Prácticas con Proteínas

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Prácticas con Proteínas

  1. 1. Proteínas 1
  2. 2. Objetivo:• Extraer la caseína de la leche y reconocer su naturaleza proteica
  3. 3. Materiales y sustancias:• Vaso de bohemia • Papel de filtro• Varilla de vidrio • Leche descremada• Mechero • Ácido etanoico 2.0 M• Soporte • Hidróxido de sodio al 10%• Tela metálica • Sulfato cúprico al 1%• Gradilla • Ácido nítrico concentrado• Tubos de ensayo• Termómetro
  4. 4. Fundamento teórico:• La leche es:• a) una emulsión de materia grasa (triglicéridos) en un medio acuoso.• b) una suspensión de materia proteica (caseína, albúmina, globulina) en un medio acuoso.• c) una solución acuosa de sales minerales y lactosa. Dentro contiene además lecitina, vitaminas, enzimas, nucleótidos y gases disueltos.
  5. 5. Componentes proteicos:• Caseína: conjunto de proteínas fosforadas. Constituye el 80% de los compuestos nitrogenados.• Proteínas del lactosuero: albúmina, globulina. Se insolubilizan por acción del calor antes de los 100ºC.• Proteosas- peptonas: glicoproteínas poco abundantes en la leche.
  6. 6. Caseína• Es una proteína de carácter ácido debido a su elevada proporción de aminoácidos ácidos (PI = 4.6). La caseína humana es mas rica en cistina y en glúcidos que en la vaca lo que la hace más apropiada para el bebé.• Reacciona con las bases formando caseinatos utilizados en la industria para la fabricación de colas y adhesivos. Tambien se utilizan en la industria textil.• Se precipita por acción de los ácidos. Esto puede ocurrir a través de la formación de acido láctico por acción bacteriana sobre la lactosa o mediante el agregado de un ácido hasta alcanzar el pH correspondiente a su punto isoeléctrico. La precipitación puede producirse por acción enzimática de la quimiotripsina.
  7. 7. Ensayos de Biuret y Xantoproteico• Permiten determinar el carácter proteico de la caseína. El ensayo de Biuret muestra la presencia de enlaces peptídicos.• El Xantoproteico identifica la presencia de restos aromáticos, en particular el grupo fenolico de la tirosina.
  8. 8. Procedimiento: 1ra parte Extracción• 1) Coloque aproximadamente 25ml de leche descremada en un vaso de bohemia.• 2) Caliente hasta aproximadamente 40ºC agitando con varilla de vidrio.• 3) Adicione ácido etanoico 2.0M (gota a gota) agitando en forma continua hasta coagulación total.• 4) Separe el coágulo de caseína del suero mediante filtración.• 5) Seque cuidadosamente la caseína con la ayuda del papel de filtro.• 6) Separe dos porciones del sólido obtenido de aproximadamente de 1 cm3 y colóquelas en dos tubos de ensayo.
  9. 9. 2da parte: Caracterización• a) Reacción de Biuret: Agregue sobre la caseína de uno de los tubos 20 gotas de NaOH al 10%. Luego agregue 2 gotas de solución de CuSO4 al 1%.• b) Reacción Xantoproteica: Agregue sobre la caseína del segundo tubo 10 gotas de HNO3 concentrado.
  10. 10. TUBO ENSAYO OBSERVACIONES 1 Biuret Color Violeta 2 Xantoproteico Color Amarillo
  11. 11. BBiuret Xantoproteico
  12. 12. Luego tomamos ciertas muestras y las hicimos reaccionar; estos fueron los resultados obtenidos: Muestra Biuret Xantoproteica Caseína + +Ovoalbúmina + +Aspartamo - - Gelatina + - Glicina - -
  13. 13. Reacción de Biuret1 2 3 4 5
  14. 14. Reacción de Biuret:• 1- Caseína• 2- Ovoalbúmina• 3- Gelatina• 4- Aspartamo• 5- Glicina
  15. 15. Reacción Xantoproteica1 2 3 4 5
  16. 16. Reacción Xantoproteica:• 1- Glicina• 2- Aspartamo• 3- Gelatina• 4- Ovoalbúmina• 5- Caseína
  17. 17. Proteínas 2
  18. 18. Objetivos:• Demostrar que mediante diálisis, las sales atraviesan la membrana y las proteínas quedan dentro.
  19. 19. Materiales:• Dializador• Gelatina + NaCl en solución acuosa• Vaso de Bohemia• NaOH al 10%• CuSO4 al 1%• AgNo3
  20. 20. PROTEÍNA NaCl
  21. 21. Procedimiento:• Coloque la solución acuosa de gelatina + NaCl dentro del dializador• Luego de un tiempo, para comprobar que la dialización se realizó, tomar 2 muestras de la solución del interior del dializador y 2 muestras de la solución exterior.• Hacer reaccionar una de las muestras del interior y una del exterior con Biuret; y, por consiguiente, las dos muestras restantes con AgNO3
  22. 22. Los resultados obtenidos son: Muestra Biuret AgNO3 Interior + -Exterior - +
  23. 23. EXTERIOR INTERIOR
  24. 24. CONCLUSIÓN:• Si bien en la muestra del interior también dio positiva con nitrato de plata, la muestra del exterior dio negativa con Biuret; por lo tanto se demuestra que las proteínas quedaron contenidas dentro del dializador y que el cloruro de sodio sí atravesó la membrana.
  25. 25. 6to M1• Katerin Sinich• Mariana Salaberry• Douglas Arrillaga• Viviana Bennasar

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