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Microbiología: Técnicas de diagnóstico rápido (detección de antígeno)

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  1. 1. TÉCNICAS RÁPIDAS DE DETECCIÓN DE ANTÍGENO
  2. 2. INFECCIÓN Diagnóstico etiológico (microbiológico) A) Detección del microorganismo B) Detección de la respuesta inmune del hospedador Visión directa Cultivo Detección de Ag Detección de genoma Serología Estudio de respuesta celular
  3. 3. Dx TARDÍO (salvo IgM). Seropositividad no implica infección actual. Útil en gérmenes no cultivables/difíciles de obtener. Valoración de estado inmune. Serología Complejidad técnica, personal adiestrado, infraestructura. Mínimo 2 horas. Género y especie. Posible cuantificación. No necesita viabilidad del germen. Detección de ADN/ARN No antibiograma. FP y FN. Análisis múltiple subóptimo. Rápido. Algunos muy sencillos. Identifica género +/- especie. No necesita viabilidad del germen. Detección de antígeno No siempre factible. LENTO Identificación de género y especie. Antibiograma . Cultivo Gérmenes que no se tiñen. Sólo formas y propiedades tintoriales (inespecífico). No antibiograma. Rápido. Sencillo. No necesita viabilidad del germen. Valoración de la muestra. Visión directa (tinciones habituales) Inconvenientes Ventajas Técnica
  4. 4. ¿En qué circunstancias nos pueden ser útiles las técnicas rápidas de detección de antígeno? <ul><li>Por su sencillez (  rapidez): Escasez de recursos, personal no especializado (“point of care testing”). </li></ul><ul><li>Por su rapidez: </li></ul><ul><li>Cuadro de presentación aguda (  gravedad)= situación de urgencia. </li></ul>El resultado del test dará lugar a un cambio (rápido) en el manejo del paciente: tto, medidas de aislamiento…
  5. 5. Técnicas de detección de antígeno Inmunofluorescencia Enzimoinmunoensayo (EIA) Inmunocromatografía (ICG) Aglutinación facilitada 3-4 h < 30 min < 30 min <1 a 3 h (según formato y automatización)
  6. 6. Fundamento: Antígeno : Molécula reconocida como no propia por el organismo, la cual es capaz de desencadenar una respuesta inmunitaria . Epitopo=determinante antigénico Sitio de unión al antígeno (región hipervariable) Anticuerpo : Proteína (inmunoglobulina) producida en respuesta a la estimulación por un antígeno, con el cual reacciona de forma específica Unión antígeno (Ag)-anticuerpo (Ab)
  7. 7. Haciendo visible lo invisible… 1. Aglutinación facilitada Aglutinación Ac MICROSCÓPICA Ag Partícula (látex) Aglutinación facilitada A SIMPLE VISTA <ul><li>Sencillo </li></ul><ul><li>Rápido </li></ul><ul><li>Problema:  S </li></ul><ul><li>(lectura requiere experiencia) </li></ul>
  8. 8. Haciendo visible lo invisible… 2. Marcado de anticuerpos Enlace covalente Trazador (DETECTABLE, MEDIBLE) = Enzima  color del producto de reacción: = Fluorocromo  fluorescencia: <ul><li>Inmunofluorescencia </li></ul><ul><li>Directa (IFD) </li></ul><ul><li>Indirecta (IFI) </li></ul>ELISA = Molécula lumínica  Luz: Quimioluminiscencia = ADN : Inmuno-PCR <ul><li>Otros: </li></ul><ul><li>Oro coloidal </li></ul><ul><li>Isótopo radiactivo </li></ul><ul><li>Etc </li></ul>Ag Fc
  9. 9. ELISA <ul><li>Microplaca: 2-3 h, adiestramiento. No observador-dpte. </li></ul><ul><li>Membrana: 30 min, sencillo </li></ul><ul><li>Enzimoinmunoensayos automatizados: 1,5-2 h </li></ul>Tutorial recomendado: http:// www.sumanasinc.com / webcontent / animations / content / ELISA.html
  10. 10. Inmunofluorescencia Más rápida Más artefactada Consume más tiempo Más nítida Permite el estudio simultáneo de varios Ag Requiere entrenamiento previo del técnico y el observador. Evaluación de la muestra Ig Anti Ag Ag IFDirecta Ag Ig Anti Ag Ig Anti Fc IFIndirecta
  11. 11. Inmunocromatografía <ul><li>Realización e interpretación sencillas (pero… interpretación observador dpte, “+ débil”) </li></ul><ul><li>Muy rápido </li></ul>
  12. 12. ¿Qué muestras nos son útiles? <ul><li>Foco de infección. </li></ul><ul><ul><li>Muestra representativa </li></ul></ul><ul><ul><li>Evitar contaminaciones </li></ul></ul><ul><li>Sangre </li></ul><ul><li>Orina: se concentra el Ag (hasta 50x respecto a suero) </li></ul>¡  !Patógenos que a su vez pueden ser parte de la flora comensal
  13. 13. ¿Qué microorganismos podemos detectar? (1) Tests comercializados <ul><li>Streptococcus pyogenes </li></ul><ul><li>Streptococcus agalactiae </li></ul><ul><li>Neumococo </li></ul><ul><li>Haemophilus influenzae: Ag capsular </li></ul><ul><li>Meningococo: Ag capsular </li></ul><ul><li>Chlamydia : Ag común </li></ul><ul><li>Neisseria gonorroheae </li></ul><ul><li>S. aureus : enterotoxinas </li></ul><ul><li>Bacillus cereus: enterotoxina </li></ul><ul><li>Helicobacter pylori </li></ul><ul><li>Clostridium difficile : toxina A/ toxinas A+B </li></ul><ul><li>E. Coli O157:H7 </li></ul><ul><li>Salmonella </li></ul><ul><li>Campylobacter </li></ul><ul><li>Legionella </li></ul><ul><li>Treponema pallidum </li></ul>Bacterias
  14. 14. ¿Qué microorganismos podemos detectar? (2) Tests comercializados Virus <ul><li>Gripe A y B </li></ul><ul><li>VRS </li></ul><ul><li>Parainfluenza 1, 2 y 3 </li></ul><ul><li>Adenovirus </li></ul><ul><li>Metapneumovirus </li></ul><ul><li>VVZ </li></ul><ul><li>VHS </li></ul><ul><li>V. del sarampión </li></ul><ul><li>V. de la parotiditis </li></ul><ul><li>Hepatitis B: HBsAg y HBeAg </li></ul><ul><li>HCV core Ag </li></ul><ul><li>HIV p24 </li></ul><ul><li>Rotavirus: Ag grupo VP6 </li></ul><ul><li>Adenovirus </li></ul><ul><li>Astrovirus </li></ul>
  15. 15. ¿Qué microorganismos podemos detectar? (y 3) Tests comercializados Hongos Criptococo: Cápsula/ glucuronoxil manano Aspergillus : galactomanano Candida : mananos Pneumocystis jiroveci Giardia Cryptosporidium parvum Entamoeba histolytica Plasmodium falciparum : HRP-2 Plasmodium spp: LDH y aldolasa Leishmania Wuchereria bancrofti Protozoos
  16. 16. <ul><li>Ejemplos de su aplicación práctica: </li></ul><ul><li>Diagnóstico de infección de tracto respiratorio inferior (IRTI) </li></ul><ul><li>Diagnóstico de meningitis aguda </li></ul>
  17. 17. Utilidad del diagnóstico rápido en IRTI <ul><li>Son útiles en dx rápido : </li></ul><ul><ul><li>Tinciones, detección de antígeno. </li></ul></ul><ul><li>Permiten: </li></ul><ul><ul><li>Ajustar tratamiento antibacteriano: empírico  dirigido </li></ul></ul><ul><ul><li>Indicar tto antivírico (influenza, VRS) </li></ul></ul><ul><ul><li>Medidas de aislamiento (VRS, TBC) </li></ul></ul><ul><ul><li>Declaración epidemiológica (Legionella , TBC) </li></ul></ul>
  18. 18. Diagnóstico rápido de meningitis aguda ¡¡¡URGENCIA TERAPÉUTICA!!! PL  LCR Bioquímica Microbiología <ul><li>Sugiere meningitis aguda bacteriana : </li></ul><ul><li>>2000 células/  l con predom. Pmn </li></ul><ul><li>Proteínas>200 mg/dl </li></ul><ul><li>Glucosa< 40% plasmática simultánea </li></ul><ul><li>A) Tinción de Gram: SIEMPRE </li></ul><ul><li>S: 60-90% Según : UFC/ml y tipo de germen . Si tto previo S  </li></ul><ul><li>E:  97% </li></ul><ul><li>B) Técnicas de detección de Ag: complementario </li></ul><ul><li>S: 50-100%, según prueba y bacteria </li></ul><ul><li>E: Variable: Evitar: orina (esp. neonatos), multiplex. Sí :preparación previa de la muestra. </li></ul>
  19. 19. ¿Por qué es mejor no usar orina? H. influenzae, S. pneumoniae: Colonización orofaringe. S. agalactiae, E. coli: Colonización periné neonatos “ un resultado  de detección de antígeno en orina puede deberse a colonizaciones bacterianas o a infecciones invasoras diferentes a la meningitis”
  20. 20. Conclusiones <ul><li>Utilidad de los tests rápidos de detección de Ag: </li></ul><ul><ul><li>Escasez de recursos </li></ul></ul><ul><ul><li>Urgencia dx </li></ul></ul><ul><ul><li>Cambio del manejo clínico del paciente en función del resultado. </li></ul></ul><ul><li>Debe confirmarse el dx en pacientes/enfermedades que lo requieran mediante las técnicas de referencia. </li></ul><ul><li>Resultado (-) no excluye. Debemos conocer las causas de falsos  para una interpretación adecuada. </li></ul>
  • AlexisFabreMorales

    May. 26, 2013

Microbiología: Técnicas de diagnóstico rápido (detección de antígeno)

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