Successfully reported this slideshow.
We use your LinkedIn profile and activity data to personalize ads and to show you more relevant ads. You can change your ad preferences anytime.

طرق عزل الخلايا الجذعية

3,093 views

Published on

Published in: Science
  • Be the first to comment

طرق عزل الخلايا الجذعية

  1. 1. ‫تقديم‬: ‫غمكين‬‫ي‬ ‫القاض‬ ‫محمد‬ ‫و‬ ‫حسن‬ ‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫وفصل‬ ‫عزل‬ ‫من‬‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬‫املبادىء‬‫االساسية‬ ‫العالجية‬ ‫التطبيقات‬ ‫الى‬
  2. 2. ‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫عزل‬ ‫طرق‬ ‫الخواص‬‫على‬‫املعتمدة‬‫الفصل‬‫ق‬‫طر‬‫الفيزوكيميائية‬: ‫بواسطة‬‫الفصل‬‫التثفيل‬ ‫على‬‫اعتمادا‬ ‫الفصل‬‫ة‬‫ر‬‫القد‬‫االلتصاقية‬‫للخاليا‬
  3. 3. ‫بواسطة‬ ‫الفصل‬‫التثفيل‬ ‫ماهو‬‫؟‬ ‫التثفيل‬
  4. 4. Differential centrifugation *‫ف‬ ‫جيدا‬ ‫فصل‬ ‫تعطي‬ ‫ال‬ ‫تقليدية‬ ‫طريقة‬‫حالة‬ ‫ي‬ ‫بالكثافة‬ ‫المتقاربة‬ ‫والمواد‬ ‫الخاليا‬ *‫مخت‬ ‫بسرعات‬ ‫مرات‬ ‫عدة‬ ‫للتثفيل‬ ‫وتحتاج‬‫لفة‬ *‫للتثفيل‬ ‫اخرى‬ ‫طرق‬ ‫عدة‬ ‫تطوير‬ ‫تم‬ ‫التثفيل‬ ‫منها‬‫بمدروج‬‫التراكيز‬ Density gradient centrifugation
  5. 5. Density gradient centrifugation *‫الفصل‬ ‫انبوب‬ ‫ضمن‬ ‫متدرجة‬ ‫كثافته‬ ‫تكون‬ ‫ضمنه‬ ‫التثفيل‬ ‫يتم‬ ‫الذي‬ ‫المحلول‬.
  6. 6. ‫قسمين‬ ‫الى‬ ‫التثفيل‬ ‫من‬ ‫النوع‬ ‫هذا‬ ‫يقسم‬: • rate-zonal centrifugation “discontinuous” • Isopycnic centrifugation “continuous” Density gradient centrifugation 50 30 10
  7. 7. Density gradient centrifugation particles are separated solely on the basis of their density Isopycnic = same density
  8. 8. *‫التثفيل‬ ‫بواسطة‬ ‫الدموية‬ ‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫فصل‬:
  9. 9. ‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬‫الميزنشيمية‬ Mesenchymal Stem cell Adipose-derived stem cells: Isolation, expansion and differentiation ‫ميكانيكية‬ ‫طرقة‬ ‫انزيمية‬ ‫طرقة‬ ‫كريات‬ ‫حل‬ ‫محلول‬ ‫الحضن‬ ‫التثفي‬‫ل‬ ‫الزرع‬ ‫التحريك‬ ‫محلول‬ ‫مع‬ ‫الحضن‬ ‫الكريات‬ ‫حل‬ ‫التثفي‬‫ل‬ ‫الزرع‬ ‫التثفي‬‫ل‬ ‫الفلتر‬‫ة‬ ‫االنزيم‬ ‫اضافة‬ ‫ساعة‬ ‫لمدة‬ ‫الحضن‬
  10. 10. ‫الزرع‬ ‫على‬ ‫اعتمادا‬ ‫الفصل‬ ‫القدرة‬ ‫على‬ ‫اساسي‬ ‫بشكل‬ ‫تعتمد‬‫االلتصاقية‬‫للخاليا‬ ‫سطحية‬ ‫لجزيئات‬ ‫امتالكها‬ ‫نتيجة‬ ‫اكثر‬‫مايعزل‬‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫هو‬ ‫الطريقة‬ ‫بهذه‬‫الميزنشيمية‬ Mesenchymal Stem/Stromal Cells (MSC)
  11. 11. ‫الزرع‬ ‫على‬ ‫اعتمادا‬ ‫الفصل‬ ‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫تؤخذ‬‫الميزنشيمية‬Mesenchymal Stem‫من‬: ‫النقي‬ ‫بذل‬ ‫شحمي‬ ‫نسيج‬ ‫السري‬ ‫الحبل‬ ‫دم‬
  12. 12. ‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬‫الميزنشيمية‬ Mesenchymal Stem cell Adipose-derived stem cells: Isolation, expansion and differentiation ‫ميكانيكية‬ ‫طرقة‬ ‫انزيمية‬ ‫طرقة‬
  13. 13. ‫عزل‬ ‫طريقة‬: •‫النسيج‬ ‫عزل‬ •‫هضم‬‫بالكوالجيناز‬ •‫تثفيل‬ «‫تطفو‬ ‫الشحم‬ ‫من‬ ‫كبيرة‬ ‫كمية‬ ‫تحوي‬ ‫التي‬ ‫الخاليا‬» ‫حبيبات‬ ‫تشكل‬ ‫الجذعية‬ ‫السلفية‬ ‫الخاليا‬«‫رسابة‬»‫طبق‬ ‫على‬ ‫تزرع‬ ‫زرع‬.
  14. 14. ‫بالغشاء‬ ‫الفلترة‬ Membrane Filtration ‫خاصتي‬ ‫على‬ ‫تعتمد‬ ‫وبسيطة‬ ‫سهلة‬ ‫خالل‬ ‫المرور‬ ‫على‬ ‫والقدرة‬ ‫االلتصاق‬ ‫االغشية‬ ‫مسامات‬«‫الحجم‬» ‫الدموية‬ ‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫على‬ ‫طبقت‬CD34 “enrichment”
  15. 15. Affinity-based techniques ‫االلفة‬ ‫على‬ ‫المعتمدة‬ ‫الطرق‬ ‫رئيسي‬ ‫بشكل‬ ‫تقنتين‬ ‫تتضمن‬: Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) ‫الخلوي‬ ‫الجريان‬ ‫بواسطة‬ ‫الفرز‬ Immunomagnetic Cell Separation ‫المغناطيسية‬ ‫الجزيئات‬ ‫على‬ ‫المعتمد‬ ‫الفرز‬ ‫جزيئات‬ ‫على‬ ‫رئيسي‬ ‫بشكل‬ ‫تعتمدان‬marker‫سطحية‬ ‫اهمها‬ ‫من‬cluster of differentiation “CD”
  16. 16. Surface molecular marker
  17. 17. ‫الخلوي‬ ‫الجريان‬ ‫مستضد‬ ‫مع‬ ‫ضد‬ ‫ارتباط‬ ‫صورة‬ ‫للجهاز‬ ‫صورة‬
  18. 18. Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) :
  19. 19. Immunomagnetic Cell Separation Magnetic-activated cell sorting (MACS) ‫مع‬ ‫مرتبطة‬ ‫صغيرة‬ ‫مغناطيسية‬ ‫جزيئات‬ ‫تستعمل‬‫االضداد‬
  20. 20. ‫الطرق‬ ‫تقييم‬. ‫والفلترة‬ ‫والزرع‬ ‫التثفيل‬‫باالغشية‬: ‫بسيطة‬ ‫طرق‬–‫معقدة‬ ‫اجهزة‬ ‫تحتاج‬ ‫ال‬–‫ورخيصة‬- ‫واسع‬ ‫مستوى‬ ‫على‬ ‫تطبيقها‬ ‫يمكن‬ ‫التعطي‬‫ف‬ ‫اولية‬ ‫كخطوة‬ ‫تستخدم‬ ‫عالي‬ ‫نوعي‬ ‫فصل‬‫ي‬ ‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫عزل‬ ‫عملية‬ ‫المغناطيسي‬ ‫والفصل‬ ‫الخلوي‬ ‫الجريان‬: ‫االض‬ ‫من‬ ‫مزيج‬ ‫نستخدم‬ ‫ان‬ ‫يمكن‬ ‫للفصل‬ ‫عالية‬ ‫نوعية‬ ‫تعطي‬‫داد‬ ‫ومعدات‬ ‫ألجهزة‬ ‫تحتاج‬«‫الخلوي‬ ‫الجريان‬» ‫لل‬ ‫السطحية‬ ‫بالجزيئات‬ ‫جيدة‬ ‫معرفة‬ ‫هناك‬ ‫تكون‬ ‫الن‬ ‫تحتاج‬‫خاليا‬ ‫ل‬ ‫البيولوجية‬ ‫الخواص‬ ‫من‬ ‫تغير‬ ‫قد‬ ‫المغناطيسية‬ ‫الجزيئات‬‫لخاليا‬
  21. 21. ‫مائيين‬‫ين‬‫ر‬‫طو‬ ‫على‬‫املعتمدة‬ ‫فصل‬ ‫تقنية‬ATPS Aqueous Two-Phase Systems (ATPS) ‫غير‬ ‫مائيين‬ ‫وسطين‬ ‫وجود‬ ‫على‬ ‫تعتمد‬ ‫استخالص‬ ‫تقنية‬‫مزوجين‬ polymer–polymer and polymer–salt systems. Most commonly used polymers include : polyethylene glycol (PEG) and dextran salts are phosphates, sulfates, and citrates
  22. 22. defined by their physicochemical properties such as hydrophobicity, size, and net surface charge ‫العملية‬ ‫لتحسين‬ ‫اضداد‬ ‫اضافة‬ ‫يمكن‬.
  23. 23. based on cellular morphological and biophysical differences such as mass, charge, size, density, shape, and rigidity. FFF is achieved within an empty capillary channel by the combined action of a transporting laminar flow of mobile phase and a field that is applied perpendicularly to the flow Field Flow Fractionation “FFF”
  24. 24. ‫التثفيل‬ ‫والفلترة‬ ‫ع‬‫ر‬‫الز‬ ‫املغناطيسية‬‫والجزيئات‬ ‫ي‬‫الخلو‬ ‫الجريان‬ ‫وطريقة‬ ‫االستخالص‬ATPS ‫على‬‫معتمدة‬‫طريقة‬Field Flow Fractionation “FFF” ‫التثفيل‬ ‫والفلترة‬ ‫ع‬‫ر‬‫الز‬ ‫املغناطيسية‬‫والجزيئات‬ ‫ي‬‫الخلو‬ ‫الجريان‬ ‫وطريقة‬ ‫االستخالص‬ATPS ‫على‬‫معتمدة‬‫طريقة‬Field Flow Fractionation “FFF” ‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫ل‬‫عز‬‫ق‬‫وطر‬ ‫تقنيات‬

×