fMOST — fluorescence Mirco-Optical Sectioning
Tomography
фМОСТ — флуоресцентная Микро-Оптическая
Секционная Томография

По...
Micro-Optical Sectioning Tomography to Obtain a
High-Resolution Atlas of the Mouse Brain
Anan Li, Hui Gong, Bin Zhang, Qin...
MOST — разработка метода
Пробоподготовка
●

Крашение по
Гольжи-Коксу:
K2Cr2O7

●

К2CrO4

●

●

●

HgCl2

180 дней
Пробоподготовка
●

●

●

Дегитратация
Градиент ацетона и
спирта
Фиксация в
полимере
●

ERL-4221, DER763, NSA, DMAE
Процессинг изображений
●

Удаление периодического шума

●

Нормализация интенсивности

●

Калибровка
Статистика
●

36 млн. изображений (1390 x 1500 px x 8 bit)

●

15400 срезов

●

8 терабайт сырых данных

●

240 часов рабо...
fMOST — модификация MOST
●

●

●

●

Отказ от длительного
прокрашивания всего
мозга

●

Отказ от серийного
крашения срезов...
Выбранные полимеры
GMA — 2-гидроксиметил-метакрилат

●

LR white — полигидрокибисфенол-Адиметакрилат

●

HPMA — гидроксипр...
Оптимизация
●

Падение
флуоресценции

●

Полнота пропитки
25

200%

20

150%

15

100%

10

Дни

250%

50%

5

0%

0
HPMA
...
Оптимизация GMA
●

●

Понижение
температуры
полимеризации с
60º до 55º
Коррекция pH 0,1%
V этаноламина.

●

Удаление
ингиб...
fMOST – применение метода
Объекты:

Параметры и статистика:

 Мозг взрослой мыши
Thy1-GFP-M

o Ширина среза для GFP
и 14 ...
Трассировка аксонов
Пересчѐт существующей
аннотаций мозга:
 FPMA взросл.

 MRI 14 дн.
 MRI взросл.
 fMOST 14 дн.
fMOST
fMOST
fMOST
fMOST
fMOST
fMOST
fMOST
Upcoming SlideShare
Loading in …5
×

fMOST

893 views

Published on

Published in: Technology
0 Comments
0 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

No Downloads
Views
Total views
893
On SlideShare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
644
Actions
Shares
0
Downloads
2
Comments
0
Likes
0
Embeds 0
No embeds

No notes for slide

fMOST

  1. 1. fMOST — fluorescence Mirco-Optical Sectioning Tomography фМОСТ — флуоресцентная Микро-Оптическая Секционная Томография Получение полной структуры мозга мыши с одномикронным разрешением и трассировка аксонов по всему мозгу.
  2. 2. Micro-Optical Sectioning Tomography to Obtain a High-Resolution Atlas of the Mouse Brain Anan Li, Hui Gong, Bin Zhang, Qingdi Wang, Cheng Yan Development of a Plastic Embedding Method for Large-Volume and Fluorescent-ProteinExpressing Tissues Zhongqin Yang, Bihe Hu, Yuhui Zhang, Qingming Luo, Hui Gong Continuously tracing brain-wide long-distance axonal projections in mice at a one-micron voxel resolution Hui Gong, Shaoqun Zeng, Cheng Yan, Xiaohua Lv, Zhongqin Yang
  3. 3. MOST — разработка метода
  4. 4. Пробоподготовка ● Крашение по Гольжи-Коксу: K2Cr2O7 ● К2CrO4 ● ● ● HgCl2 180 дней
  5. 5. Пробоподготовка ● ● ● Дегитратация Градиент ацетона и спирта Фиксация в полимере ● ERL-4221, DER763, NSA, DMAE
  6. 6. Процессинг изображений ● Удаление периодического шума ● Нормализация интенсивности ● Калибровка
  7. 7. Статистика ● 36 млн. изображений (1390 x 1500 px x 8 bit) ● 15400 срезов ● 8 терабайт сырых данных ● 240 часов работы ● 3,6 мм3/час — скорость работы ● ● После реконструкции структуры: 1 x 0,33 x 0,33 мкм — размер вокселя
  8. 8. fMOST — модификация MOST ● ● ● ● Отказ от длительного прокрашивания всего мозга ● Отказ от серийного крашения срезов Выбор селективного флуоресцентного мечения нейронов Выбор трансгенных мышей, селективно экспрессирующих XFP ● Отсутствие методик фиксации флуоресцентных образцов большого объѐма Падение интенсивности флуоресценции при фиксации Объект — мыши с eYFP-H под контролем промотора Thy1.
  9. 9. Выбранные полимеры GMA — 2-гидроксиметил-метакрилат ● LR white — полигидрокибисфенол-Адиметакрилат ● HPMA — гидроксипропил-метакрилат ● Unicryl — метилметакрилат + стирен Отрабатываемые параметры ● Падение интенсивности флуоресценции ● Время пропитки целого мозга ●
  10. 10. Оптимизация ● Падение флуоресценции ● Полнота пропитки 25 200% 20 150% 15 100% 10 Дни 250% 50% 5 0% 0 HPMA GMA Unicryl LR White HPMA GMA GMA Unicryl LR White
  11. 11. Оптимизация GMA ● ● Понижение температуры полимеризации с 60º до 55º Коррекция pH 0,1% V этаноламина. ● Удаление ингибитора 4метоксифенола (тушитель)
  12. 12. fMOST – применение метода Объекты: Параметры и статистика:  Мозг взрослой мыши Thy1-GFP-M o Ширина среза для GFP и 14 дн. YFP 300 мкм  Мозг взрослой мыши Thy1-eYFP-H o Воксель 0,5x0,5x2 мкм  Мозг мыши 14 дн. Thy1-eYFP-H o Ширина для взрослой YFP 150 мкм o Воксель 1x0,8x2 мкм
  13. 13. Трассировка аксонов Пересчѐт существующей аннотаций мозга:  FPMA взросл.  MRI 14 дн.  MRI взросл.  fMOST 14 дн.

×