similar
electroforetic patterns with soil or human isolates
with reduced suceptibility

28. CONCLUSIONES
 All humans strains shown reduced suceptibility to
fluconazole
 Don't do treatments with long exposures to azoles
because it can cause a reduced suceptibility to the
treatment and bad results to it

29. MAPA
Ana Sanchez

30. Comparison of Human and Soil Candida tropicalis
Isolates with Reduced Susceptibility to
Fluconazole
Aislamientos
Humanos
Del suelo
Con susceptibilidad reducida al Con susceptibilidad reducida al
fluconazol fluconazol Susceptibles al fluconazol
Mismo patrón Crecimiento luego de
97% de similitud Resistentes a
electroforético exposición a droga fluconazol y azoles
Inhibición de No comparten patrón
crecimiento por azoles electroforético
Manejo prudente de azoles en clínica y
agricultura
Sebastian Quijano