Successfully reported this slideshow.
We use your LinkedIn profile and activity data to personalize ads and to show you more relevant ads. You can change your ad preferences anytime.
LAPORAN PRAKTIKUM
KULTUR JARINGAN

Disusun Oleh :
Nama

: Sriatin Rahayu

NIM

: K4309078

Kelompok : 6

PROGRAM STUDI PEN...
HALAMAN PENGESAHAN
Laporan praktikum Kultur Jaringan ini disusun guna melengkapi tugas
mata kuliah Kultur Jaringan. Lapora...
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan YME yang telah
memberikan Kasih dan Karunia- Nya sehingga pen...
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ...................................................................................... i
HALAMAN ...
2. Pembahasan....................................................................................
E. Kesimpulan dan Saran....
1. Kesimpulan....................................................................................
2. Saran...................
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7
LAMPIRAN

Surakarta, 19 ...
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Rekapan kultur jaringan tanaman mawar (Rosa sp ) .......................... 11
Tabel 3.1 rekapan ku...
Acara I
Pembuatan Larutan Stok, Media Kultur dan Sterilisasai Alat
A. Pendahuluan
1. Latar Belakang
Kultur jaringan merupa...
Unsur-unsur yang dibutuhkan pada media kultur antara lain seperti
aquadest, larutan stok terdiri atas hara mikro dan hara ...
B. Tinjauan Pustaka
Media merupakan faktor penentu dalam perbanyakan dengan kultur
jaringan. Komposisi media yang digunaka...
mempengaruhi pertumbuhan kulur, kecepatan pertumbuhan dan differensiasinya.
Keadaan fisik media ini mempengaruhi pertumbuh...
Auksin yang biasa digunakan dalam kultur jaringan adalah IAA.
Interaksi antara auksin dan sitokinin yang diberikan pada me...
Alat pembuatan media tanam
- Magneitk stirer
- Timbangan analitik
- Pipet
- Ph meter
- Gelas piala
- Botol-botol kultur
- ...
4. Cara Kerja
A.Membuat larutan stok
a. Larutan stok media
1). Menimbang bahan-bahan kimia yang telah dikalikan menjadi be...
5). Mengatur pH dalam kisaran 5,8-6,3 dengan menambahkan beberapa
tetes NaOH untuk menaikkan pH atau HCL untuk menurunkan ...
dicegah penggunaan media yang telah terkontaminasi pada saat
penanaman.
D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan
1. Hasil Pengam...
2. Pembahasan
Media adalah tempat

tumbuh eksplan yang di dalamnya

mengandung banyak nutrisi untuk menunjang kehidupan da...
didapatkan dari MgSO4.7H2O. P didapat dari NaH2PO4.H2O dan
KH2PO4. K didapat dari KCl, K2NO3 atau KH2PO4. K didapatkan dar...
kultur, media tidak benar-benar memadat, agak cair dan agak lembek.
Permukaan media rata dan bagus tidak bergelombang sama...
autoklaf

dan dimasukkan ke dalam tabung autoklaf. Pada

prinsipnya, sterilisasi autoklaf menggunakan panas dan tekanan da...
DAFTAR PUSTAKA

Anonim. 2008. Kultur Jaringan. http://id.wikipedia.org/wiki/Kultur_jaringan.
Diakses tanggal 15 Desember 2...
Upcoming SlideShare
Loading in …5
×

laporan kuljar

3,295 views

Published on

Published in: Education
  • Be the first to comment

laporan kuljar

  1. 1. LAPORAN PRAKTIKUM KULTUR JARINGAN Disusun Oleh : Nama : Sriatin Rahayu NIM : K4309078 Kelompok : 6 PROGRAM STUDI PENDIDIKAN BIOLOGI FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN UNIVERSITAS SEBELAS MARET SURAKARTA 2012
  2. 2. HALAMAN PENGESAHAN Laporan praktikum Kultur Jaringan ini disusun guna melengkapi tugas mata kuliah Kultur Jaringan. Laporan ini telah diketahui dan disahkan oleh CoAssisten dan Dosen Kultur Jaringan pada tanggal : 20 Desember 2012 Di susun Oleh : Nama : Sriatin Rahayu NIM : K4309078 Kelompok : 6 Mengetahui, Dosen Kultur Jaringan Dr. Ir. Endang Yuniastuti,MS NIP. 197006091994022001 Co-Assisten Haries Apriliyana NIM. HO708105
  3. 3. KATA PENGANTAR Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan YME yang telah memberikan Kasih dan Karunia- Nya sehingga penulis dapat menyusun dan menyelesaikan Laporan Praktikum Kultur Jaringan ini. Penyusunan laporan ini bertujuan untuk melengkapi tugas mata kuliah Kultur Jaringan pada semester VII di Program Studi Pendidikan Biologi Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Sebelas Maret Surakarta. Dalam penyusunan laporan praktikum ini, penulis menyadari sepenuhnya apabila tanpa bantuan, bimbingan dan dukungan dari berbagai pihak tidak akan dapat terselessaikan dengan baik. Oleh karena itu, penulis menyampaikan terima kasih kepada : 1. Dr. Ir. Endang Yuniastuti, MS dan Dr. Yudi Rinanto, M.P selaku Dosen mata kuliah Kultur Jaringan yang telah memberikan izin kepada penulis dalam proses penyusunan laporan ini 2. Seluruh Co-Assisten Praktikum Kultur Jaringan yang telah memberikan bimbingan kepada penulis 3. Semua pihak yang telah memberikan bantuan moral maupun spiritual kepada penulis, baik secara langsung maupun tidak langsung Penulis menyadari bahwa masih terdapat banyak kekurangan, oleh karena itu saran dan kritik penulis harapkan dari pembaca agar laporan ini menjadi lebih baik. Demikian, semoga Laporan Praktikum Kultur Jaringan ini dapat bermanfaat.
  4. 4. DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL ...................................................................................... i HALAMAN PENGESAHAN .........................................................................ii KATA PENGANTAR .................................................................................... iii DAFTAR ISI .................................................................................................. iv DAFTAR TABEL ...........................................................................................viii DAFTRA GAMBAR.......................................................................................ix ACARA I. Pembuatan Larutan Stock, Pembuatan Media Kultur dan Sterilisasinya A. Pendahuluan ..............................................................................................1 1. Latar Belakang .............................................................................. 1 2. Tujuan ............................................................................................2 B. Tinjauan Pustaka .......................................................................................2 C. Metode Praktikum............... ......................................................................4 1. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 4 2. Alat ................................................................................................4 3. Bahan.... ........................................................................................ 4 4. Cara Kerja ..................................................................................... D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan 1. Hasil Pengamatan........................................................................... 2. Pembahasan.................................................................................... E. Kesimpulan dan Saran................................................................................ 1. Kesimpulan.................................................................................... 2. Saran.............................................................................................. DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7 ACARA II. Kultur Jaringan Sansievera A. Pendahuluan ..............................................................................................1 1. Latar Belakang .............................................................................. 1 2. Tujuan ............................................................................................2 B. Tinjauan Pustaka .......................................................................................2 C. Metode Praktikum............... ......................................................................4 1. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 4 2. Alat ................................................................................................4 3. Bahan.... ........................................................................................ 4 4. Cara Kerja ..................................................................................... D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan 1. Hasil Pengamatan...........................................................................
  5. 5. 2. Pembahasan.................................................................................... E. Kesimpulan dan Saran................................................................................ 1. Kesimpulan.................................................................................... 2. Saran.............................................................................................. DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7 ACARA III. Kultur Jaringan Nanas A. Pendahuluan ..............................................................................................1 1. Latar Belakang .............................................................................. 1 2. Tujuan ............................................................................................2 B. Tinjauan Pustaka .......................................................................................2 C. Metode Praktikum............... ......................................................................4 1. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 4 2. Alat ................................................................................................4 3. Bahan.... ........................................................................................ 4 4. Cara Kerja ..................................................................................... D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan 1. Hasil Pengamatan........................................................................... 2. Pembahasan.................................................................................... E. Kesimpulan dan Saran................................................................................ 1. Kesimpulan.................................................................................... 2. Saran.............................................................................................. DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7 ACARA IV. Kultur Jaringan Jeruk A. Pendahuluan ..............................................................................................1 1. Latar Belakang .............................................................................. 1 2. Tujuan ............................................................................................2 B. Tinjauan Pustaka .......................................................................................2 C. Metode Praktikum............... ......................................................................4 1. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 4 2. Alat ................................................................................................4 3. Bahan.... ........................................................................................ 4 4. Cara Kerja ..................................................................................... D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan 1. Hasil Pengamatan........................................................................... 2. Pembahasan.................................................................................... E. Kesimpulan dan Saran................................................................................
  6. 6. 1. Kesimpulan.................................................................................... 2. Saran.............................................................................................. DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7 ACARA V. Kultur Jaringan Jambu A. Pendahuluan ..............................................................................................1 1. Latar Belakang .............................................................................. 1 2. Tujuan ............................................................................................2 B. Tinjauan Pustaka .......................................................................................2 C. Metode Praktikum............... ......................................................................4 1. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 4 2. Alat ................................................................................................4 3. Bahan.... ........................................................................................ 4 4. Cara Kerja ..................................................................................... D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan 1. Hasil Pengamatan........................................................................... 2. Pembahasan.................................................................................... E. Kesimpulan dan Saran................................................................................ 1. Kesimpulan.................................................................................... 2. Saran.............................................................................................. DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7 ACARA IV. Sub Kultur A. Pendahuluan ..............................................................................................1 1. Latar Belakang .............................................................................. 1 2. Tujuan ............................................................................................2 B. Tinjauan Pustaka .......................................................................................2 C. Metode Praktikum............... ......................................................................4 1. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 4 2. Alat ................................................................................................4 3. Bahan.... ........................................................................................ 4 4. Cara Kerja ..................................................................................... D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan 1. Hasil Pengamatan........................................................................... 2. Pembahasan.................................................................................... E. Kesimpulan dan Saran................................................................................ 1. Kesimpulan.................................................................................... 2. Saran..............................................................................................
  7. 7. DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7 LAMPIRAN Surakarta, 19 Desember 2012 Penulis
  8. 8. DAFTAR TABEL Tabel 2.1 Rekapan kultur jaringan tanaman mawar (Rosa sp ) .......................... 11 Tabel 3.1 rekapan kultur jaringan tanaman nanas (Ananas comosus) ................ 19 Tabel 3.2 Rekapan Kultur Jaringan Tanaman wortel (Daucus carota) .............. 19 Tabel 4.1 Rekapan kultur Jaringan tanaman sansievera (Sansievera sp) ........... 27
  9. 9. Acara I Pembuatan Larutan Stok, Media Kultur dan Sterilisasai Alat A. Pendahuluan 1. Latar Belakang Kultur jaringan merupakan salah satu metode perbanyakan tanaman secara vegetatif. Kultur jaringan tertua dilakukan pada biji anggrek dengan tujuan untuk mengecambahkannya dalam media yang kaya nutrisi karena biji dari anggrek tidak mempunyai cadangan makanan. Kultur jaringan terus berkembang dari mengkulturkan biji berkembang dengan mengkulturkan jaringan dan terus berkembang hingga mampu mengkulturkan satu sel dari tanaman. Penggunaan kultur jaringan mempunyai kelebihan yaitu mampu memproduksi bibit yang seragam dalam jumlah banyak dan dalam waktu yang relatifr singkat. Oleh karena itu kultur jaringan sering dijadikan solusi sebagai metode perbanyakana tanaman dan juga dapat digunakan sebagai suatu metode penyimpanan plasma nutfah yang tidak membutuhkan temapat yang besar. Keberhasilan darai kultur jaringan sangat bergantung dari ketepatan konsentrasi nutrisi yang berada di dalam media kultur. Ketepatan konsentrasi ini menyangkut pada ketersediaan nutrisi bagi eksplan tanaman. Kelebihan nutrisi dari tanaman akan menyebabkan tanaman mengalami keracunan unsur hara. Oleh karena itu, pembuatan larutan stock dan sterilisasi media dianggap penting untuk diketahui sebagai sarana penenunjang kebutuhan informasi akan kultur jaringan. Sterilisasi dimaksudkan untuk menciptakan serta memelihara kondisi aseptik. Seperti yang kita ketahui bahwa sumber kontaminan yang terdiri dari jamur dan bakteri berukuran sangat kecil. Baik media tumbuh maupun eksplan yang akan ditanam harus dibebaskan dari sumber kontaminan yang menyebabkan kontaminasi. Pada dasarnya, peralatan yang digunakan dalam teknik kultur jaringan harus bersih dan steril. Peralatan yang tidak steril mengakibatkan tanaman yang ditanam pada kultur jaringan menjadi terkontaminasi sehingga tidak dapat tumbuh kembang dan menghambat proses pertumbuhan pada tanaman karena yang disebabkan oleh jamur dan bakteri.
  10. 10. Unsur-unsur yang dibutuhkan pada media kultur antara lain seperti aquadest, larutan stok terdiri atas hara mikro dan hara makro, vitamin, zat pengatur tumbuh (ZPT), agar-agar, gula serta NaOH dan HCL. 2. Tujuan Pada praktikum acara Sterilisasi dan Pembuatan Media Kultur mempunyai tujuan yaitu : a. Mengetahui langkah-langkah dalam pembuatan larutan stock. b. Mengetahui langkah-langkah dalam pembuatan media kultur jaringan. c. Mengetahui prosedur sterilisasi alat-alat penanaman dan media kultur. .
  11. 11. B. Tinjauan Pustaka Media merupakan faktor penentu dalam perbanyakan dengan kultur jaringan. Komposisi media yang digunakan tergantung dengan jenis tanaman yang akan diperbanyak. Media yang digunakan biasanya terdiri dari garam mineral, vitamin, dan hormon. Selain itu, diperlukan juga bahan tambahan seperti agar, gula, dan lain-lain. Zat pengatur tumbuh (hormon) yang ditambahkan juga bervariasi, baik jenisnya maupun jumlahnya, tergantung dengan tujuan dari kultur jaringan yang dilakukan. Media yang sudah jadi ditempatkan pada tabung reaksi atau botol-botol kaca. Media yang digunakan juga harus disterilkan dengan cara memanaskannya dengan autoklaf (Anonim, 2008). Cara kerjanya hampir sama dengan alat masak pressure cooker sebab alat ini merupakan sebuah bejana yang dapat diisi air dan ditutup rapat-rapat. Sumber pemanas autoklaf ada yang dari listrik, tetapi ada pula yang harus diletakkan diatas kompor gas. Jika alat ini dipanaskan maka akan terdapat uap air yang tidak dapat keluar karena bejana tertutup rapat sehingga tekanan normal. Kenaikan tekanan uap ini akan menyebabkan air mendidih diatas 100 %. Apabila tekanan uap ini tidak diatur maka akan bertambah tinggi (Nugroho dan Sudito, 2000). Apabila kita melakukan gerakan-gerakan selama bekerja di dalam laboratorium, akan megakibatkan timbulnya suatu awan debu yang hampir tidak tampak. Debu tersebut mengandung spora yang sangat besar jumlahnya. Bila spora ini kontak dengan media kultur yang digunakan dalam pekerjaan tersebut, spora kan tumbuh dengan cepat. Dalam beberapa hari spora akan tumbuh menjadi koloni yang terlihat oleh mata biasa (Wetherel, 1982). Untuk membuat media dengan jumlah zat seperti yang ditentukan, diperlukan penimbangan dan penakaran bahan secara tepat. Ketidaktepatan ukuran dapat menyebabkan terjadinya proses yang dikehendaki. Pada umumnya untuk suatu keperluan, media yang telah dirumuskan dapat diubah atau diperbarui, dengan mengganti zat-zat tertentu, atau menambah zat lain. Untuk melakukan perubahan ini diperlukan acuan yang mantap atau pengalaman (Rahardja, 1988). Media yang umum digunakan dalam kultur jaringan adalah medium padat, medium semi padat dan medium cair. Keadaan fisik media akan
  12. 12. mempengaruhi pertumbuhan kulur, kecepatan pertumbuhan dan differensiasinya. Keadaan fisik media ini mempengaruhi pertumbuhan antara lain karena efeknya terhadap osmolaritas larutan dalam media serta ketersediaan oksigen bagi pertumbuhan eksplan yang dikulturkan. Media merupakan faktor penentu dalam perbanyakan dengan kultur jaringan. Komposisi media yang digunakan tergantung dengan jenis tanaman yang akan diperbanyak. Media yang digunakan biasanya terdiri dari garam mineral, vitamin dan hormon. Selain itu, diperlukan juga bahan tambahan seperti agar, gula (sebagai sumber energi), dan lain-lain. Zat pengatur tumbuh (hormon) yang ditambahkan juga bervariasi, baik jenis maupun jumlahnya, tergantung dengan tujuan dari kultur jaringan yang dilakukan. Media yang sudah jadi ditempatkan pada tabung reaksi atau botol-botol kaca. Media yang digunakan juga harus disterilkan dengan cara memanaskannya menggunakan autoklaf (Yuniastuti. 2012). Komponen media kultur yang lengkap adalah sebagai berikut : 1. Air destilata (akuades) atau air bebas ion sebagai pelarut atau solvent 2. Hara-hara makro dan mikro 3. Gula (umumnya sukrosa) sebagai sumber energi 4. Vitamin, asam amino dan bahan organic lain 5. Zat pengatur tumbuh 6. Suplemen berupa bahan-bahan alami, jika diperlukan 7. Agar-agar atau Gelrite sebagai pemadat media (Yusnita, 2003). Keberhasilan penggunaan metode kultur jaringan sangat tergantung pada media yang digunakan. Media kultur jaringan menyediakan tidak banyak unsure hara – unsure hara makro dan mikro, tetapi yang kabohidrat yang pada umnya beberapa gula untuk menggantikan karbon yang didapat dari fotosintetis. Penggunaan media ½ MS+IBA dengan konsentrasi antara 10 sampai dengan 100 mg/l yang ditambah dengan ZPT NAA 1mg/l mampu mengindukasi akar sampai 70%. Kombinasi ZPT auksin dan sitokinin yang diberikan bersamaan kedalam media yang sama nampaknya selalau berhasil ( Herawan dan M. Na”iem, 2006 )
  13. 13. Auksin yang biasa digunakan dalam kultur jaringan adalah IAA. Interaksi antara auksin dan sitokinin yang diberikan pada media yang diproduksi secara endogen oleh tanaman menentukan arah perkembangan suatu kultur tanaman. Sitokinin digunakan untuk pembelahan sel terutama bila ditambahkan dengan auksin. Zat pengatur tumbuh mempunyai peran yang sangat penting dalam mengatur pertumbuhan dan perkembangan eksplan dalam kultur. Pertumbuhan dan morfogenesis dalam budidaya jaringan diatur oleh interaksi dan keseimbangan antara pemberian ZPT pada media dengan hormon endogen yang terdapat dalam eksplan (Hidayat, 2002). Kultur jaringan atau biakan jaringan merupakan teknik pemeliharaan jaringan atau bagian dari individu secara buatan (artifisial). Yang dimaksud secara buatan adalah dilakukan di luar individu yang bersangkutan. Karena itu teknik ini sering kali disebut kultur in vitro, sebagai lawan dari in vivo. Dikatakan in vitro (bahasa Latin, berarti "di dalam kaca") karena jaringan dibiakkan di dalam tabung inkubasi atau cawan petri dari kaca atau material tembus pandang lainnya. Kultur jaringan secara teoretis dapat dilakukan untuk semua jaringan, baik dari tumbuhan maupun hewan (termasuk manusia) namun masing-masing jaringan memerlukan komposisi media tertentu (Anonim, 2008). C. Metode Praktikum 1. Waktu dan Tempat Praktikum Praktikum acara sterilisasi alat dam pembuatan media kultur dilaksanakan pada hari Selasa, 8 Oktober 2012 pukul 19.00 s/d 21.00 WIB yang bertempat di Laboratorium Kultur Jaringan Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret Surakarta. 2. Alat Alat pembuatan larutan stock - Timbangan analitik - Sendok - Pipet - Erlenmeyer
  14. 14. Alat pembuatan media tanam - Magneitk stirer - Timbangan analitik - Pipet - Ph meter - Gelas piala - Botol-botol kultur - Plastik pp 0.3 mm - Karet gelang - Kertas label Alat sterilisasi - Autoklaf 3. Bahan Bahan pembuatan larutan stock - Unsur hara makro dan mikro, vitamin, ZPT - Aquadest Bahan-bahan pembuatan media - Aquadest - Larutan stok, terdiri dari hara makro dan mikro, vitamin serta ZPT - Agar-agar - Gula - NaOH 1 N dan HCL 1 N
  15. 15. 4. Cara Kerja A.Membuat larutan stok a. Larutan stok media 1). Menimbang bahan-bahan kimia yang telah dikalikan menjadi beberapa kali konsentrasi, misalnya untuk unsur hara makro dikalikan 20 dan unsur hara mikro dikalikan 100 kali konsentrasi. 2). Melarutkan bahan-bahan kimia tersebut ke dalam aquadest dengan volume tertentu, misalnya 500 ml. 3). Memasukkan masing-masing larutan ke dalanm botol dan menyimpannnya ke dalam refrigerator. b. Larutan stok zat pengatur tumbuh 1). Menghitung kebutuhan BAP 100 ppm sebanyak 300 ml adalah sebagai berikut : 100ppm = 100mg/l = 30 mg/0.3 l = 30 mg/300 ml 2). Menghitung kebutuhan IBA 100 ppm sebanyak 100 ml adalah sebagai berikut 100 ppm = 100 mg/l = 10 mg/ 0.1 l = 10 mg/100 ml 3). Melarutkan bahan dengan alkohol atau NaOH 1 N kemudian ditambah dengan aquadest sampai 300 ml untuk BAP dan 100 ml untuk IBA. 4). Memasukkan masing-masing larutan tersebut ke dalam botol dan menyimpannya ke dalam refrigerator. B. Membuat media kultur Langkah-langkah pembuatan media (1 liter) adalah sebagai berikut : 1). Mengambil masing-masing larutan stok sesuai dengan ukuran yang telah ditentukan dan memasukkannya ke dalam gelas piala. 2). Mengambil larutan stok ZPT sesuai dengan perlakuan 3). Menambah aquadest sampai 1000 ml. 4). Menambah gula sebanyak 30 gr.
  16. 16. 5). Mengatur pH dalam kisaran 5,8-6,3 dengan menambahkan beberapa tetes NaOH untuk menaikkan pH atau HCL untuk menurunkan pH. Pada saat pengukuran pH, larutan media diaduk dengan magnetik stirer. 6). Menambahkan agar-agar 8 gr kemudian dididihkan 7). Menuangkan larutan media ke dalam botol-botol kultur kurang lebih 25 ml tiap botol 8). Menutup botol berisi larutan media dengan plastik 9). Memasukkan botol-botol berisi media ke dalam autoklaf untuk proses sterilisasi pada tekanan 1,5 kg/cm2 selama 45 menit 10). Menyimpan media pada rak penyimpan media yang bertujuan untuk mengantisipasi ada tidaknya kontaminasi pada media sehingga dapat dicegah penggunaan media yang telah terkontaminasi pada saat penanaman. C. Media Penanaman Dalam praktikum ini, media yang digunakan adalah media Murashige dan Skoog (MS) yang dimodifikasi dengan penambahan ZPT BAP 2 ppm dan IAA 0,5 ppm. Media kultur tersebut digunakan untuk penanaman 5 macam eksplan dengan masing-masing eksplan diulang sebanyak 2 kali untuk setiap mahasiswa / praktikan. D. Melakukan sterilisasi Alat dan Media Kultur 1). Sterilissasi alat dan media kultur jaringan dilakukan secara bersamasama menggunakan autoklaf . 2). Membungkus alat-alat kultur seperti petridish, pisau scalpel dan pinset dengan kertas koran. 3). Memasukkan botol-botol berisi media dan alat-alat kultur yang telah dibungkus kertas koran ke dalam autoklaf untuk proses sterilisasi pada suhu 121 C, tekanan 1,5 kg/cm2 selama 45 menit. 4). Menyimpan alat-alat kultur dalam oven 5). Menyimpan media pada rak penyimpanan media yang bertujuan untuk mengantisipasi ada tidaknya kontaminasi pada media sehingga dapat
  17. 17. dicegah penggunaan media yang telah terkontaminasi pada saat penanaman. D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan 1. Hasil Pengamatan Gambar 1. 1 Media kultur jaringan
  18. 18. 2. Pembahasan Media adalah tempat tumbuh eksplan yang di dalamnya mengandung banyak nutrisi untuk menunjang kehidupan dan pertumbuhan eksplan. Media merupakan faktor penentu keberhasilan dalam perbanyakan tanaman dengan kultur jaringan (Matatula, 2003: 203). Ciri-ciri media yang baik untuk kultur jaringan adalah - media padat dan tidak lembek - PH sesuai untuk kehidupan tanaman - Mengandung Zat Pengatur Tumbuh (ZPT) yang mendukung kehidupan tanaman. Sesuai pendapat Endang Yuniastuti (2009: 10), komposisi utama media tanam kultur jaringan terdiri dari komponen berikut: (1) air distilata (akuades) atau air bebas ion sebagai pelarut atau solven, (2) hara-hara makro dan mikro, (3) gula (umumnya sukrosa) sebagai sumber energi, (4) vitamin, asam amino dan bahan organic lain, (5) zat pengatur tumbuh, (6) suplemen berupa bahan-bahan alami, jika diperlukan dan (7) agar-agar atau gelrite sebagai pemadat media. Perbedaan komposisi media dapat mengakibatkan perbedaan pertumbuhan dan perkembangan eksplan yang ditumbuhkan secara in vitro (Marlina, 2004: 4). Praktikum kali ini menggunakan media Murashige Skoog (MS) yang sebelumnya telah dibuat larutan stok. Larutan stok merupakan larutan pekat senyawa-senyawa kimia penyusun media yang memudahkan penimbangan sehingga jumlah atau volume masing-masing komponen media yang terbentuk dalam jumlah tepat. Larutan stok dibuat dalam konsentrasi pekat 10 atau 100 kali konsentrasi akhir yang dibutuhkan untuk media. Pada praktikum kali ini, untuk hara makro kecuali CaCl2.2H2O dibuat larutan stoknya, untuk CaCl2.2H2O dibuat larutan stock tersendiri karena apabila di campur zat ini akan mengendap. Media Murashige skoog (MS) terdiri dari komponen-komponen berikut: a. Garam-garam anorganik terdiri dari makronutrient (C, H, O, N, S, P, K, Ca, Mg). N didapatkan dari NO3- atau NH4+ atau asam amino. Mg dan S
  19. 19. didapatkan dari MgSO4.7H2O. P didapat dari NaH2PO4.H2O dan KH2PO4. K didapat dari KCl, K2NO3 atau KH2PO4. K didapatkan dari KCl, K2NO3 atau KH2PO4. Ca didapatkan dari CaCl2.2H2O atau Ca(NO3)2. Dan Cl dari KCl atau CaCl2. Selain itu dibutuhkan juga mikronutrient yang terdiri dari Cu, Zn, FeEDTA, B, Mo, Co, dan I. b. Sumber karbon yang digunakan adalah sukrosa, sebagai sumber energi. Konsentrasi sukrosa yang digunakan adalah 20.000- 45.000 mg/L. c. Asam amino merupakan sumber N organik. Asam amino yang sering digunakan adalah glutamine, asparagin, sistein, dan glisin. d. Vitamin berfungsi sebagai katalisator dalam sistem enzim dan diperlukan dalam jumlah kecil. Vitamin yang dibutuhkan pada sebagian besar kultur jaringan tumbuhan adalah thiamin, yang diberikan dalam bentuk Thiamin-HCl. Vitamin lain yang biasa digunakan adalah asam nikotinat dan piridoksin HCl (vitamin B6). Dalam media juga perlu diperhatikan tingkat keasamannya ( pH ). Sel-sel tanaman yang dikembangkan dengan teknik kultur jaringan mempunyai toleransi pH yang relatif sempit dengan titik optimal antara pH 5,0 – 6,0 (Daisy, 1994). Dalam pembuatan media pH-nya harus dijaga pada pH 5,8 sampai 6,3 dengan penambahan KOH atau NaOH untuk menaikkan pH dan dan HCl untuk menurunkan pH. pH harus dijaga pada 5,8 sampai 6,3 sebab pada kawasan pH ini merupakan pH yang optimum untuk penyerapan hara oleh tanaman. Pada praktikum kali ini dilakukan penambahan HCl sebanyak kurang lebih 5 tetes karena campuran media yang didapat terlalu basa dan setelah dilakukan penambahan HCl dilakukan pula penambahan NaOH sebanyak 2 tetes karena pH yang didapat terlalu asam. Media yang terlalu asam menyebabkan media sukar mengendap. Namun harus juga dihindari penambahan HCl dan NaOH secara berlebihan karena akan mengurangi tingkat keberhasilan pembuatan media. Dari hasil pengamatan, media yang dibuat oleh kelompok kami kurang berhasil. Ini karena setelah disterilisasi dan diletakkan di dalam rak
  20. 20. kultur, media tidak benar-benar memadat, agak cair dan agak lembek. Permukaan media rata dan bagus tidak bergelombang sama sekali. Keberhasilan dan kegagalan dalam membuat media dipengaruhi oleh banyak hal meliputi : a. Pengukuran komponen pembuatan media yang ditambahkan kurang tepat. b. Perataan komponen media dengan menggunakan magnetic stirer kurang lama sehingga media yang di dapat belum benar-benar homogen. c. Pemasakan media yang kurang matang sehingga komponen yang ditambahkan terutama agar-agar belum tercampur dengan baik, d. Pengambilan media dari autoklaf ketika sterilisasi terlalu cepat sehingga media banyak yang gagal ditandai dengan penutup media yang rusak ketika pengambilan. Sterilisasi alat dan media Untuk mendapatkan media yang baik harus didukung dengan proses sterilisasi alat dan media yang baik pula, Sterilisasi adalah suatu proses untuk mematikan semua organisme yang terdapat pada atau di dalam suatu benda. Dalam praktikum pembuatan media, sterilisasi yang dilakukan meliputi sterilisasi alat-alat penanaman dan media tanam. a. Sterilisasi alat-alat penanaman Alat-alat tanam yang disterilisasi meliputi : Pinset, scapel, Petridish, Botol-botol kultur. Sterilisasi pada alat tanam dilakukan dengan sterilisasi fisik melalui pemanasan maupun sterilisasi mekanik dan kimawi. Sterilisasi mekanik dan kimiawi dilakukan dengan mencuci alat-alat menggunakan sabun yang mengandung bahan kimiawi. b. Sterilisasi media tanam Sterilisasi media tanam dilakukan dengan sterilisasi fisik, yakni dengan pemanasan menggunakan autoklaf. Media tanam yang telah dimasukkan dalam botol kultur selanjutnya ditata pada rak
  21. 21. autoklaf dan dimasukkan ke dalam tabung autoklaf. Pada prinsipnya, sterilisasi autoklaf menggunakan panas dan tekanan dari uap air. Temperature sterilasi biasanya 121o C, tekanan yang biasa digunakan antara 15-17,5 psi (pound per square inci) atau 1 atm selama 45 menit. selanjutnya setelah 45 menit media dikeluarkan dan ditata dalam rak kultur diruang steril. Keberhasilan dan kegagalan sterilisasi bisa diakibatkan adanya salah satu atau beberapa kunci pada autoklaf yang tidak menutup dengan sempurna sehingga tekanan yang timbul dari autoklaf bocor ke luar. Kegagalan sterilisasi akibat sebelum tekanan dalam autoklaf menurun dan semua air yang ada di autoklaf belum habis autoklaf sudah terbuka sehingga dapat menimbulkan ledakan atau kerusakan klep pengatur tekanan pada autoklaf. Kegagalan sterilisasi dapat dihindari dengan jalan mengikuti semua ketentuan dan prosedur pelaksanaan sterilisasi meliputi penggunaan alat dan pelaksanaan prosedur sterilisasi. 1) Kesimpulan Dan Saran a. Kesimpulan Dalam pembuatan media sterilsasi alat yang dibutuhkan harus steril dan terbebas dari jamur dan bakteri Faktor penyebab kegagalan dalam sterilisasi alat dan pembuatan media kultur antara lain karena alat yang digunakan tidak steril ZPT yang digunakan harus sesuai yang dan memiliki takaran yang tepat untuk perlakuan. b. Saran Alatnya harus lebih steril dan bebas dari jamur dan bakteri Seharusnya lebih teliti lagi dalam pembuatan media kuljar
  22. 22. DAFTAR PUSTAKA Anonim. 2008. Kultur Jaringan. http://id.wikipedia.org/wiki/Kultur_jaringan. Diakses tanggal 15 Desember 2012 jam 18.00 wib. Hendra, T. 2007. Kultur Jaringan. http://lelos66.com.htm. Diakses pada tanggal 16 desember 2012 Hidayat. 2002. Respon Subkultur Pisang Canvedish Terhadap Naphtalene Acetic Acid dan Benzil Aminopuryn. Buletin Pertanian dan Peternakan. Vol 3(5):1-10. Nugroho, A dan Sudito. 2000. Teknik Kultur Jaringan. Jakarta: Penebar Swadaya. Rahardja, P.E. 1988. Kultur Jaringan Teknik Perbanyakan Tanaman Secara Modern. Panebar Swadaya. Jakarta T . Herawan dan M. Na”iem. 2006. pengaruh Jenis Madia dan Konsentrasi ZPT Kinetin Terhadap Perakaran Pada Kultur Jaringan Cendana ( Santalum album Linn ). Agrosains Volume 19 ( 2 ) : 198. Wetherel, D.F. 2008. Propagasi Tanaman Secara In Vitro. Avery Publishing Group Inc. New Jersey. Yuniastuti, Endang. 2012. Petunjuk Praktikum Kultur Jaringan. Surakarta:uns Press Yusnita. 2003. Kultur Jaringan. www.bioteknologi-unibraw.ac.id. Diakses pada 18 Desember 2012.

×