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  1. REPRODUCCIÓN ARTIFICIAL ING ROCIO ELIZABETH CHAPA TUME
  2. UTILIZACIÓN DE GLÁNDULAS PITUITARIAS PARA LA REPRODUCCIÓN DE PECES La reproducción de peces artificial o semiartificialmente, se requiere usar productos químicos (u hormonas*) que juegan un papel decisivo en la ovulación, la maduración final de los huevos latentes.
  3. FORMAS DE PROPAGACION ARTIFICIAL Las formas de propagación artificial que se practican en las distintas partes del mundo varían según las condiciones locales y los medios disponibles. Se puede comenzar con la recogida y cría de huevos, larvas o alevines producidos naturalmente o con la producción de huevos por inducción artificial de la puesta, siguiendo luego con la fertilización bajo control, la incubación y la cría de larvas y alevinos.
  4. Recogida y cría de huevos fertilizados, larvas y alevines Con este procedimiento, la intervención artificial consiste en: 1) Recoger huevos, larvas y alevinos; 2) Protegerlos contra sus enemigos naturales y contra los factores ambientales desfavorables; 3) Criar las larvas hasta obtener alevinos, y 4) Distribuir estos para su siembra en diferentes masas de agua.
  5. Recogida y cría de huevos fertilizados, larvas y alevines En primer lugar, la semilla recogida no suele ser pura, sino una mezcla de varias especies, algunas de las cuales pueden ser depredadoras o indeseables, y no es fácil separar las diversas especies, sobre todo en las fases iniciales
  6. Recogida y cría de huevos fertilizados, larvas y alevines En segundo lugar, para la recogida de semilla con este sistema se requiere mucha mano de obra y hacen falta cuidados especiales para la manipulación y el transporte. Otro inconveniente es que no se conocen los progenitores y apenas es posible mejorar la población.
  7. Obtención de huevos fertilizados Es posible conseguir huevos fertilizados de una especie totalmente libres, o casi, de huevos de otros peces. Los huevos así obtenidos se incuban bajo control y las larvas que nacen pueden criarse hasta la fase de alevinos, teniendo presente las necesidades de la especie en cuestión. El objetivo es conseguir, hasta el máximo de lo posible, un buen índice de supervivencia y pececillos que crezcan bien y estén sanos. Los huevos fertilizados pueden conseguirse de distintas maneras.
  8. Obtención de huevos fertilizados sin tratamiento de hormonas Para conseguir huevos fertilizados sin recurrir al tratamiento con hormonas, pueden emplearse los métodos siguientes:  Recoger huevos de peces que desovan en nidos colocando nidos artificiales en su lugar donde los peces acuden a desovar naturales  Imitar las condiciones naturales de desove en estanques artificiales, preparando nidos o esterillas de hierba que sirvan de colectores e induzcan a los reproductores al desove
  9. Obtención de huevos fertilizados sin tratamiento de hormonas  Hacer agujeros artificiales en las paredes de los terraplenes, para que desoven los peces  Colocar “refugios” o “receptáculos” para el desove, como tambores o bidones.  Recoger en los lugares donde los peces acuden a desovar, durante la temporada de desove, masas de huevos, “cintas de huevos” o huevos puestos en nidos de espuma.
  10. Técnicas empleadas para obtener huevos fertilizados y larvas para incubación y cría bajo control
  11. Recogida de huevos fertilizados y larvas en un río
  12. Desove artificial de peces maduros recogidos en su ambiente natural
  13. 2) Nudo doble, dejando sueltos los extremos 3) Punto transversal 1) Tres primeros puntos 4) Nudo final A) Desove artificial sobre una mesa B) Desove artificial en la mano C) Obtención de semen
  14. OBTENCION DE LOS PRODUCTOS SEXUALES
  15. MATERIALES A USAR
  16. Obtención de huevos fertilizados induciendo la puesta con un tratamiento de hormonas Ello puede conseguirse con una de las dos técnicas siguientes: a) induciendo el desove en tanques pequeños mediante administración de gonadotrofina coriónica humana b) induciendo el desove en tanques pequeños o en cajas rectangulares hechas con paño de red de malla fina instalados en estanques, mediante administración de hormonas pituitarias de peces.
  17. Obtención de huevos fertilizados induciendo la puesta con un tratamiento de hormonas Las técnicas mencionadas son sencillas y poco costosas, no requieren instalaciones ni instrumentos complicados y no conllevan las dificultades y riesgos que se encuentran en la fertilización artificial. Por ello, son muy utilizadas para la propagación artificial de los peces.
  18. Fertilización artificial y cría de las larvas nacidas Los productos sexuales maduros que son necesarios para la fertilización artificial pueden obtenerse por uno de los dos métodos siguientes: a) Se capturan los peces en sus nidos naturales durante la puesta natural y se procede a hacer salir artificialmente los productos sexuales (huevos y esperma).
  19. Fertilización artificial y cría de las larvas nacidas b) Se administra a los reproductores elegidos gonadotrofina humana o extracto de pituitaria de peces y, cuando están plenamente maduros, se hacen salir artificialmente los productos sexuales . Los huevos fertilizados conseguidos por fertilización artificial se incuban y crían bajo control hasta obtener alevinos, asegurando así un elevado índice de supervivencia y un buen crecimiento.
  20. Desove inducido por hipofisación .
  21. Desove artificial tras hipofisación inicial .
  22. Tecnología para la propagación artificial
  23. Etapas necesarias en la propagación artificial La propagación artificial de los peces supone una serie de actividades que son semejantes en varios aspectos para las diversas especies pero difieren en otros. Las principales actividades que han de realizarse en el proceso de propagación artificial de peces son las siguientes: a) Captura de reproductores en sus nidos naturales, b) Selección de reproductores de poblaciones naturales para el desove natural o para tratarlos con hormonas, c) Cría de los reproductores
  24. Etapas necesarias en la propagación artificial d) Inducción del desove natural con tratamiento de hormonas o sin tratamiento, e) Obtención artificial de productos sexuales maduros con tratamiento de hormonas o sin tratamiento, f) Fertilización artificial, g) Incubación y eclosión, y h) Cría de larvas, alevinos.
  25. La técnica que ha de aplicarse para la propagación de una especie determinada depende de: a) Los hábitos de desove de esa especie, b) Las condiciones localmente existentes o posibles, c) Las instalaciones, equipo e instrumentos de que se dispone, y d) el número y competencia del personal disponible para los trabajos de propagación.
  26. Inducción de la ovulación y/o el desove La inducción de la ovulación y el desove por hipofisación es una especie de “atajo” en el proceso natural. Con la técnica de hipofisación, se inyectan en los peces, para determinar la ovulación final, hormonas gonadotróficas extraídas de la pituitaria de otros peces (donantes).
  27. Para la hipofisación se utilizan glándulas pituitarias de peces donantes, recién extraídas o conservadas. Para conseguir el desove, es preciso que esas glándulas tengan almacenada una cantidad suficiente de hormonas gonadotróficas. Los peces inmaduros tienen en su pituitaria poca gonadotrofina, mientras después de la puesta la pituitaria de los reproductores queda totalmente vacía de gonadotrofina. El contenido de gonadotrofina alcanza el nivel más elevado en los peces maduros cuyas gónadas han llegado o están a punto de llegar a la fase de reposo y se mantiene alto durante dicha fase. Como es también la gonadotrofina la que estimula las migraciones para el desove, la pituitaria de los peces durante esas migraciones tiene menor contenido de gonadotrofina. En vista de esas diferencias, es importante saber escoger el momento adecuado para extraer las glándulas pituitarias.
  28. Dosificación En la ovulación natural, el pez puede regular con exactitud la dosis de su propia hormona que necesita. En la hipofisación artificial, cuando se inyectan hormonas de otra procedencia, los desperdicios son de ordinario considerables. Ello se debe principalmente a la dificultad de establecer la dosis exacta, con el resultado de que en general se inyecta a los reproductores mayor cantidad de hormonas de la que necesitan.
  29. Dosificación La dosis efectiva depende del grado de “preparación” de la hembra, y de su edad, talla, sensibilidad, etc. Generalmente las dosis son dos:  Introductiva o preparatoria  Decisiva o final.
  30. Cuando los reproductores han estado en la fase de reposo por largo tiempo, se les administra una única dosis completa (100 por ciento). La dosis preparatoria debe ser un 10 por ciento de la dosis total. Si ha de administrarse una segunda dosis preparatoria, se inyecta de nuevo sólo un 10 por ciento de la dosis total. En general, la dosis total es de unos 2,5–3 mg (1 glándula) de hipófisis por kg de peso, si se trata de reproductores de más de 5 kg; 1,5 mg (media glándula), para peces de talla mediana (2–5 kg); y 0,75 mg (un cuarto de glándula), para los peces menores (0,5–2,0 kg). Conviene evitar una dosis excesiva en la inyección preparatoria, porque puede determinar una ovulación parcial y trastornar la secuencia normal de la puesta.
  31. A) Marca de identificación B) Dosis preparatoria C) Orificio genital saturado D) Dosis decisiva E) Se inyecta al macho extracto de pituitaria F) Hembras G) Machos
  32. Entre la dosis preparatoria y la decisiva hay que dejar un mínimo de 14 h, pero puede esperarse hasta un máximo de 24 h, y en rarísimos casos hasta 48. Cuando se requiere más de una dosis preparatoria, el intervalo entre las dosis ha de ser de 24 h. A los machos, por lo general, se les administra una sola dosis de hormona, de ordinario al mismo tiempo que se inyecta a las hembras la dosis decisiva. Es importante no administrar antes la hormona a los machos, porque podrían eyacular antes de que las hembras estén listas para ovular.
  33. La dosis de gonadotrofina se expresa en miligramos o en número de glándulas pituitarias secadas en acetona. La glándula pituitaria secada en acetona. Una glándula de ese tamaño es la que se emplea como unidad cuando la dosis se expresa en número de glándulas. El sistema de dosificar las glándulas en unidades es fácil de usar. Para preparar la dosis se toman glándulas de tamaño aproximadamente igual. El otro método de cálculo de la dosis (en peso) es más difícil, pero es sin duda alguna más preciso. Un pequeño exceso de hormona en la dosis decisiva no causa ningún perjuicio al pez. En general se administra una dosis superior en 10–15 por ciento a la estrictamente necesaria, para mayor seguridad. Como dosis total (100 por ciento) suelen administrarse de 1 a 1,5 glándulas (es decir, 3,0–4,5 mg) por kg de peso de la hembra. Si la dosis calculada es de más de cinco glándulas, se añade otra “para el mortero”.
  34. Si se dispone de glándulas pituitarias pulverizadas, será necesaria una buena balanza o una cucharilla de volumen conocido para medir la dosis exacta. La pituitaria seca vendida ya en polvo puede adulterarse fácilmente con tejido cerebral. Por ello, se aconseja a los piscicultores que compren siempre la hipófisis que necesiten en centros que merezcan confianza. La dosis decisiva (única) recomendada para los machos es de 0,5 glándulas (1,0–1,5 mg) por kg de peso, independientemente de la longitud. Téngase presente, sin embargo, que no es necesario administrar hormonas a los machos que estén ya vertiendo gotas de semen.
  35. Al calcular la dosis decisiva conviene ser siempre un poco liberales. Un buen principio práctico es no administrar demasiada hormona en la inyección preparatoria y no administrar demasiado poca en la dosis decisiva. Cuando la dosis decisiva ha de administrarse en dos o tres veces, el intervalo entre las inyecciones no debe ser superior a 6–8 h.
  36. H) Se captura una hembra madura I) Se cortan los puntos K) Se extrae el semen J) Se desova artificialmente N) Se añade solución de carbamida O) Se remueve durante 3–5 min P) Se añade más solución de carbamida y se remueve Q) Se cambia la solución de carbamida varias veces R) Se echan los huevos en una solución de tanino
  37. Extracción de hormonas gonadotrópicas de las glándulas pituitarias Las hormonas gonadotrópicas que se inyectan para inducir la ovulación y/o desove se extraen de las glándulas pituitarias, en el momento de su extirpación o una vez transcurrido un cierto período de almacenamiento.
  38. Tales sustancias químicas, las gonadotropinas*, se producen y se acumulan en la glándula pituitaria de los peces, también llamada hipófisis*, durante el período que lleva a la madurez sexual.
  39. Esa pequeña glándula pituitaria se encuentra en la porción superior de la cabeza del pez, en el lado ventral del cerebro. Es muy fácil extraer dichas glándulas de los peces ya maduros, almacenarlas para su utilización posterior y extraerles las hormonas gonadotropinas, tal como se explica en los párrafos siguientes
  40. Es muy importante recolectar glándulas pituitarias de peces idóneos, para estar seguros de que esas glándulas contienen las suficiente gonadotropina como para que sean efectiva.
  41. Seleccione peces con las características siguientes:  Sexualmente maduros;  Preferiblemente vivos o recién muertos;  De una talla adecuada. Nota: casi todas las glándulas pituitarias disponibles comercialmente pertenecen a peces de gran tamaño como la carpa común y el salmón. También se pueden utilizar para la reproducción de otras especies.
  42. Se puede extraer la glándula pituitaria de peces que han muerto recientemente de dos maneras:  Cortando la cabeza  Sacando la glándula pituitaria por medio de un taladro.
  43. El uso de un marco de madera en el cual sujetar firmemente la cabeza mientras se corta o taladra, facilita mucho las operaciones.
  44. Extracción de la glándula pituitaria mediante un corte en la cabeza Para abrir la cabeza, proceda como se describe a continuación. a) Quite la parte superior del cráneo con una sierra o un cuchillo fuerte y afilado. b) Localice la glándula pituitaria en la masa cerebral. c) Sáquela cuidadosamente utilizando pinzas.
  45. .
  46. Extracción de la glándula pituitaria taladrando la cabeza .
  47. a) Seleccione o fabrique una mecha de perforación del tamaño adecuado. b) Localice el punto de perforación en la porción superior del cráneo, como se muestra en el dibujo. c) Taladre a través de la parte superior del cráneo, el cerebro y la base del cráneo, hasta llegar a la cavidad de la boca.
  48. d) Saque la mecha de perforación junto con el pequeño tapón de hueso y tejido que contiene. e) Retire este tapón de material de la mecha de perforación. f) Recorte la mitad superior de este tapón y separe con cuidado el tejido cerebral localizado en la base del cráneo desde la mitad inferior. g) Extraiga la glándula pituitaria con la ayuda de unas pinzas.
  49. Puede utilizar esta glándula inmediatamente o guardarla para usarla más adelante Nota: para asegurar que la glándula sale con el núcleo taladrado, seleccione el diámetro de la mecha de perforación de acuerdo con la talla del pez: los diámetros más adecuados son 2,5 cm para peces de hasta 1 kg, 4 cm para peces de entre 3 y 4 kg y de 5 a 6 cm para peces más grandes.
  50. Inducción de la ovulación
  51. Almacenamiento de glándulas pituitarias frescas A medida que vaya recogiendo las glándulas frescas de los peces, colóquelas en una pequeña botella que contenga acetona. Este producto químico actúa extrayendo el agua y la grasa de la glándula, por lo cual ayuda a endurecer y conservar la glándula y las hormonas que contiene.
  52.  Ponga todas las glándulas obtenidas el mismo día en una misma botella.
  53. Sustituya la acetona cada ocho horas aproximadame nte, durante un período total de 24 horas. A continuación saque toda la acetona.
  54.  Seque las glándulas endurecidas con papel secante. Coloque las glándulas secas en pequeños envases de vidrio y empújelas ayudándose con una bolita de algodón fino.  Cierre completamente el envase y séllelo con cera u otro material de sellado como, por ejemplo, parafina. Etiquételo, indicando el origen de las glándulas y la fecha de su recogida.
  55. Guarde estos envases sellados en una bolsa de plástico o en un desecador o recipiente estanco de almacenamiento, junto con productos químicos desecantes como, por ejemplo, gel de sílice o cloruro de calcio
  56. Las glándulas pituitarias secadas en acetona se pueden almacenar de esta forma durante un período de varios años, sin necesidad de refrigeración, siempre que se mantengan en un lugar seco. Las glándulas frescas también pueden guardarse en un congelador
  57. DOSIFICACION
  58. CARACTERISTICAS DE LOS PECES
  59. PROCEDIMIENTO DE DOSIS a) Obtenga el número de glándulas que necesite en base a la dosis de hormonas a utilizar.
  60. Glándulas pituitarias
  61. Se van a utilizar glándulas pituitarias secas para 34 hembras (peso medio 2 kg; dos inyecciones cada una) y 17 machos (peso medio 1,5 kg; una inyección cada uno); se necesitan las cantidades siguientes de glándulas secas: Hembras , primera inyección: Hembras , segunda inyección: Machos , una inyección: Total para las inyecciones: Calcule un margen de seguridad del 10 por ciento: Peso total requerido de glándulas se: 34 peces x 2 kg x 0.3 mg/kg = 20.4 mg 34 peces x 2 kg x 3.5 mg/kg = 238.0 mg 17 peces x 1.5 kg x 2.0 mg/kg =51.0 mg 309.4 mg 31.0 mg 340.0 mg Si el peso medio de una glándula es de 2,5 mg, requerirá 340 mg ¸ 2,5 mg = 136 glándulas pituitarias.
  62. (b) Prepare una solución salina del 0,65 por ciento: disuelva 6,5 g de sal común del tipo utilizado para cocinar en un litro de agua limpia. Puede utilizar agua hervida y filtrada o agua destilada. Utilice recipientes de vidrio limpios y mézcle bien. Mantenga esta solución en una botella de vidrio cerrada.
  63. (c) Calcule cuánta solución salina necesita, según le indiquen los manuales mencionados. Ejemplo Para el ejemplo anterior puede necesitar: hembras, primera inyección 1 ml/pez: 34 x 1.0 ml = 34 ml hembras, segunda inyección 1,5 ml/pez: 34 x 1.5 ml = 51 ml machos, una inyección 1,5 ml/pez: 17 x 1.5 ml = 26 ml Añada un 10 por ciento a estos volúmenes calculados de solución salina para compensar posibles pérdidas. En total necesitará 122 mililitros.
  64. (d) Triture el número requerido de glándulas en un mortero hasta formar una pasta o polvo fino. Ejemplo Para la primera serie de inyecciones se necesitan 20,4 mg + 10 por ciento = 20,4 mg + 21 mg = 22,5 mg de glándulas, o alrededor de 22,5 mg ¸ 2,5 mg = 9 glándulas finamente trituradas.
  65. (e) Mida el volumen requerido de solución salina al 0,65 por ciento y viértala en el mortero, por encima de la pasta/polvo de glándulas. Es mejor utilizar una jeringuilla para medir esos volúmenes tan pequeños. Ejemplo Para la primera serie de inyecciones, mida 34 ml + 10 por cien = 34 ml + 3,4 ml = 37,4 ml de la solución salina preparada.
  66. (f) Mezcle bien la solución salina y el material glandular para hacer que las hormonas gonadotrópicas del tejido glandular pasen al líquido. (g) Déjelo reposar o, aún mejor, utilice un pequeño centrifugador manual para separar el líquido superior (sobrenadante) de los trozos de material glandular.
  67. APLICAR INYECCIONES DE SOLUCIÓN HORMONAL A LOS PECES
  68. Los reproductores ya seleccionados se deben preparar para recibir la inyección hormonal. Utilice el procedimiento que se describe a continuación: (a) Por la mañana temprano, seleccione de los estanques de mantenimiento los reproductores machos y hembras que se van a inyectar ese día. Compruebe cuidadosamente que están listos para desovar. (b) Llévelos cerca del área de desove o al criadero. Manténgalos en una red o en un depósito con un buen suministro de agua, ambos sexos por separado.
  69. (c) Prepare los materiales necesarios: cantidades adecuadas de extracto de hormonas, un área limpia de trabajo, un tanque de recuperación, un estanque o red para guardar los reproductores. Cuando todo esté listo, prepare los peces. (d) Si fuera posible, anestesie los peces a los que va a inyectar utilizando entre 50 y 100 litros de una solución química adecuada;.
  70. Si el tamaño individual de sus peces no fuera uniforme, trátelos consecutivamente en lotes de peces de tallas similares. (e) Vigile los peces sedados en todo momento y, si fuera necesario, devuélvalos rápidamente a un lugar donde tengan agua bien aireada.
  71. A continuación proceda con la inyección del extracto hormonal. (a) Según el peso vivo de cada reproductor, llene una jeringuilla con la dosis exacta del extracto de glándula pituitaria que requiera. (b) Saque el reproductor del agua con un salabardo Coloque el pez suavemente sobre una superficie blanda y suave, por ejemplo, un pedazo de espuma de goma e inmobilícelo dentro de la red. .
  72. (c) Póngale despacio la inyección a un ángulo de 45° como sigue: si el pez no tiene escamas, por ejemplo, en el caso de las carpas espejo, aplique una inyección intramuscular debajo de la punta de la aleta dorsal o en el pedúnculo caudal, utilizando la presión de un dedo para evitar derramar el extracto hormonal; si el pez tiene escamas, por ejemplo, las carpas chinas e indias, administre la inyección en la cavidad corporal, detrás de la base de la aleta abdominal o bajo la base de la aleta pectoral, teniendo cuidado de insertar la aguja debajo de las escamas en lugar de a través de ellas.
  73. Dónde y cómo inyectar las hormonas
  74. Inmediatamente después de la inyección, vuelva a colocar el pez en agua bien aireada. Dependiendo del método de reproducción utilizado, el pez podría ser: Colocado en la red o depósito de mantenimiento en el que tiene lugar el desarrollo inicial de los huevos latentes; en ese caso se dará al pez una segunda dosis de hormonas para que los huevos alcancen la fase final de maduración durante el período de ovulación.
  75. Colocado en la zona preparada para recibir un cierto número de machos y hembras; el desove normalmente ocurre pocas horas más tarde. Maduración de los huevos El período de tiempo que se requiere para que los huevos ya desarrollados maduren totalmente (también conocido como período de ovulación) normalmente se indica como el número necesario de horas a la temperatura dada del agua. Se mide en grados-horas (gh).
  76. Durante el período de ovulación se debe medir la temperatura del agua (en °C) al final de cada hora y sumar estos valores de forma progresiva. Cuando se acerque al número de grados-horas requerido (véase el ejemplo a continuación), los peces están listos para el desove.
  77. Ejemplo Reproductores de carpa común reciben la inyección definitiva a las 20:00 horas. Se mide la temperatura del agua del tanque cada hora, con el siguiente resultado: A la mañana siguiente a las 6:00 horas, se alcanza un total de 239,5 grados-hora, muy cercano a la cifra requerida en este caso específico, entre 240 y 260. A partir de ese momento los peces se vigilan cuidadosamente.
  78. . El número de grados-hora necesario varía con:  las especies;  el tipo de tratamiento hormonal suministrado;  la talla de las hembras. El número de grados-horas necesario varía con:
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