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DIAGNOSTICO MOLECULAR
 DE LAS ENFERMEDADES




      ADRIANA MARIA GIL ZAPATA
  Msc. CIENCIAS BASICAS BIOMEDICAS
VENTAJAS DE LAS TECNICAS
          DEL ADN

• La identificacion por ADN no es muy conocida
  por los delincuentes.
• El ADN esta presente en todas las celulas
  vivas, y es el mismo independiente de la celula
  que se trate.
• Marcadores geneticos siguen las leyes de
  Mendel, es posible establecer relaciones de
  parentesco.
• Determinar el sexo de la persona.
SNP Databases
  Database         Total SNPs          Nº Validados                Comentarios

                                                         Nuevas entradas de SNPs: approx.
                 11.170.620           2.034.130
 NCBI dbSNP                                              100.000 / mes
                  (Humanos)

                                                         “Allele Frequency Project“
                 1.255.326             55.018
  The SNP                                                publicado en Genomics Agosto
                (Allele frequency    (Allele frequency   2005
 Consortium     project)             project)

                                                         Todos los SNPs han pasado a
 Celera CDS      4.802.233            3.388.791          dbSNP en septiembre 2005


                                                         36 Africanos, Europeaos &
ABI Assays on
                 2.000.000            1.500.000          Asiáticos (validación)
   Demand
                                                         45-60 Africanos, Europeos &
                                                         Chinos & Japoneses usados en
                Phase I 500.000
  Hapmap                              Todos validados    validación.
                Phase II 4.600.000



 Sequenom                                                 Parte del “online assay design
                 400.000              220.000
  RealSNP                                                service”
MARCADORES ASOCIADOS A
         ENFERMEDADES
• Signos y síntomas, historia clinica
• Análisis clínicos
• Análisis molecular
  - Análisis geonómico y proteomico

 Origen de diversas enfermedades, cáncer,
 diabetes, hipertension y patologias
 cardiovasculares.
DOGMA DE LA BIOLOGIA
         MOLECULAR

Flujo de la información puede ir DNA al RNA y
de regreso.
Información puede ir de una molécula del DNA a
otra sin relacionarse con reproduccion sexual.
La Biotecnología manipula DNA y RNA y
desarrolla los principios en que se basan las
tecnicas de biologia molecular.
DIAGNOSTICO MOLECULAR

• La biología molecular estudia al DNA y
  RNA:
  - Estructura
  - Función.
Diagnostico molecular: determina las
  alteraciones en la estructura o secuencia
  de los ácidos nucleicos.
PROBLEMA DIAGNOSTICO
         MOLECULAR
• Definir cual es la secuencia de ADN que
  representa la población sana, debido a
  que existe un gran numero de variantes
  de la secuencia normal, que no tiene
  consecuencias patológicas o fenotipicas y
  solo habla del origen étnico y se les
  denomina Polimorfismos.
CODIGO GENETICO

• Es degenerado.
• El codon AUG:
  metionina.
• Codones de
  parada:
  UUA,UAG,UGA.
• Isoleucina:
  AUU,AUC.
SECUENCIACION

• La técnica mas importante del diagnostico molecular.
• Es el estándar con el que se compara las demás
  tecnicas.
• Tiene un marcaje fluorocromo.
SECUENCIACIÓN
• Identificación de la
  secuencia de bases de
  un determinado
  fragmento de ADN.

• Confirma mutaciones
  detectadas
   con otras técnicas
  (RFLPs)
SECUENCIACIÓN
CRITERIOS PARA EL
    DIAGNOSTICO MOLECULAR
• Distinguir entre cambios de secuencia con
  consecuencias funcionales y las que no las
  tienen.
• El cambio en la secuencia será claro cuando
  la alteración sea homocigota.
• Los heterocigotos presentarán mezcla 1:1
• En muestras de tejido la frecuencia con que
  se encontrara la variante es proporcional a la
  cantidad de células portadoras que se hallan
  tomado
TECNICAS PARA ESTUDIO DE
        CROMOSOMAS

 Obtención de cromosomas en metafase a
partir de una célula a los cuales se les
realiza tinción con diversos colorantes
para generar patrones de bandeo cuya
intensidad y distribución son únicas para
cada cromosoma
FISH
• Hibridación con sondas marcadas
  fluorescentes (fluoresceína, Yoduro de
  propidio)
• Determinar la posición física d un gen o
  de un marcador genetico a lo largo del
  cromosoma.
FISH
DIAGNOSTICO DE ENFERMEDAD
         GENETICA

Mutaciones puntuales

Cambio en la secuencia de nucleótidos del ADN original,
que no se corrige y por tanto queda incorporado de
forma permanente
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
También conocidas como endonucleasas, son
enzimas que cortan los enlaces fosfodiester del
ADN a partir de una secuencia que reconocen
(palindrómica).

 Son extraídas de organismos procarióticos
(bacterias), donde actúan como un mecanismo de
defensa, para degradar material genético extraño
que entre en la célula.
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN

Tipo I:
• Tienen actividad de restricción (cortan) y modificación
  (metilan).
• Cortan lejos de la secuencia de reconocimiento.
• Necesitan ATP para moverse a través de la molécula
  de DNA, desde el lugar de      reconocimiento hasta el
  sitio del corte.
Tipo II:
• Sólo tienen actividad de restricción.
• Cortan dentro de la secuencia que reconocen.
• No necesitan ATP.

•
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Tipo III
• Tienen actividad de restricción y metilación.
• Cortan de 5-8 bases antes o despúes de la
  secuencia que reconocen.
• Necesitan ATP para moverse a través de la molécula
  de DNA, desde el lugar de reconocimiento hasta el
  sitio del corte.
DIGESTIÓN ENZIMATICA
• EXTREMOS PEGAJOSOS
POLIMORFISMO DE CADENA
 SENCILLA DE ADN (SSCP)
• Diferencias de secuencia en un fragmento
  de ADN.
 1. PCR con dNTP α radiactivo (33P)
 2. Desnaturalización por altas temperaturas
 3. Electroforesis de poliacrilamida.
 4. Plegamiento de cadenas sencillas
  (uniones AT y GC)
ESTUDIO DE REGIONES
             PROMOTORAS.
• Ensayos de expresión con genes
  reporteros:
La función de la región promotora se mide
  valorando
• La cantidad de mRNA recién transcrito.
• La cantidad de proteína codificada.
1. Clonar la región reguladora de interés frente a
  región estructural de genes            proteínas
  fácilmente detectables
ESTUDIO DE REGIONES
    PROMOTORAS.
PROTEINAS REPORTERAS:
• Β-galactosidasa.
• Cloranfenicol-acil-transferasa
• Luciferasa
• Proteina verde fluorescente.

2. Cultivo celular
3. Medición de proteina.
4. Técnica SSCP
ADN RECOMBINANTE
• Permite modificar segmentos de ADN e
  introducirlos en organismos utilizando vectores.
ADN RECOMBINANTE
HETERODUPLEX
• Mezcla de ADN control y de ADN estudio
• Desnatluralización por calor y a reacoplamiento
  (reannealing)

1. Si no existe mutación sólo se producen homodúplex
  (cadenas que emparejan todos sus nucleótidos)
2. Si existe la mutación se producen tanto homodúplex
  como heterodúplex (cadenas que no emparejan 100%
  puesto que algunos de sus nucleótidos son distintos).
• Los homodúplex y los heterodúplex tendrán distintas
  movilidades electroforéticas.
• Se realiza en geles no desnatluralizantes
MÉTODO DE LA ROTURA
         ENZIMÁTICA. (EMC)

• Los heterodúplex ADN:ADN se exponen a una
  endonucleasa tras lo cual los fragmentos se
  analizan por electroforesis en gel.
• Nucleasas de la haba mung y S1, pero este
  método es muy dependiente de la secuencia y
  no detecta muchas mutaciones.
MÉTODO DE LA ROTURA QUÍMICA.
            (CCM)
• Los nucleótidos desemparejados en los heterodúplex
  ADN:ADN o ADN:ARN son modificados por agentes
  químicos (hidroxilamina y tetróxido de osmio
  ,carbodiimida) que no afectan a los nucleótidos
  emparejados.

• Luego los heterodúplex son expuestos a piperidina que
  los rompe en los sitios donde hay modificación química.

• La localización de la mutación puede deducirse del
  tamaño de los fragmentos obtenidos.

• Se puede detectar mutaciones en fragmentos de ADN de
  hasta 1499 bp de longitud, con un 90 a 95% de eficiencia.
HIBRIDACION DE ACIDOS
      NUCLEICOS



–DNA/DNA
–RNA/RNA
–DNA/RNA
GENERACION DE UNA SONDA

TIPOS DE MARCAJE

1.   Radioactiva:
•    dNTPs marcados en posición g con 32P/33P
•    muy sensible
•    contaminante
•    vida media del isotopo

2. No radioactiva:
• dNTPs marcados con biotina o digoxigenina
    menor sensibilidad
    menor razón señal/ruido
• dNTPs marcados con compuestos fluorescentes
SOUTHERN BLOT
• Transferencia de un DNA denaturado desde un
  gel a un soporte de filtro donde puede ser
  hibridizado con una sonda de ADN
  complementaria
• Identificar genes o fragmentos genéticos de un
  tamaño anormal o ausentes
• Identificar mutaciones puntuales
SOUTHERN BLOT

– Restricción para generar diferentes
  fragmentos
– Electroforesis en geles de agarosa
– Denaturación para permitir la union
  a la membrana nitrocelulosa ( UV,
  NaOH).
– Transferencia al papel de filtro por
  capilaridad
– Hibridización con sonda especifica
– Lavados
– Visualización de la sonda
Diagnostico Molecular De Las Enfermedades Pdf
MICROARRAYS

  Analiza varios SNPs al tiempo
1. Microarrays de cDNAs:
DNAs (cDNA o productos de PCR 0,6-2,4 Kb) son inmovilizados
en una superficie solida (nylon o vidrio).
Contienen cientos-miles de sondas.
Baja densidad de las sondas inmovilizadas.
La muestra a hibridar es marcada con radioactividad.

2. . Microarrays de oligonucleotidos:
Oligonucleotidos (20-80 pb) son sintetizados sobre una matriz de
vidrio o plástico.
Contienen 40.000-60.000 sondas.
Alta densidad de sondas inmovilizadas (107 copias/punto de
siembra).
MICROARRAYS
MICROARRAYS

1. Aislar RNA (total o mRNA) a partir de una muestra
biológica.
2. Convertir el RNA en cDNA utilizando una
transcriptasa reversa.
3. Marcar el cDNA con nucleotidos radioactivos o
fluorescentes
4. Hibridar el cDNA marcado en el array.
5. Detectar y cuantificar la fluorescencia o la
radioactividad. utilizando un confocal laser scanner o
un phosphoimager.
6. Analizar los resultados.
Rojo (Cy5)
MICROARRAYS   Verde (Cy3)
ESTUDIO DE RNA

Cambios en la secuencia genética influye:
  Capacidad de transcripción de un gen.
 Disminución de la vida media del mRNA
 mRNA mas cortos (defecto de splicing)


Permite detectar la presencia
de un transcrito.
Proporciona información de           NORTHERN BLOT
su tamaño y procesamiento.
NORTHERN BLOT
       1. Extracción del RNA             4. Generación de una sonda cDNA
                                                                          dATP
                                                                                 dGTP
                                                                   dTTP
                                                                           dCTP

                                                     pGEM-T



2. Electroforesis del RNAs

                                         5. Hibridación
                                                                    6. Visualización




                                                               mRNA
                                                              silvestre
           3. Transferencia a membrana
                 Luz UV, calor
NORTHERN BLOT
 ELECTROFORESIS DEL RNA
 En geles de agarosa
 En condiciones desnaturalizantes(formaldehido/formamida)



                                                                      28S
                                                                      4,8 Kb
                                                                      18S
                                                                      1,8 Kb



• El gel es teñido con bromuro de etidio y el RNA visualizado en un
transiluminador UV
• Integridad del RNA: presencia y proporcion de los RNA (28 y 18S)
• Concentración del RNA: A260 x dilución x 40 = mg/mL
ENFERMEDAD MULTIFACTORIAL


• Busqueda de genes de suceptibilidad
• Asociación a polimorfismos
  genéticos
LIGAMIENTO GENETICO
• Permite identificar el sitio cromosómico donde
  reside el gen causal de la enfermedad.

• Seguir la segregación de un marcador
  (microsatélites) con localización conocida e
  identifica la cosegregación de determinado alelo
  con el padecimiento.

• Definir si un gen conocido es el causante de la
  enfermedad genética.
INESTABILIDAD DE
           MICROSATELITES


• Tamizaje de individuos con cáncer
• Evalúa la variación de tamaño de
  secuencias microsatélites
• utiliza muy poca cantidad de ADN
• Tiene una alta resolución
• Es muy reproducible
Diagnostico Molecular De Las Enfermedades Pdf
MUTAGÉNESIS DIRIGIDA
• La manipulación genética de
  proteínas implica la manipulación
  de DNA
• En general, podemos modificar
  genéticamente una proteína:
• i)cortándole un trozo,
  ii)añadiéndole un trozo,
• iii)fusionándola con otra
• proteína,
• iv) cambiándole específicamente
  unos cuantos residuos
  aminoacídicos.
Daría todo lo que sé,
por la mitad de lo que ignoro.
                             René Descartes

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  • 1. DIAGNOSTICO MOLECULAR DE LAS ENFERMEDADES ADRIANA MARIA GIL ZAPATA Msc. CIENCIAS BASICAS BIOMEDICAS
  • 2. VENTAJAS DE LAS TECNICAS DEL ADN • La identificacion por ADN no es muy conocida por los delincuentes. • El ADN esta presente en todas las celulas vivas, y es el mismo independiente de la celula que se trate. • Marcadores geneticos siguen las leyes de Mendel, es posible establecer relaciones de parentesco. • Determinar el sexo de la persona.
  • 3. SNP Databases Database Total SNPs Nº Validados Comentarios Nuevas entradas de SNPs: approx. 11.170.620 2.034.130 NCBI dbSNP 100.000 / mes (Humanos) “Allele Frequency Project“ 1.255.326 55.018 The SNP publicado en Genomics Agosto (Allele frequency (Allele frequency 2005 Consortium project) project) Todos los SNPs han pasado a Celera CDS 4.802.233 3.388.791 dbSNP en septiembre 2005 36 Africanos, Europeaos & ABI Assays on 2.000.000 1.500.000 Asiáticos (validación) Demand 45-60 Africanos, Europeos & Chinos & Japoneses usados en Phase I 500.000 Hapmap Todos validados validación. Phase II 4.600.000 Sequenom Parte del “online assay design 400.000 220.000 RealSNP service”
  • 4. MARCADORES ASOCIADOS A ENFERMEDADES • Signos y síntomas, historia clinica • Análisis clínicos • Análisis molecular - Análisis geonómico y proteomico Origen de diversas enfermedades, cáncer, diabetes, hipertension y patologias cardiovasculares.
  • 5. DOGMA DE LA BIOLOGIA MOLECULAR Flujo de la información puede ir DNA al RNA y de regreso. Información puede ir de una molécula del DNA a otra sin relacionarse con reproduccion sexual. La Biotecnología manipula DNA y RNA y desarrolla los principios en que se basan las tecnicas de biologia molecular.
  • 6. DIAGNOSTICO MOLECULAR • La biología molecular estudia al DNA y RNA: - Estructura - Función. Diagnostico molecular: determina las alteraciones en la estructura o secuencia de los ácidos nucleicos.
  • 7. PROBLEMA DIAGNOSTICO MOLECULAR • Definir cual es la secuencia de ADN que representa la población sana, debido a que existe un gran numero de variantes de la secuencia normal, que no tiene consecuencias patológicas o fenotipicas y solo habla del origen étnico y se les denomina Polimorfismos.
  • 8. CODIGO GENETICO • Es degenerado. • El codon AUG: metionina. • Codones de parada: UUA,UAG,UGA. • Isoleucina: AUU,AUC.
  • 9. SECUENCIACION • La técnica mas importante del diagnostico molecular. • Es el estándar con el que se compara las demás tecnicas. • Tiene un marcaje fluorocromo.
  • 10. SECUENCIACIÓN • Identificación de la secuencia de bases de un determinado fragmento de ADN. • Confirma mutaciones detectadas con otras técnicas (RFLPs)
  • 12. CRITERIOS PARA EL DIAGNOSTICO MOLECULAR • Distinguir entre cambios de secuencia con consecuencias funcionales y las que no las tienen. • El cambio en la secuencia será claro cuando la alteración sea homocigota. • Los heterocigotos presentarán mezcla 1:1 • En muestras de tejido la frecuencia con que se encontrara la variante es proporcional a la cantidad de células portadoras que se hallan tomado
  • 13. TECNICAS PARA ESTUDIO DE CROMOSOMAS Obtención de cromosomas en metafase a partir de una célula a los cuales se les realiza tinción con diversos colorantes para generar patrones de bandeo cuya intensidad y distribución son únicas para cada cromosoma
  • 14. FISH • Hibridación con sondas marcadas fluorescentes (fluoresceína, Yoduro de propidio) • Determinar la posición física d un gen o de un marcador genetico a lo largo del cromosoma.
  • 15. FISH
  • 16. DIAGNOSTICO DE ENFERMEDAD GENETICA Mutaciones puntuales Cambio en la secuencia de nucleótidos del ADN original, que no se corrige y por tanto queda incorporado de forma permanente
  • 17. ENZIMAS DE RESTRICCIÓN También conocidas como endonucleasas, son enzimas que cortan los enlaces fosfodiester del ADN a partir de una secuencia que reconocen (palindrómica). Son extraídas de organismos procarióticos (bacterias), donde actúan como un mecanismo de defensa, para degradar material genético extraño que entre en la célula.
  • 18. ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Tipo I: • Tienen actividad de restricción (cortan) y modificación (metilan). • Cortan lejos de la secuencia de reconocimiento. • Necesitan ATP para moverse a través de la molécula de DNA, desde el lugar de reconocimiento hasta el sitio del corte. Tipo II: • Sólo tienen actividad de restricción. • Cortan dentro de la secuencia que reconocen. • No necesitan ATP. •
  • 19. ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Tipo III • Tienen actividad de restricción y metilación. • Cortan de 5-8 bases antes o despúes de la secuencia que reconocen. • Necesitan ATP para moverse a través de la molécula de DNA, desde el lugar de reconocimiento hasta el sitio del corte.
  • 21. POLIMORFISMO DE CADENA SENCILLA DE ADN (SSCP) • Diferencias de secuencia en un fragmento de ADN. 1. PCR con dNTP α radiactivo (33P) 2. Desnaturalización por altas temperaturas 3. Electroforesis de poliacrilamida. 4. Plegamiento de cadenas sencillas (uniones AT y GC)
  • 22. ESTUDIO DE REGIONES PROMOTORAS. • Ensayos de expresión con genes reporteros: La función de la región promotora se mide valorando • La cantidad de mRNA recién transcrito. • La cantidad de proteína codificada. 1. Clonar la región reguladora de interés frente a región estructural de genes proteínas fácilmente detectables
  • 23. ESTUDIO DE REGIONES PROMOTORAS. PROTEINAS REPORTERAS: • Β-galactosidasa. • Cloranfenicol-acil-transferasa • Luciferasa • Proteina verde fluorescente. 2. Cultivo celular 3. Medición de proteina. 4. Técnica SSCP
  • 24. ADN RECOMBINANTE • Permite modificar segmentos de ADN e introducirlos en organismos utilizando vectores.
  • 26. HETERODUPLEX • Mezcla de ADN control y de ADN estudio • Desnatluralización por calor y a reacoplamiento (reannealing) 1. Si no existe mutación sólo se producen homodúplex (cadenas que emparejan todos sus nucleótidos) 2. Si existe la mutación se producen tanto homodúplex como heterodúplex (cadenas que no emparejan 100% puesto que algunos de sus nucleótidos son distintos). • Los homodúplex y los heterodúplex tendrán distintas movilidades electroforéticas. • Se realiza en geles no desnatluralizantes
  • 27. MÉTODO DE LA ROTURA ENZIMÁTICA. (EMC) • Los heterodúplex ADN:ADN se exponen a una endonucleasa tras lo cual los fragmentos se analizan por electroforesis en gel. • Nucleasas de la haba mung y S1, pero este método es muy dependiente de la secuencia y no detecta muchas mutaciones.
  • 28. MÉTODO DE LA ROTURA QUÍMICA. (CCM) • Los nucleótidos desemparejados en los heterodúplex ADN:ADN o ADN:ARN son modificados por agentes químicos (hidroxilamina y tetróxido de osmio ,carbodiimida) que no afectan a los nucleótidos emparejados. • Luego los heterodúplex son expuestos a piperidina que los rompe en los sitios donde hay modificación química. • La localización de la mutación puede deducirse del tamaño de los fragmentos obtenidos. • Se puede detectar mutaciones en fragmentos de ADN de hasta 1499 bp de longitud, con un 90 a 95% de eficiencia.
  • 29. HIBRIDACION DE ACIDOS NUCLEICOS –DNA/DNA –RNA/RNA –DNA/RNA
  • 30. GENERACION DE UNA SONDA TIPOS DE MARCAJE 1. Radioactiva: • dNTPs marcados en posición g con 32P/33P • muy sensible • contaminante • vida media del isotopo 2. No radioactiva: • dNTPs marcados con biotina o digoxigenina menor sensibilidad menor razón señal/ruido • dNTPs marcados con compuestos fluorescentes
  • 31. SOUTHERN BLOT • Transferencia de un DNA denaturado desde un gel a un soporte de filtro donde puede ser hibridizado con una sonda de ADN complementaria • Identificar genes o fragmentos genéticos de un tamaño anormal o ausentes • Identificar mutaciones puntuales
  • 32. SOUTHERN BLOT – Restricción para generar diferentes fragmentos – Electroforesis en geles de agarosa – Denaturación para permitir la union a la membrana nitrocelulosa ( UV, NaOH). – Transferencia al papel de filtro por capilaridad – Hibridización con sonda especifica – Lavados – Visualización de la sonda
  • 34. MICROARRAYS Analiza varios SNPs al tiempo 1. Microarrays de cDNAs: DNAs (cDNA o productos de PCR 0,6-2,4 Kb) son inmovilizados en una superficie solida (nylon o vidrio). Contienen cientos-miles de sondas. Baja densidad de las sondas inmovilizadas. La muestra a hibridar es marcada con radioactividad. 2. . Microarrays de oligonucleotidos: Oligonucleotidos (20-80 pb) son sintetizados sobre una matriz de vidrio o plástico. Contienen 40.000-60.000 sondas. Alta densidad de sondas inmovilizadas (107 copias/punto de siembra).
  • 36. MICROARRAYS 1. Aislar RNA (total o mRNA) a partir de una muestra biológica. 2. Convertir el RNA en cDNA utilizando una transcriptasa reversa. 3. Marcar el cDNA con nucleotidos radioactivos o fluorescentes 4. Hibridar el cDNA marcado en el array. 5. Detectar y cuantificar la fluorescencia o la radioactividad. utilizando un confocal laser scanner o un phosphoimager. 6. Analizar los resultados.
  • 37. Rojo (Cy5) MICROARRAYS Verde (Cy3)
  • 38. ESTUDIO DE RNA Cambios en la secuencia genética influye: Capacidad de transcripción de un gen. Disminución de la vida media del mRNA mRNA mas cortos (defecto de splicing) Permite detectar la presencia de un transcrito. Proporciona información de NORTHERN BLOT su tamaño y procesamiento.
  • 39. NORTHERN BLOT 1. Extracción del RNA 4. Generación de una sonda cDNA dATP dGTP dTTP dCTP pGEM-T 2. Electroforesis del RNAs 5. Hibridación 6. Visualización mRNA silvestre 3. Transferencia a membrana Luz UV, calor
  • 40. NORTHERN BLOT ELECTROFORESIS DEL RNA En geles de agarosa En condiciones desnaturalizantes(formaldehido/formamida) 28S 4,8 Kb 18S 1,8 Kb • El gel es teñido con bromuro de etidio y el RNA visualizado en un transiluminador UV • Integridad del RNA: presencia y proporcion de los RNA (28 y 18S) • Concentración del RNA: A260 x dilución x 40 = mg/mL
  • 41. ENFERMEDAD MULTIFACTORIAL • Busqueda de genes de suceptibilidad • Asociación a polimorfismos genéticos
  • 42. LIGAMIENTO GENETICO • Permite identificar el sitio cromosómico donde reside el gen causal de la enfermedad. • Seguir la segregación de un marcador (microsatélites) con localización conocida e identifica la cosegregación de determinado alelo con el padecimiento. • Definir si un gen conocido es el causante de la enfermedad genética.
  • 43. INESTABILIDAD DE MICROSATELITES • Tamizaje de individuos con cáncer • Evalúa la variación de tamaño de secuencias microsatélites • utiliza muy poca cantidad de ADN • Tiene una alta resolución • Es muy reproducible
  • 45. MUTAGÉNESIS DIRIGIDA • La manipulación genética de proteínas implica la manipulación de DNA • En general, podemos modificar genéticamente una proteína: • i)cortándole un trozo, ii)añadiéndole un trozo, • iii)fusionándola con otra • proteína, • iv) cambiándole específicamente unos cuantos residuos aminoacídicos.
  • 46. Daría todo lo que sé, por la mitad de lo que ignoro. René Descartes