Diapositiva plan microscopio

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Diapositiva plan microscopio

  1. 1. Práctica 1:El Microscopio Óptico.ObservaciónMicroscópica de losOrganismos
  2. 2. Tipos de microscopiosMicroscopio óptico Microscopio electrónico Campo luminoso de Transmisión (TEM) Campo oscuro de Barrido (SEM) Contraste de fases Interferencia Fluorescencia Polarización
  3. 3. Microscopio de ca mpo luminoso! El campo de observación se encuentra iluminado; los microorganismos aparecen más oscuros que el fondo debido a que absorben luz.! Partes del microscopio óptico.! Amplificación: La amplificación de un microscopio es el producto de número de aumentos del objetivo por los del ocular. Aumentos útiles: x1000 a x2000! Poder de resolución: capacidad de una lente para mostrar dos objetos muy cercanos como distintos, discretos y separados.! Apertura Numérica (AN): expresión matemática que describe la forma en que la luz es concentrada por el condensador y captada por el objetivo. AN = n x sen θ s n = índice de refracción del medio entre las lentes y la muestra (1.0 para el aire; 1.56 para el aceite de inmersión). s θ = ángulo formado por el eje óptico y los rayos de luz más externos que son captados por el objetivo
  4. 4. Microscopio de ca mpo luminoso! Límite de resolución (d): distancia más pequeña por la cual dos objetos pueden estar separados y ser todavía distinguibles como dos objetos separados. " d, depende de la AN y de la longitud de onda de la luz empleada: d = λ / (AN obj + AN cond) = λ / (2AN) " Formas de reducir el límite de resolución: #Disminuyendo la longitud de onda. #Aumentando la Apertura Numérica. " El límite de resolución máximo que se consigue en los microscopios de campo luminoso se sitúa en 0.22-0.25 µm.
  5. 5. Microscopio de ca mpo luminoso! Área de campo: diámetro de la parte de la preparación que se está viendo al microscopio.! Profundidad de campo: espesor de la preparación enfocada en cualquier momento (mayor a pequeños aumentos).! Distancia focal: es la relación existente entre la longitud del tubo del microscopio empleado y la amplificación usada en un momento dado. Longitud del tubo DF = Amplificacion! Distancia de trabajo: espacio existente entre el punto más bajo del objetivo y el objeto enfocado.! Características de los objetivos. Resumen.
  6. 6. Observación de muestras al microscopio óptico• Epidermis de cebolla• Hoja de musgo• Pulpa de tomate
  7. 7. Microscopía de cam po luminoso Profase Anafase Metafase TelofaseMicrografía de un squash demeristemo apical radical decebolla teñido con orceínamostrando distintas fases de lamitosis.
  8. 8. Oculares Portaobjetos cruzado acoplable Brazo Tubo binocular Revolver Objetivos Platina portaobjetos CondensadorMandos movimiento de l p t a la ina Diafrag ma i i rs Fi t l ro I luminación por proyección Base o pie Mandos de ajuste fino y grueso
  9. 9. Fotografía del cabezal binocular de un microscopio.
  10. 10. Vista lateral del revolver con los objetivos enroscados
  11. 11. Vista inferior del revolver, pieza donde seenroscan los objetivos de un microscopio.
  12. 12. Fotografía de la platina. Se observan la platina móvil, los tornillos de movimiento de la platina móvil, y los tornillos macro y micrométrico. ObjetivosPlatina móvilCondensadorPlatinaFuente luminosa Tornillos macro y micrométrico Tornillos de movimiento de la platina móvil
  13. 13. Platina móvil Platina Condensador Fuente luminosa Tornillos macro y micrométrico Tornillos de movimiento de la platina móvilFotografía lateral de la platina. Seobservan la platina móvil, los tornillosde movimiento de la platina móvil, ylos tornillos macro y micrométrico.
  14. 14. Platina Condensador Diafragma iris Fuente luminosaDetalle del condensador y lafuente luminosa. Tornillos de movimiento de la platina móvil
  15. 15. Amplificación en un sistema de dos lentes Imagen virtual Imagen real formada por el objetivo Condensador Ocular (invertida)Ojo Objetivo Muestra
  16. 16. Eje ópticoRefracción de la luz a través delaire y del aceite de inmersión-1 Rayos de luz refractados Lente objetivo Portaobjetos Aceite Aire Condensador
  17. 17. Refracción de la luz a través delaire y del aceite de inmersión-2 Rayos de luz refractados Eje óptico Lente objetivo Cubreobjetos sobre la muestra Aire Aceite Portaobjetos Condensador
  18. 18. La apertura numérica Eje óptico Objetivo del microscopio θ Lente frontal del objetivo Lente frontal del objetivo θ = ángulo que forman θ el rayo de luz más externo captado por Porta de vidrio el objetivo y el eje óptico del mismo. Fuente de luz
  19. 19. Determinación de la apertura numéricaAN = n x sen θ θ = 58º θ = 40ºEjemplos:Objetivo seco:AN = 1.00 x sen 40ºAN = 0.64 (<1) n = 1.52Objetivo de inmersión:AN = 1.52 x sen 58º Aire, n = 1 Aceite, n = 1.52AN = 1.29 (>1) Porta de vidrio n = 1.52 Aire, n = 1 Aire, n = 1
  20. 20. Poder deresolución El ojo humano puede separar puntos distantes 0.25 mm 0.25 mm El microscopio óptico puede separar puntos de 0.25 µm de separacíón 0.25 µm El microscopio electrónico puede sepa- rar puntos de una distancia inferior a 5 unidades Angstrom. 5A
  21. 21. Profundidad de campo P.c. 10x 1 µm P.c. 7 µm 1.3 µm 40x 1 µm P.c.0.5 µm 100x 1 µm
  22. 22. Área de campoAspecto del área de campo de una muestra. Observarcomo a medida que la amplificación aumenta, el objetotambién lo hace, pero el área del campo disminuye. x4 x10 x40 3.5 mm 1,5 mm 0.35 mm
  23. 23. Los objetivosAumentos: x 5, x10, x20, x45, x100Apertura Numérica: 0.12, 0.17, 0.54, 0.65, 1.3Longitud del tubo: 160 mmGrosor del cubreobjetos: 0.18 mm
  24. 24. Caracter t cas t picas ís i í de los objetivos Objetivos Seco de pocos Seco de muchos aumentos aumentos De inmersión (10 x) (40 x) (100 x) Amplificación(con un ocular de 10 x) 100 aumentos 400 aumentos 1000 aumentos Distancia focal 16 mm 4 mm 1.8 mm Distancia de trabajo 4 - 8 mm 0.2 - 0.6 mm 0.11 - 0.16 mm Apertura Numérica 0.25 0.85 1.25 Límite de resolución 1.10 µm 0.32 µm 0.22 µmProfundidad de campo 7.0 µm 1.3 µm 0.5 µm Área de campo 1.5 mm 0.35 mm 0.17 mm
  25. 25. PortaobjetosImagen 1
  26. 26. Gota de aguaImagen 2
  27. 27. EpidermisImagen 3
  28. 28. Imagen 4 Epidermis
  29. 29. Imagen 5 Cubreobjetos
  30. 30. Imagen 6 Presionar el cubreobjetos
  31. 31. Observación al microscopio (x40)Células epidérmicasde cebolla (Allium sp)NúcleosPared celular
  32. 32. Imagen 7 Colorantes
  33. 33. Imagen 8 Verter una gota de colorante en el borde del cubreobjetos
  34. 34. Imagen 9 Con ayuda de una tira de papel de filtro hacer pasar el colorante a través de la muestra por capilaridad
  35. 35. Imagen 10 Musgo Gota de agua
  36. 36. Imagen 11 Coger una hojita con las pinzas Gota de agua
  37. 37. Imagen 12 Colocar la hojita encima de la gota
  38. 38. Imagen 13 Colocar un cubreobjetos y añadir más agua si es necesario
  39. 39. Imagen 14 Pulpa del tomate Gota de agua
  40. 40. Imagen 15 Pulpa de tomate
  41. 41. Imagen 16 Poner un cubre y presionar ligeramente
  42. 42. Imagen 18 Añadir una gota de colorante Adsorber con una tira de papel

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