Tipos de Cromatografia

3,851 views

Published on

Published in: Engineering
0 Comments
4 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

No Downloads
Views
Total views
3,851
On SlideShare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
5
Actions
Shares
0
Downloads
131
Comments
0
Likes
4
Embeds 0
No embeds

No notes for slide
  • CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD
  • Tipos de Cromatografia

    1. 1. CROMATOGRAFÍA  QFB. DULCE MARÍA HERNÁNDEZ BERISTAIN
    2. 2. CONCEPTO: • Es una técnica de separación más usual basada en la diferente velocidad con que se mueven los solutos a través de un medio estacionario, mediante el flujo de un disolvente llamado eluente. • Las técnicas están asociadas al principio de retención selectiva. • Permite separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.
    3. 3. Posee:  Fase móvil: consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico).  Fase estacionaria: se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido.  Los componentes de la mezcla interaccionan en forma diferente con la fase estacionaria y con la fase móvil.  Los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van separando.
    4. 4. ORÍGEN: 1850 F.F. RUNGE (Químico ) descubrió la C. en Papel. 1903 – 1910 MIJAIL TSWETT (Botánico) describió la C. en Columna. Muestra: Hojas verdes Fase Estacionaria: Sulfato de Calcio Fase Móvil: Éter de petróleo.
    5. 5.  No se usa en sustancias que son insolubles en disolventes, o bien en las que se descomponen con el disolvente o con la fase estacionaria (f.e.) LIMITANTES:
    6. 6.  Fase fija, estacionaria, soporte o solvente.  Fase móvil, disolvente o eluente.  Compuesto o mezcla a separar. SISTEMA CROMATOGRÁFICO
    7. 7.  Todos los componentes de la muestra deben ser solubles en la fase móvil y deben interactuar con la fase estacionaria ya sea disolvente, adsorbiéndose o reaccionando en la forma química. REQUISITOS.
    8. 8. CRITERIOS PARA ESTUDIAR LA CROMATOGRAFIA: 1. Por su fase móvil (f.m.).  LIQUIDO.  GAS.  LÍQUIDO:  La segunda letra significa la Fase móvil.  C.L.S.  Cromatografía de adsorción  C.L.L  Cromatografía de reparto
    9. 9.  GAS  C.G.L.  Cromatografía de reparto.  C.G.S.  Cromatografía De Absorción. http://ocw.usal.es/ciencias-experimentales/analisis-aplicado-a-la-ingenieria- quimica/contenidos/course_files/Tema_10.pdf
    10. 10. 2. Por su Mecanismo de separación.  CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN.  CROMATOGRAFÍA DE REPARTO.  CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO.  CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN.
    11. 11. CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN FUNDAMENTO  Es un fenómeno superficie que se manifiesta por el aumento de la concentración del soluto en la interface que rodea al medio estacionario.  Se basa en el proceso adsorción-desorción de sustancia contenidas en la fase móvil sobre un sólido estacionario.
    12. 12.  La adsorción esta basada en la diferencia de polaridad entre moléculas de la mezcla y el sorberte.  Los compuestos de mayor polaridad se adsorben mas fuertemente y migran mas lentos que los no polares o de menor polaridad.  Se debe elegir la polaridad del disolvente igual a la de la muestra y adsorbentes activos para sustancia no polares y menos activas para sustancias mas polares.
    13. 13. CLASIFICACIÒN.  C.L.S: Cromatografía en columna y Cromatografía en capa fina.  C.G.S: Cromatografía en columna.
    14. 14. VARIABLES QUE AFECTA EN EL FENÒMENO DE ADSORCIÒN.  ADSORBENTES.  ELUENTES.  SOLUTOS O MUESTRAS.
    15. 15. CROMATOGRAFÍA DE REPARTO  La separación de una mezcla soluto es función de la distribución de las moléculas de éstos entre una fase estacionaria líquida, soportada sobre un sólido, y una fase móvil o eluente del sistema.
    16. 16. FASE MÓVIL:  C.L.L.  Se lleva a cabo en papel, capa fina y en columna.  La fase estacionaria puede ser: silica gel, celulosa caprolactana, alumina, etc.  C.G.L.  La fase estacionaria, se debe elegir la que presente una estructura análoga a las sustancias que componen la muestra.
    17. 17. CROMATOGRAFÍA EN PAPEL CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
    18. 18. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
    19. 19.  Baja volatilidad sobre el soporte sólido.  El soporte debe poseer gran superficie específica.  Tamaño de partícula uniforme. CONDICIONES DE LA FASE MÓVIL.
    20. 20. SOPORTES. DISOLVENTES POLARES (F.E.) ACIDO SALICÍLICO, GEL DE SÍLICE. ALCOHOLES, AGUA, GLICOLES, NITROBENCENO. TIERRAS DE INFUSORIOS, ALMIDÓN, CELULOSA CAPROLACTAMA, VIDRIO. AGUA, LÍQUIDOS ORGÁNICOS. POROPAK. AGUA, LÍQUIDOS ORGÁNICOS. FASE MÓVIL DISOLVENTE PURO O MEZCLA DE DISOLVENTES.
    21. 21. CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSION.  Esta técnica es útil en la separación de especies de peso molecular elevado.  Se basa en la separación de los diferentes volúmenes moleculares de los solutos.  El tiempo de elusión es proporcional al peso molecular de los mismos  Desusos: no se usa en compuestos de alto peso molecular.  Usos: C.C.F. y C. en columna.
    22. 22.  EMPAQUE:  Pequeñas partícula de 10 mμ de sílice o de algún polímero como:  Sephadex, con una red de poros uniforme, dentro de los cuales se difunden las moléculas de soluto y de disolvente.  Las moléculas dentro de los poros quedan atrapados y separados del flujo de la fase móvil. El tiempo de retención depende del tamaño de las moléculas.
    23. 23.  Moléculas de mayor tamaño al del poro del empaque son excluidas y no experimentan retención, es decir; viajan a la velocidad de la fase móvil.  Moléculas de menor tamaño al de los poros penetran en ellos, quedando atrapados por mas tiempo, son las últimas en salir de la columna.  Moléculas de tamaño intermedio, que penetran en los poros tienen un poder de penetración que dependen de su diámetro.
    24. 24. CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN
    25. 25. TIPOS DE EMPAQUE:  HIDROFÍLICOS:  Se usan con fase móvil acuosa. Se conoce como C. De filtración en gel.  HIDROFÓBICOS:  Usan disolventes orgánicos. Se conoce como C. de permeación en gel.
    26. 26. APLICACIONES:  Para análisis de azúcares, jugos enlatados, jugos naturales, resinas, etc.  Para separación de moléculas de peso molecular desde algunos cientos hasta varios millones  Permite estimar el peso molecular de polímeros de gran tamaño o de productos naturales.
    27. 27. CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO.  Comprende materiales de estructura porosa e insolubles que contienen grupos reactivos asociados a iones lábiles capaces de intercambiarse con otros iones presentes en el medio que lo rodea.
    28. 28. GRUPOS INTERCAMBIADORES  SULFONACIÓN:  Produce intercambio catiónico fuertemente ácido.  CLOROMETILACIÓN Y AMINAS TERCIARIAS  Produce la forma clorada de un intercambio aniónico fuertemente básico.
    29. 29.  El intercambio iónico, es un proceso mediante el cual los iones que se mantienen sobre un sólido poroso, prácticamente insoluble, se intercambian por iones de una solución que se pone en contacto con el sólido. FUNDAMENTO: Se utilizan: RESINAS NATURALES Y SINTÉTICAS
    30. 30. CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD Y DE INMUNOAFINIDAD.
    31. 31.  En la cromatografía de afinidad las bolas de gel que conforman el lecho de la columna presentan unido en su superficie un ligando, que es una molécula ante la que tiene afinidad una o más de las proteínas presentes en la mezcla a separar.
    32. 32.  Al atravesar la columna el ligando secuestra sobre la superficie de las bolas de gel la proteína afín, y deja pasar el resto.
    33. 33.  La elusión de la proteína afín se puede conseguir modificando las propiedades de carga del ligando (variando el pH hasta alcanzar su punto isoeléctrico, variando la fuerza iónica del solvente, etc...) con lo que se reduce la intensidad de la interacción hasta anularla.
    34. 34. CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD EN PROTEÍNAS
    35. 35.  En ocasiones la cromatografía de afinidad se realiza incubando el gel recubierto con el ligando directamente con la solución que contiene las proteínas a purificar.  Posteriormente se empaqueta la columna y se procede a la elusión, primero de las proteínas no unidas ('run throught') y posteriormente de las retenidas (eluido específico).
    36. 36. http://es.scribd.com/doc/16675209/6-EXTRACCION-Y-SEPARACION-DE- PIGMENTOS-VEGETALES

    ×