Dosificación del sistema del complemento y su importancia en patología autoinmune

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Dosificación del sistema del complemento y su importancia en patología autoinmune

  1. 1. DOSIFICACIÓN DEL COMPLEMENTO. IMPORTANCIA EN PATOLOGÍA AUTOINMUNE Por: Sofía Jaramillo Q.
  2. 2. OBJETIVOS GENERALES: ESPECÍFICOS: • Identificar la relación de las concentraciones plasmáticas de los componentes del sistema del complemento con patologías de etiología autoinmune. • Conocer los procesos de evaluación sérica del complemento. • Vincular su papel en la génesis de diversas patologías.
  3. 3. CONOCIMIENTOS PREVIOS • Sistema del Complemento: concepto, constituyentes, funciones, importancia. • Concepto y variedades de inmunocomplejos. • Concepto de Patología Autoinmune.
  4. 4. COMPONENTES Pp. Vía Clásica y del MAC Pp. Vía Alternativa (Factores) Pp. Reguladoras Receptores del Complemento
  5. 5. UTILIDAD MÉDICA Orientación diagnóstica en procesos mediados por inmunocomplejos Valoración de la actividad de enfermedades por inmunocomplejos • ↓Inmunocomplejos=Consumo del complemento Interpretación en el contexto de la situación clínica del pcte. ÍNDICE CATABÓLICO: 2% Déficit en los componentes iniciales de la Vía Clásica (C1, C4, C2) en asociación con Enfermedades Autoinmunes
  6. 6. CONSIDERACIONES SOBRE LOS RESULTADOS • Índice Catabólico: 2% • Algunas de las proteínas que conforman el sistema del complemento fungen como Reactantes de Fase Aguda. • Función diversa en los diferentes compartimentos corporales. • ↓ del nivel del complemento avala la sospecha de su participación en daño tisular, mas no lo prueba. • Nivel normal del complemento no excluye su participación en injuria tisular. • ↓ de los componentes de una vía hacen presumir que ésta se encuentra activada y media la agresión (no se requiere conocer los niveles de todos los componentes).
  7. 7. MEDICIÓN DE LOS FACTORES DEL COMPLEMENTO A. Inmunoquímico (Búsqueda como Ag) RID Nefelometría Valoración Funcional Características: Altamente específicos Fáciles de realizar (suero o plasma) Vías Procedimientos: Vía Clásica Vía Alternativa Menor costo y tiempo No determinan funcionalidad No detectan niveles bajos (desde 10µg/ml) TEST CH50 (Actividad Hemolítica Total) Actividad Funcional Aislada Productos de Degradación ELISA (10-20ng/ml) Ac. Monoclonales
  8. 8. NIVELES DE COMPLEMENTO MEDIANTE ENSAYOS ANTIGÉNICOS: VÍA CLÁSICA Y ALTERNATIVA • Materiales: – Muestra de suero o plasma a <(-20°C) – Suero proteico estándar (estabiliza) – Equipos de RID • Procesamiento: – RID: • Tca. Mancini (exceso de Ac., más exacto) • Tca. Fahey (no exceso de Ac.)
  9. 9. VALORACIÓN FUNCIONAL: VÍA CLÁSICA (CH50) Y ACTIVIDAD AISLADA • Materiales: – – – – Eritrocitos de oveja (sensibles, Ag. Forssman para Ac. De conejo) Sol. De Alserver Buffer (barbital) Ac. Anti Forssman • Procesamiento: – – – – – – – – – – Extracción aséptica, solución de Alserver. Conservación hasta 6 semanas a 4°C. Centrifugación a 4°C, se descarta sobrenadante y capa leucocitaria. G. rojos en buffer, se lavan y sensibilizan con Ac. Disoluciones de suero del pcte. Unir muestra de EA Incubar a 37°C durante 1h. Agitando c/15’. Colocar en hielo + Barbital. Centrifugar 5’ a 800rpm, sobrenadante medir en espectrofotómetro a 540nm. Elaborar curva.
  10. 10. VALORACIÓN FUNCIONAL: VÍA ALTERNATIVA (AH50) • Materiales: – Suero humano (dilución 1:5) – Eritrocitos de conejo (EDTA+iones de Mg+2) Título (CH50/AH50)= dilución final de suero humano que lisa el 50% de los eritrocitos de oveja/conejo.
  11. 11. INTERPRETACIÓN CH50: Determinar ausencia de cualquiera de las partes del complemento, excepto C9. AH50 ineficiente: ↓ o ausencia de la properdina.
  12. 12. PRUEBA DE FIJACIÓN DEL COMPLEMENTO Capacidad del complemento de interaccionar con los complejos Ag-Ac. • Materiales: – Suero del paciente – Antígeno (soluble o particulado) – EA (eritrocitos de oveja sensibilizados) • Procesamiento: – Incubación de suero con 3-5 unidades CH50 • Positiva: Fijación (complemento es consumido) – Agregar EA – Incubación a 37°C por 1h. O toda la noche en frío (títulos mayores) • Positiva: No lisis • Negativa: Lisis
  13. 13. CONDICIONES TÉCNICAS pH Temperatura Tiempo Ionicidad Concentración de iones Ca+2 y Mg+2 Fragilidad osmótica de los eritrocitos utilizados
  14. 14. VALORES REFERENCIALES VÍA PROTEÍNA µg/ml VÍA CLÁSICA C1q C1r C1s C4 C2 80 50 50 600 20 VÍA ALTERNATIVA Factor B Factor D Properdín 250 5 25 VÍA DE LAS LECTINAS MBL C4 C2 1 600 20 VÍA COMÚN C3 C5 C6 C7 C8 C9 1300 80 75 55 55 59
  15. 15. VALORES REFERENCIALES • Nivel total del complemento en sangre: 41 a 90 unidades hemolíticas (CH50). • Nivel de C1: 16 a 33 mg/dL. • Niveles de C3: – hombres: 88 a 252 mg/dL. – mujeres: 88 a 206 mg/dL. • Niveles de C4: – hombres: 12 a 72 mg/dL. – mujeres: 13 a 75 mg/dL.
  16. 16. ACTIVACIÓN (CONSUMO) PATOLÓGICO DEL SISTEMA DEL COMPLEMENTO Ac. Anormal Complejo Inmune Material Extraño Neoantígeno del Sistema del Complemento (MAC)
  17. 17. DISMINUCIÓN DEL COMPLEMENTO PRIMARIA O CONGÉNITA • • • • • • LES Angioedema hereditario Fiebre mediterránea familiar Vasculitis por urticaria GMN Inmunodeficiencia combinada grave • Hipogammaglobulinemia ligada al sexo • Infecciones recurrentes SECUNDARIA O ADQUIRIDA • Enfermedades asociadas a Artritis • Enfermedades asociadas a vasculitis • Enfermedades asociadas a nefritis
  18. 18. DISMINUCIÓN DEL COMPLEMENTO: PUNTUALIZACIONES ↓C1q: Aclaramiento inadecuado de células apoptósicas ↓C4 o CR1/CR2: Fallo en la selección negativa de LB ↓C3 y C4: LES (monitorización)
  19. 19. PATOLOGÍAS CON VINCULACIÓN DEL SISTEMA DEL COMPLEMENTO ↓ Primaria o Congénita • • • • • • LES Angioedema hereditario Fiebre mediterránea familiar Vasculitis por urticaria GMN Inmunodeficiencia combinada grave • Hipogammaglobulinemia ligada al sexo • Infecciones recurrentes ↓Secundaria o Adquirida • Enfermedades asociadas a artritis • Enfermedades asociadas a vasculitis • Enfermedades asociadas a nefritis
  20. 20. AVERIGUAR: • ¿Qué es el LES? • ¿Qué otros exámenes de laboratorio ayudan en su diagnóstico?
  21. 21. BIBLIOGRAFÍA • Balcells, A.; Soriano, M. La Clínica y el Laboratorio. 9na. Edición. Editorial Marín. Barcelona – España. 1973. • Henry, B.; et all. Laboratorio en el Diagnóstico Clínico. Editorial Marbán Libros. Madrid – España. 2010. • Kindt, T.; Goldsby, R.; Osborne, B. Inmunología de Kuby. VI Edición. Editorial Mc Graw-Hill. México D.F.-México. 2007. • Prieto, J. Yuste, J. La Clínica y El Laboratorio Balcells. 21era. Edición. Editorial Elsevier Masson. Barcelona – España. 2010. • Regueiro J., López C., González S., Martínez E. Inmunología. IV Edición Revisada. Ed. Médica Panamericana. Madrid - España. 2012. • Rojas, W., Anaya J., Aristizábal B., Cano L., Gómez L., Lopera D. Inmunología de Rojas. XV Edición. Corporación para las Investigaciones Biológicas. Medellín – Colombia. 2010.

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