Seminary biology

380 views

Published on

  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

Seminary biology

  1. 1. Retinal Protective Effects of Resveratrol via Modulation of<br />Nitric Oxide Synthase on Oxygen-induced Retinopathy.<br />Molecular Biology<br />Sneider A. Torres Soto<br />School of medicine<br />
  2. 2. INTRODUCTION<br />The Retinopathy of prematurity (ROP) is a disease that affects immature vasculature in the eyes of premature babies.<br />
  3. 3. INTRODUCTION<br />The resveratrol is a phytoalexin produced by a variety of plants such as grapes, peanuts, and berries in response to stress, injury, ultraviolet irradiation,and fungal infection.<br />
  4. 4. INTRODUCTION<br />The resveratrol is a stimulation of NO production in endothelial cells to exert vasodilatory effect on blood vessels.<br />The NO Sintase are a family of eukaryotic enzymes that catalyze the production of nitric oxide (NO) from L-arginine. <br />
  5. 5. GENERAL OBJETIVE<br />Determine the protective effect of resveratrol in premature retinopathy.<br />
  6. 6. METODOS<br /><ul><li>Modelos Animales (in vivo)</li></ul>Ratas expuestas a condiciones hiperoxicas.<br />Grupos:<br />Grupo 1 normoxia.<br />Grupo 2 hiperoxia sin tratamiento.<br />Grupo 3 hiperoxia + resveratrol.<br />
  7. 7. METODOS<br /><ul><li>Tinción H & E</li></ul>Obtención de la muestra.<br />Tinción<br />Fijación<br />Microscopía. <br />
  8. 8. METODOS<br /><ul><li>Modelo animal (in vitro)</li></ul>Extracción de ojos de ratas postnatales.<br />GRUPOS:<br />Normoxia (N)<br />Hiperoxia (H)<br />Hiperoxia + resveratrol (HR)<br />
  9. 9. METODOS<br /><ul><li>MTT ensayo</li></ul>Proliferación y crecimiento celular.<br />Lectura de absorbancia.<br />ELISA (Prueba de inmunoabsorcion ligado a enzimas) <br />
  10. 10. METODOS<br /><ul><li>Extraccion de proteína de la retina.</li></ul>Separación de la retina del segmento anterior.<br />Congelación.<br />Centrifugación.<br />
  11. 11. METODOS<br /><ul><li>Western blot.</li></ul>Separación de proteínas por SDS-PAGE poliacramida gel electroforesis.<br />Transferencia de proteínas a PVDF.<br />Adición de anticuerpos de conejos y de ratas.<br />Detección del anticuerpo unido al anticuerpo.<br />
  12. 12. METODOS<br /><ul><li>Extracción de RNA y PCR tiempo completo.</li></ul>Separación de RNA del ADN Y de proteínas.<br />Transcripción inversa.<br />Obtención del DNA<br />
  13. 13. RESULTADOS<br /><ul><li>Modelo animal (in vivo)
  14. 14. Grupo N ninguna patologia.
  15. 15. Grupo H neovascularizacion retiniana, crecimiento fibrovascular, desprendimiento de retina
  16. 16. Grupo HR pequeñas fisuras en la membrana. </li></li></ul><li>RESULTADOS<br />A<br />B<br />C<br />
  17. 17. RESULTADOS<br /><ul><li>Expresión de iNOS, eNOS y nNOS en modelo in vivo Western blot y PCR</li></ul>Expresión de RNAm de la iNOS<br />Expresión de RNAm de eNOS y nNOS<br />
  18. 18. RESULTADOS<br />Viabilidad celular en el modelo in vitro.<br />Ensayo de MMT determina la concentración optima de resveratrol (5ug/ml).<br />
  19. 19. RESULTADOS<br /><ul><li>Cambios morfológicos en el modelo (in vitro).</li></ul>Grupo N Normal.<br />Grupo H inflamación celular. <br />Grupo HR aspecto similar al grupo N.<br />
  20. 20. RESULTADOS<br /><ul><li>Expresión de iNOS, eNOS y nNOS en modelo in vitro Western blot.</li></ul>Expresión de RNAm de la iNOS<br />Expresión de RNAm de eNOS y nNOS<br />
  21. 21. RESULTADOS<br />
  22. 22. RESULTADOS<br /><ul><li>Expresión de iNOS, eNOS y nNOS en modelo in vitro PCR.</li></ul>Expresión de RNAm de la iNOS<br />Expresión de RNAm de eNOS y nNOS<br />
  23. 23. DISCUSSION<br />
  24. 24. CONCLUSIONS<br />The resveratrol is a important compound in the premature retinophaty.<br />Should continue investigating the effects of resveratrol in various pathologies.<br />
  25. 25. CONCLUSIONS<br />To do a good dosage of oxygen therapy to prevent this disease.<br />Proper use of animal models can still provide great advances in modern medicine.<br />
  26. 26.
  27. 27. THANK YOU¡¡¡¡¡¡¡¡<br />

×