TALLER DE                   METODOLOGÍA DE LA                     INVESTIGACIÓN     COMUNICACIÓN DEL TRABAJO            CI...
CÓMO ESCRIBIR UNA TESIS DE GRADO?
QUÉ ES UNA TESIS DE GRADO?        Un trabajo elaborado por los alumnos para la        obtención de su Título Profesional y...
NORMAS DE PRESENTACIÓN Y CONFECCIÓN DEL TRABAJO     FINAL (TESIS DE GRADO) DE LA LIC. EN BIOTECNOLOGÍA,        FAC. DE BIO...
Todo trabajo final constará de las siguientes partes y en el siguienteorden:   1) Información general   2) Cuerpo principa...
1. Información generala) El trabajo deberá ser escrito en hoja tamaño A4, a doble espacio y las páginas   deberán ir numer...
c) Página de agradecimientosd) Índicee) Nomenclatura empleadaf) Resumen                    2. Cuerpo principal o textoa) I...
3. Bibliografía                                          •   En el texto, las citas bibliográficas se                     ...
¿CÓMO DEBE ESTAR ESCRITA?Una tesis es un trabajo de investigación. El informe concierne a unproblema o conjunto de problem...
RESUMEN Debe ser una síntesis de la tesis: una descripción concisa del problema general (y particular) que se aborda, su m...
RESULTADOS Y DISCUSIÓN                       Los resultados y la discusión se combinan muy a menudo                       ...
BIBLIOGRAFÍASe trata de la presentación de una lista ordenada alfabéticamente por el apellidodel autor, de las obras citad...
COMUNICACIÓN EN LA     CIENCIA
Todo investigador debe escribir los resultados de suinvestigación, ya que el propósito final de unainvestigación científic...
FORMAS DE COMUNICACIÓN CIENTÍFICAArtículos científicos (“Scientific paper”)Artículos de revisión (“Review paper”)Comunicac...
Artículos científicos (“Scientific paper”)Es un trabajo de investigación original.Artículos de revisión (“Review paper”)Es...
Comunicaciones de Conferencias(“Conference report”)Resumen de una conferencia dada en un Congreso, puedecontener informaci...
Book of Abstracts
Presentaciones en Congresos (“Posters”)  Es una presentación visual de lo que se quiere  mostrar.  Objetivo: detallar part...
DETECTION OF ACYLHOMOSERINE LACTONES                                                                                      ...
Proteomic study of Rhodotorula mucilaginosa RCL-11 revealed differential                                                  ...
IDENTIFICACIÓN MOLECULAR DE HONGOS FILAMENTOSOS PRODUCTORES DE                            ESTATINAS AISLADOS DE LAS YUNGAS...
ibt          Biotecnología San Juan                          ARGENTINA                                                    ...
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Clase lc.comunicacion cientifica
Upcoming SlideShare
Loading in …5
×

Clase lc.comunicacion cientifica

1,019 views

Published on

0 Comments
1 Like
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

No Downloads
Views
Total views
1,019
On SlideShare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
1
Actions
Shares
0
Downloads
29
Comments
0
Likes
1
Embeds 0
No embeds

No notes for slide

Clase lc.comunicacion cientifica

  1. 1. TALLER DE METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN COMUNICACIÓN DEL TRABAJO CIENTÍFICOTema III. Comunicación del trabajo científico. Estructura, contenido yestilo del comunicado. Normas de presentaciones a Congresos ypublicación en revistas con arbitraje. Detalles de la confección de unmanuscrito de investigación.La estructura de trabajo científico experimental: título, autores,introducción, antecedentes del tema, materiales y métodos, resultados,discusión, conclusiones, bibliografía citada, agradecimientos, resumen,palabras claves. Dra. Lucía I. Castellanos de Figueroa
  2. 2. CÓMO ESCRIBIR UNA TESIS DE GRADO?
  3. 3. QUÉ ES UNA TESIS DE GRADO? Un trabajo elaborado por los alumnos para la obtención de su Título Profesional y/o Grado Académico, que deberá ser inédito en el área de una disciplina, referido a un problema o un tema debidamente fundamentado. Licenciatura en Biotecnología Dicho trabajo consiste en un estudio original, dirigido por un Director designado a tal efecto, orientado a resolver sistemáticamente un problema o necesidad dentro del área de la Biotecnología, mediante la aplicación de conocimientos, métodos y técnicas generales y específicas, según sea la naturaleza del tema.
  4. 4. NORMAS DE PRESENTACIÓN Y CONFECCIÓN DEL TRABAJO FINAL (TESIS DE GRADO) DE LA LIC. EN BIOTECNOLOGÍA, FAC. DE BIOQUÍMICA, QUÍMICA Y FARMACIA, UNT Reglamento de Trabajo Final. Res. HCD 286-05Artículo 7ºPara la realización del Trabajo Final los alumnos de la Carrera de Licenciatura en Biotecnologíadeberán presentar un plan de trabajo que deberá ser aceptado por el Comité Académico de laATF y cuyo desarrollo se ajuste a alguna de las siguientes modalidades:a. Trabajo ExperimentalSe sustenta en el empleo y demostración experimental de principios o teorías que se tomancomo marco de referencia teórica para la práctica. Incluye especialmente el empleo de laMetodología formal del área escogida para llevar a cabo la práctica.b. Proyecto en fábricaDebe estar estructurado en términos de perfeccionamiento teórico y práctico, apoyándose enla investigación bibliográfica, y debe culminar en un análisis crítico creativo de las actividades ylíneas de acción relacionadas al proyecto llevado a cabo en la Empresa o Fábrica.c. Investigación teórica basada en una revisión bibliográfica o Trabajo de SeminarioSe entiende por Trabajo de Seminario una actividad académica teórica creativa nomeramente recopilatoria, basada en una revisión bibliográfica crítica acerca de algúnproblema científico o profesional, mediante el cual el alumno profundizará en las teorías ymétodos de investigación propios de la disciplina y su aplicación a casos específicos.
  5. 5. Todo trabajo final constará de las siguientes partes y en el siguienteorden: 1) Información general 2) Cuerpo principal o texto 3) Bibliografía
  6. 6. 1. Información generala) El trabajo deberá ser escrito en hoja tamaño A4, a doble espacio y las páginas deberán ir numeradas.b) Página de título: * Universidad Nacional de Tucumán * Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia * Asignatura “Trabajo Final” * Título del trabajo * Proyecto para optar al título de Licenciado en Biotecnología * Nombre completo del alumno * Nombre del director y director asociado * Lugar de trabajo * Mes y año
  7. 7. c) Página de agradecimientosd) Índicee) Nomenclatura empleadaf) Resumen 2. Cuerpo principal o textoa) Introducciónb) Materiales y métodosc) Resultadosd) DiscusiónE) Conclusiones
  8. 8. 3. Bibliografía • En el texto, las citas bibliográficas se indicarán con el nombre del primer autor y el año de su publicación entre paréntesis o con las normas aceptadas internacionalmente • Al final del trabajo se escribirá la bibliografía en orden alfabéticoCuando sea un libro:Shriner R., Hermann C., Morril T., and Fuson R. (1998). The systematic identification oforganic compounds. 7, pp. 276-277. John Wiley and Sons, Inc. Eds.Cuando sea una revista:Smith A.M. (1976). Ethylene in soil biology. Annual Reviews of Phytopatology, 14: 53-57.
  9. 9. ¿CÓMO DEBE ESTAR ESCRITA?Una tesis es un trabajo de investigación. El informe concierne a unproblema o conjunto de problemas en un área definida de la cienciay debe explicar lo que se sabe de él previamente, lo que se hacíapara resolverlo, lo que sus resultados significan, y dónde o cómo sepueden proponer progresos, más allá del campo delimitado por eltrabajo. ¿Cuán detallada?¡Bastante más que para un artículo científico! Es una ventaja que latesis sea bastante explícita en contraposición a una inconsistente.La referencias bibliográficas son el medio adecuado de documentarconceptos que no son propios, debe declarar donde estádocumentado ese resultado en la literatura científica. ¡La ciencia debe ser escrita siempre en voz activa y en modo impersonal!
  10. 10. RESUMEN Debe ser una síntesis de la tesis: una descripción concisa del problema general (y particular) que se aborda, su método de resolverlo, sus resultados y conclusiones. Un resumen debe ser auto-contenido, o tener independencia, es decir no requerir de la lectura del trabajo completo, para saber todo lo que en él se expone globalmente. Normalmente no contiene referencias. Cuando sea necesaria una referencia, su detalle debe incluirse en el texto del mismo resumen. Verifique el límite de la cantidad de palabras, que para una tesis va de 200 a 300. INTRODUCCIÓN¿Cuál es el tema y porqué es importante? Exponga elproblema global tan simple como pueda.La introducción debe decir claramente adónde va latesis, y esto se volverá más claro en el avance de laescritura misma. Aquí se realiza la revisiónbibliográfica. ¿De dónde vino el problema? ¿Qué sesabe ya sobre este problema? ¿Qué otros métodos sehan tratado para resolverlo?
  11. 11. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Los resultados y la discusión se combinan muy a menudo en las tesis. En la mayoría de casos, los resultados obtenidos requieren discusión. ¿Qué significan? ¿Cómo encajan en el cuerpo de conocimientos existentes? ¿Son consistentes con las teorías actuales? ¿Dan discernimientos nuevos? ¿Sugieren nuevas teorías o mecanismos? Se debe estar seguro de que se ha descrito las condiciones en las cuales se obtuvo el conjunto de resultados expresados. Se deben usar los análisis estadísticos apropiados. Donde sea aplicable, se debe mostrar los errores de la medición y los errores normales en las gráficas. Usar pruebas estadísticas adecuadas. CONCLUSIONESSon las contribuciones del autor en la confirmación o el rechazo de las hipótesisplanteadas en la introducción.Los resultados y las discusiones deben ofrecer suficiente evidencia científica comopara respaldar a las conclusiones. Debe existir además una fuerte correlaciónentre la introducción (responde al qué) y las conclusiones (responden al cómo).La conclusión global, debe despejar la idea principal, la que debe ser escrita conénfasis y en forma positiva. Tanto la premisa mayor como la menor, deben salirambas de la propia experiencia.
  12. 12. BIBLIOGRAFÍASe trata de la presentación de una lista ordenada alfabéticamente por el apellidodel autor, de las obras citadas en el texto.Sirve para dar al lector la oportunidad de comprobar la existencia de las fuentesoriginales del trabajo realizado. Es un indicador directo del grado de profundidadde la investigación.Debe reunir los datos precisos, pertinentes y oportunos, que lleven identificarinequívocamente a la fuente de información.No debe haber citas en el texto que no tengan su correspondientereferencia, y tampoco a la inversa.
  13. 13. COMUNICACIÓN EN LA CIENCIA
  14. 14. Todo investigador debe escribir los resultados de suinvestigación, ya que el propósito final de unainvestigación científica debe ser la publicación de losresultados obtenidosEl idioma Inglés es el lenguaje universal de la cienciaRedacción científica: clara y sencillaFinalidad: comunicar nuevos desarrollos oconocimientos científicos
  15. 15. FORMAS DE COMUNICACIÓN CIENTÍFICAArtículos científicos (“Scientific paper”)Artículos de revisión (“Review paper”)Comunicaciones breves (“Short communications”)Comunicaciones a Conferencias (“Conference report”)Resúmenes de Congresos (“Meeting abstracts”) * Resúmenes amplios o expandidosPresentaciones en Congresos (“Posters”)Comunicaciones orales en CongresosLibros: a) editados (colectivos) o b) de uno/s autoresDivulgación: al público en general
  16. 16. Artículos científicos (“Scientific paper”)Es un trabajo de investigación original.Artículos de revisión (“Review paper”)Es una revisión de trabajos científicos. Información que ya fuepublicada.Comunicaciones breves (“Shortcommunications”)Trabajos de estructura simple, cortos, aspectos de interés máslimitados dentro de un tema general. Pueden publicarseresultados negativos.
  17. 17. Comunicaciones de Conferencias(“Conference report”)Resumen de una conferencia dada en un Congreso, puedecontener información original.Resúmenes de Congresos (“Meetingabstracts”)Se publican en los libros de resúmenes de los Congresos.Deben tener resumido el contenido de la presentación arealizar.Resumen ampliado: Tiene la estructura de un “Scientificpaper”, sin detallar experimentos.
  18. 18. Book of Abstracts
  19. 19. Presentaciones en Congresos (“Posters”) Es una presentación visual de lo que se quiere mostrar. Objetivo: detallar parte de un trabajo en una forma que sea fácilmente asimilable y que estimule la discusión. Produce un fructífero intercambio de ideas. No contiene muchos detalles. Contiene poco texto y muchas gráficas e ilustraciones.
  20. 20. DETECTION OF ACYLHOMOSERINE LACTONES IN CULTURES OF Gluconacetobacter diazotrophicus PAL5 Nieto Peñalver, Carlos G., Bichara, Laura, Marino Damián, Castellanos de Figueroa, Lucía I., Irazusta, Verónica PROIMI‐CONICET, Tucumán. Facultad de Ciencias Exactas‐ UNLP‐CONICET, La Plata. E‐mail: cgnieto@proimi.org.ar Gluconacetobacter diazotrophicus is an acid‐tolerant nitrogen fixing Alphaproteobacterium first found in association with sugarcane. It has also been isolated from rice, coffee and tea, among others crops. The recent sequencing of the G. diazotrophicus PAL5 genome shows the presence of one luxI homolog. These genes encode LuxI‐type enzymes responsible for the synthesis of N‐acylhomoserine lactones (AHLs), the main quorum sensing molecules in gram negative bacteria. The objective of this work was the detection and identification of AHLs produced by G. diazotrophicus PAL5. The strain was cultured aerobically, and extracts were prepared with acidified ethyl acetate. Samples were analyzed by thin layer chromatography developed with the biosensor Agrobacterium tumefaciens NTL4 (pCF218) (pCF372). Results show that G. diazotrophicus PAL5 produce at least two types of AHLs under the assayed conditions. Short‐chain AHLs could be detected since early exponential growth phase, and medium‐chain AHLs were detected in mid‐ and late‐exponential growth phase. The results suggest that the luxI homolog in G. diazotrophicus PAL5 is expressed and quorum sensing molecules are produced and secreted. Similar to other bacteria, production of AHLs in G. diazotrophicus PAL5 could serves as a signaling mechanism among members of this genus or as inter kingdom signals. INTRODUCCION Sistemas regulatorios de Quorum Sensing Gluconacetobacter diazotrophicus Los microorganismos pueden coordinar su fisiología mediante la biosíntesis y secreción de moléculas señal. En mayoría de las bacterias Es una bacteria diazotrófica aislada por primera vez de la planta de caña de azúcar. Es una bacterias endofíticas gram negativas, estas moléculas pertenecen a la familia de las acil homoserinlactonas (AHL). Implicado en su producción se encuentra modelo para el estudio de las interacciones entre bacterias y plantas no leguminosas. Se la ha encontrado en la enzima LuxI responsable de su biosíntesis. Una proteína del tipo LuxR capta estas moléculas señal y, actuando como un factor asociación con plantas de café, arroz y otros vegetales. Promueve el crecimiento de plantas mediante la síntesis de transcripcional, induce cambios en la expresión de determinados genes. Generalmente, estos genes están relacionados las fitohormonas y la solubilización de micronutrientes. También controla el crecimiento de fitopatógenos como interacciones con otros microorganismos y con organismos hospederos: exoenzimas, exoplisacáridos, sideróforos, etc. Colletotrichum falcatum. La secuenciación de su genoma ha localizado tres genes relacionados con sistemas de quórum sensing: un gen que codificaría para una enzima del tipo LuxI y dos genes que codificarían dos proteínas LuxR. METODOLOGIA Preparación de extractos concentrados Acetato Bioensayos DYGS+Glu0,2% 24h Evaporación y Extractos de etilo - Agrobacterium tumefaciens NTL4 30°C concentración concentrados X500 (pCF218) (pCF372) DYGS+Glu0,2% - Pseudomonas putida F117 LGIP+Gluc0,2% Extracción Separación de con solvente fase orgánica Bioensayos con cepas biosensoras P. putida F117 TLC en Revelado con PAL5 (pKR-C12) fase reversa A. tumefaciens NTL4 Fase móvil: (pCF218) (pCF372) DYGS+Glu0,2% Expresión MeOH:H2O Bioensayos en placas de GFP reveladas con Estándares Extractos Inducción de P. putida F117 (pKR-C12) concentrados β-galactosidasa RESULTADOS DISCUSION Los extractos concentrados de cultivos de G. diazotrophicus PAL5 inducieron la síntesis de β‐galactosidasa en A. tumefaciens NTL4 TLC en fase reversa revelada con A. tumefaciens (pCF218) (pCF372). C6-HSL O NTL4 (pCF218) (pCF372): en los extractos de Por TLC se observan spots con Rf similares a los estándares comerciales C6‐HSL y C8‐HSL. N H cultivo de la cepa PAL5 se encuentran AHLs que H 3 C O O N H O inducen la síntesis de β-Gal. Los bioensayos en placa muestran que la cepa PAL5 puede inducir la síntesis de proteína de fluorescencia verde (GFP) en P. putidaH 3 C O O F117 (pKR‐C12). C8-HSL Los resultados con la cepa biosensora F117 sugieren que G. diazotrophicus PAL5 también sintetiza acil homoserinlactonas de largas Estándares cadenas. comerciales Extracto DYGS Extracto LGIP Estos resultados muestran que G. diazotrophicus PAL5 tiene un sistema de quorum sensing activo cuando crece en medios ricos y complejos (DYGS + glucosa 0,2%), así como en medios minerales y sintéticos (LGIP + glucosa 0,2%). En este sistema intervienen moléculas de la familia de las acil homoserinlactonas. Expresión de GFP observada por microscopia de La secuenciación del genoma de G. diazotrophicus PAL5 muestra un único gen que codificaría una enzima del tipo LuxI. Esto sugiere fluorescencia: la cepa PAL5 secreta que esta enzima sería la responsable de la síntesis de todas las moléculas de quorum sensing producidas por la cepa PAL5. moléculas que son captadas por la cepa AGRADECIMIENTOS Y RECONOCIMIENTOS F117, induciendo la síntesis de GFP Este trabajo fue subvencionado por ANPCYT (PICT2007 N°734) y CONICET. BIBLIOGRAFIA G. diazotrophicus P. putida F117 Bertalan, M., et al. Complete genome sequence of the sugarcane nitrogen‐fixing endophyte Gluconacetobacter diazotrophicus Pal5. BMC Genomics 2009, 10:450. PAL5 (pKR-C12) Saravanan, BMC Genomics 2009, 10:450. S., et al. Ecological Occurrence of Gluconacetobacter diazotrophicus and Nitrogen‐fixing Acetobacteraceae Members: Their Possible Role in Plant Growth Promotion. Microb. Ecol. 2008, 55(1):130‐140. Steindler, L., et al. Detection of quorum‐sensing N‐acyl homoserine lactone signal molecules by bacterial biosensors. FEMS Microbiol. Lett. 2007, 266(1):1‐9.
  21. 21. Proteomic study of Rhodotorula mucilaginosa RCL-11 revealed differential BT-P11 proteins expression under copper stress Verónica Irazusta , Cristina Estevéz , María Julia Amoroso , Lucía I. C. de Figueroa 1 1,2 1,2 1,2 1PROIMI-CONICET, Av. Belgrano y Pje. Caseros, Tucumán, T4001MVB, Argentina, 2Universidad Nacional de Tucumán, Tucumán, T4001MVB, Argentina, virazusta@proimi.org.ar ABSTRAC Organisms subjected to metal exposures in their natural environments generally have had develop resistance mechanisms. Rhodotorula mucilaginosa RCL-11, yeast isolated from a copper filter plant at the province of Tucumán, Argentina, has the ability of supporting high amounts of copper metal by a slow down in its growth rate(1). In order to understand the mechanism involved in RCL-11 resistance to copper it was conducted a proteomic approach(2). Results of atomic absorption spectroscopy showed that copper concentration in the medium decreased from 0.5 to 0.2mM 48 h later inoculation occurred. Analyzing by mono-dimensional gel electrophoresis the crude cells extracts, it was observed differential bands expressions between cells with or without copper. Further, with the aim of studying these differences, two-dimensional electrophoresis analyses was carried out. Gels were silver-stained, scanned and analyzed with Image Master Program. 2-D analysis of RCL-11 revealed that 48 h copper exposure produced an over-expression of 20 proteins; some of them increased their expression according to the time of copper exposure (16, 24 and 48 h). The results obtained in the present work show that when exposing R. mucilaginosa RCL-11 to 0.5mM copper concentration, it is produced a differential protein expressions probably involved in cell resistance mechanisms. 1. Disminución del cobre en el medio de cultivo en presencia de 4. Aumento de la expresión de proteínas específicas con el tiempo Rhodothorula mucilagenosa RCL-11 Se observa el aumento gradual de la expresión de algunas proteínas correlacionada con el Las células de levadura fueron cultivadas en presencia o ausencia de 0,5 mM Cu2+ en medio tiempo de exposición al cobre. A las 48 horas se aprecia la máxima expresión de los spots liquido. A las 24 horas de cultivo las levaduras logran disminuir los niveles del metal a la mitad, señalados en la figura. logrando los menores valores de 0,14 mM a las 72 horas. Se demuestra que RCL-11 presenta la – Cu + Cu Absorvancia 600 nm capacidad de disminuir los niveles de cobre del medio de cultivo. 1 1 6 Curva de crecimiento Contenido de Cu extracelular 6 30 - Cu +Cu + Cu Cu mM 0,5 0,4 16 hs 8 20 8 0,3 10 0,2 0,1 0 0 1 1 20 40 60 80 0 20 40 60 80 6 0 6 tiempo tiempo 24 hs 8 2. Análisis monodimensional de los extractos proteicos de RCL-11 8 1 6 1 24hs 48hs Las proteínas totales fueron extraídas por medio 60,5 mM Cu - + - + mecánico utilizando perlas de vidrio y vórtex. Las 48 hs 8 8 97 proteínas fueron separadas por sistema de electroforesis monodimensional SDS-PAGE. Los extractos proteicosPeso molecular 84 corresponden a distintos tiempos de cultivo, en 66 (KDa) presencia y ausencia de cobre. Los geles fueron teñidos 55 con EZ blue de BioRad. Se puede observar un perfil de 5. Identificación de las proteínas diferencialmente expresadas en presencia 45 bandas distinto en presencia y ausencia de cobre, tanto a 24 como a 48 horas de cultivo. Dichas diferencias de cobre 30 Las proteínas fueron identificadas mediante huella peptídica combinada con secuenciación pueden traducirse en la expresión diferencial de las 20 proteínas cuando las células son sometidas al MS/MS. Proteína Spots Taxonomía Score tratamiento con el cobre. Proteína mitocondrial de choque térmico 1,2 Puccinia graminis f. sp 40 3. Análisis bidimensional de RCL-11 a las 48 horas de tratamiento (Hsp88) Las proteínas fueron separadas según su punto isoelectrico en tiras de 11cm 3-11NL (GE) y según Metionina sintetasa 3,4,5,6 Puccinia graminis f. sp 41 Proteína mitocondrial de choque térmico su peso en SDS-PAGE al 12,5 %. Se observan spots diferencialmente expresados cuando las 7,8 Ustilago maydis 521 162 (Hsp70) células son cultivadas con Cu2+. Probable chaperona de choque térmico – Cu 48 horas + Cu 48 horas 9 Ashbya gossypii ATCC 10895 85 3 11 3 11 (Familia Hsp70) 97 1 2 2 Beta glucosidasa 10 Aspergillus niger 41 3 5 1 5 4 3 4 6 6 Proteína mitocondrial de choque térmico 66 7 7 11 Ustilago maydis 521 96 9 (Hsp60) 8 9 45 11 10 11 8 10 Superóxido dismutasa CONCLUSIONES 12 Rhodotorula glutinis 25 Peso molecular •La capacidad de reducir los niveles de cobre en el medio de cultivo por parte de la levadura cultivo 29 Rhodothorula mucilagenosa RCL-11, se correlaciona con la expresión diferencial y selectiva de sus proteínas. . (KDa) 20 •Las células responden al estrés provocado por el metal, aumentando la expresión de proteínas cé estré expresió proteí 12 12 directamente implicadas en la defensa contra el estrés oxidativo, entre ellas destacan las estré oxidativo, REFERENCIAS 14 (1) Villegas LB, Amoroso MJ, C de Figueroa LI. J.rmico (Hsp60,70,88) y la superóxido dismutasa. chaperonas de choque té Basic Microbiol. (2005) 45 5, 381–391 té superó dismutasa. (2) Irazusta V, Cabiscol E, Reverter-Branchat G, Ros J, Tamarit J. JBC (2006) 28118, 12227-32 Este trabajo ha contado con el financiamiento de la Universidad Nacional de Tucumán CIUNT 26/D415 y PICT Préstamo BID 2007-568 del FONCyT (Agencia)
  22. 22. IDENTIFICACIÓN MOLECULAR DE HONGOS FILAMENTOSOS PRODUCTORES DE ESTATINAS AISLADOS DE LAS YUNGAS (TUCUMÁN-ARGENTINA) Cabral ME1; Delgado OD1; Figueroa LIC 1,2 & Fariña JI1. PROIMI – CONICET. Av. Belgrano y Pje. Caseros, Tucumán, Argentina. 2Universidad Nacional de Tucumán, Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia, Tucumán, 1 Argentina. e-mail: mcabral@proimi.org.ar INTRODUCCIÓN MATERIALES Y MÉTODOS La capacidad de producir estatinas fue evaluada en una etapa previa de trabajo mediante el análisis de extractos orgánicos de cultivos fúngicos porLas enfermedades cardiovasculares representan una de las principales causas de muerte a nivel cromatografía en capa fina de sílica gel (TLC) y mediante bioensayos con céspedes de levadura donde se evaluó el efecto inhibitorio de las estatinas sobre elmundial. La utilización de estatinas ha mostrado gran efectividad y seguridad en la reducción de los crecimiento de dichos microorganismos. Los resultados fueron posteriormente confimados por RP-HPLC.niveles de colesterol plasmático en pacientes hipercolesterolémicos, inhibiendo la síntesis de novo En base a los resultados del análisis realizado, se seleccionaron los mejores productores potenciales de estatinas, procediendo a la identificación de estos aislamientos por amplificación y secuenciación de segmentos completos (ITS1, ITS2, 5.8S) y parciales (dominio D1/D2 de subunidad 28S) del ADNr (4) (Figura 2).del colesterol endógeno. La actividad hipocolesterolémica de las estatinas, varias de ellasmetabolitos secundarios de origen fúngico, se basa en la inhibición competitiva de la enzima HMG- ITS1CoA reductasa, que cataliza el paso limitante de la velocidad en la vía de síntesis del colesterol (1), 18S 5.8S 28Sdebido a la similitud estructural existente entre la forma β-hidroxiácido de las estatinas y el sustrato NL4de dicha enzima (HMGCoA) (Figura 1). A través de este mismo mecanismo, las estatinas bloquean Figura 2: ubicación del fragmento ITS1-NL4 del ADNr.la síntesis de ergosterol, inhibiendo así el crecimiento en levaduras. Cultivos fúngicos:Además de su efecto hipocolesterolémico, las estatinas presentan capacidad de inducir apoptosis. Los aislamientos de las Yungas LY 28.1, LY 30.1, LY 30.2, LY 37.11, LY 38.4 y LY 39.1, fueron cultivados en medio sólido Czapek a 25ºC durante 5 días.La lovastatina y sus análogos bloquean la síntesis de metabolitos intermediarios en la ruta del Extracción del DNA genómico total: La extracción de DNA se realizó por tratamiento del micelio fúngico utilizando un kit comercial de QBiogene, según indicaciones del fabricante.mevalonato, entre ellos, isoprenoides necesarios para la síntesis de proteínas esenciales en el Reacción en cadena de la polimerasa (PCR):progreso del ciclo celular (2) (Figura 1). Esta popiedad haría a las estatinas aplicables también al Las secuencias de los primers utilizados para amplificar la región D1/D2 de la subunidad 26S del ADNr fueron:tratamiento de enfermedades fibroproliferativas y tumorales. Adicionalmente, se observó que estos ITS1 5`-TCC GTA GGT GAA CCT GCG G-3` (4)metabolitos fúngicos y sus análogos sintéticos presentan actividad inhibitoria sobre la velocidad de NL4 5`-GGT CCG TGT TTC AAG ACG G-3` (5)replicación de HIV-1 en células infectadas (3). Las amplificaciones fueron llevadas a cabo utilizando un termociclador PerkinElmer con el siguiente programa de PCR: 4 min a 94°C; 30 s a 94°C; 30 s a 52°C; 1.5 min a HMG-CoA H O O 70°C (30 ciclos), 7 min a 72°C, y finalmente tiempo indefinido a 4°C. Electroforesis de DNA en geles de agarosa: O H HMG-CoA Statins O H El ADN resultante de la extracción y de la reacción de amplificación se analizó por electroforesis en gel de agarosa al 0,8% en buffer TAE 1X. El revelado se realizó con reductase Mevalonate R1 bromuro de etidio y las bandas se visualizaron por fluorescencia emitida al irradiar con luz ultravioleta. C H 3 Secuenciación e identificación molecular: Isopentenyl-PP R2 La secuenciación de las regiones ITS1- 5.8S - ITS2 y del dominio D1/D2 de la subunidad 28S del rDNA fue realizada en MacroGen (Corea). Las secuencias fueron depositadas en la base de datos GenBank. Las mismas fueron comparadas con las ya existentes en dicha base de datos, con la finalidad de construir los árboles Geranyl-PP filogenéticos correspondientes. Farnesylated proteins (Ras, etc) RESULTADOS Y DISCUSIÓN Farnesyl-PP Geranylgeranyl-PP Squalene Geranylgeranylated proteins (Rho, etc) Las cepas seleccionadas, productoras de estatinas y/o compuestos químicamente relacionados, mostraron mayor porcentaje de ERGOSTEROL/ CHOLESTEROL / STIGMASTEROL similitud con cepas de los géneros Penicillium, Fusarium e Hypocrea (Tabla 1). Figura 1. Actividad inhibitoria de las estatinas sobre la vía de síntesis de esteroles y otros dervidados del Las secuencias fueron depositadas en la base de datos Tabla 1: Similitud entre las secuencias del dominio D1/D2 de aislamientos fúngicos de Las Yungas y organismos relacionados. mevalonato. GenBank bajo los números de acceso FJ434201, Aislamiento Nicho ecológico Organismos relacionados Similtud (%)Debido a que la producción microbiológica de estatinas no FJ434202, FJ434203, FJ434204, FJ434205 LY 28.1 Hongo de sombrero Fusarium chlamydosporum NBAIM:236 99,5se ha encarado aún en nuestro país, se consideró de gran correspondientes a los aislamientos LY 28.1, LY 30.1, LY 30.1 Tronco Hypocrea vinosa CBS 960.68 Hypocrea lixii CBS 226.95 100 100importancia la búsqueda de nuevas cepas fúngicas con LY 30.2, LY 37.11, LY 38.4 y LY 39.1, respectivamente. LY 37.11 LY 38.4 Tierra Penicillium kojigenum NRRL 3442 Penicillium gladioli NRRL 939 96,3 99,3capacidad para producir este tipo de metabolito Las mismas fueron comparadas con las ya existentes Hongo de sombrero Penicillium clavigerum NRRL1004 99,3secundario. en dicha base de datos, con la finalidad de construir las LY 39.1 Tronco Penicillium crustosum NRRL 35178 Penicillium gladioli NRRL 939 99,3 99,3La selección de hongos filamentosos productores se matrices de similitud y los árboles filogenéticos Penicillium clavigerum NRRL1004 99,3 Penicillium crustosum NRRL 35178 99,3realizó a partir de 201 aislamientos obtenidos de la correspondientes (Figura 2).zona de Las Yungas (Tucumán-Argentina), un 1 2 3 4 5 6 7 8 98 LY38.4ecosistema de amplia diversidad microbiológica y 1 LY 38.4 100% 24 LY39.1 2 LY 39.1 100% 100%escasamente estudiada. 3 P. gladioli NRRL 939 99.3% 99.3% 100% 17 P. clavigerum NRRL 1004 4 P. crustosum NRRL 35178 99.3% 99.3% 99.6% 100%La identificación de aislamientos fúngicos por métodos de taxonomía convencional a veces requiere 5 P. clavigerum NRRL 1004 6 A. crystallinus NRRL 5082 99.3% 99.3% 99.4% 99.3% 100% 51 P. crustosum NRRL 35178 98.9% 98.9% 98.2% 98.4% 98.2% 100%técnicas específicas y laboriosas, con un alto insumo de tiempo y propensas a errores si se carece 7P. camembertii NRRL 874 99.1% 99.1% 99.6% 99.7% 99.1% 98.0% 100% 53 P. gladioli NRRL 939 8 P. angulare NRRL 35683 91.4% 91.4% 91.4% 91.6% 91.9% 91.7% 91.6% 100%de la debida experiencia. A. crystallinus NRRL 5082Por este motivo, es actualmente reconocido que la aplicación de técnicas moleculares representa P. camemberti NRRL 874una herramienta de alto valor para la identificación rápida y precisa de los hongos filamentosos. P. angulare NRRL 35683El objetivo de este trabajo fue identificar mediante técnicas moleculares aquellos aislamientos 0.005fúngicos que fueron seleccionados como mejores productores de estatinas y compuestos Figura 2. Matriz de similitud y árbol filogenético construido en base a secuencias del dominio D1/D2 para los aislamientos LY 38.4, LY 39.1 y cepasquímicamente relacionados con la misma actividad. filogenéticamente cercanas. Los aislamientos LY 38.4 y LY 39.1 mostraron estar relacionados filogenéticamente a especies del género Penicillium. Entre sí, Bibliografía dichos aislamientos presentaron un 100% de identidad comparando tanto las secuencias de la región D1/D2 como el fragmento completo ITS1- NL4. De acuerdo a esto, podría tratarse, entonces, de dos cepas de la misma especie pertenecientes al género 1) Goldstein J.L. & Brown M.S. (1990). Nature 343: 425-430. 2) Matar P., Rozados V.R., Roggero E.A. & Scharovsky O.G.(1998).Cancer Biotheraphy and Radiopharmaceutical 13:387- 393. Penicillium. 3) Maziére J.C., Landureau J.C., Giral P., AuclairM., Fall L. & Zagury D. (1994). Biomed. & Pharmacother. 48: 63-67. 4) Kurtzman, C. P. and C. J. Robnett (1997). Journal of Clinical Microbiology 35 (5),1216. El aislamiento LY 37.11 mostró sólo un 96,3% de similitud con una cepa de Penicillium kojigenum, pudiendo tratarse en este caso 5) Lott, T. J.; Kuykendall, R. J. and Reiss E. (1993). Yeast. 9: 1199-1206. de una nueva especie. CONCLUSIONES Este trabajo permitió la identificación de hongos filamentosos pertenecientes a un ecosistema ecológicamente relevante, escasamente explorado en su diversidad Agradecimientos microbiológica, y que podría representar un reservorio de elevado potencial biotecnológico aún sin explotar. El aporte de datos referidos a la microflora de la región es de gran importancia, ya que son escasos los estudios existentes al respecto. Por otra parte, también es posible contar actualmente con cepas de identidad Los autores agradecen a ANPCYT (PICT 14496/03, PICT 38164/05), a la Universidad Nacional de Tucumán (CIUNT D-311) y conocida con capacidad para producir metabolitos secundarios de potencial aplicación en la industria farmacéutica, tales como las estatinas. a CONICET (PIP 6202) por el apoyo financiero.
  23. 23. ibt Biotecnología San Juan ARGENTINA Dynamic of Killer-Sensitive Population in Mixed Cultures of Wild and Mutant Oenological Yeasts Under Fermentation and Aerobic Conditions Y.P.MATURANO1,2, M.C.NALLY1,2, M.E. TORO1, L.I.C.DE FIGUEROA3 and F. VAZQUEZ1 Instituto de Biotecnología, San Juan, Argentina - e-mail: fvazquez@unsj.edu.ar 2 Facultad de Cs. Exactas, Físicas y Naturales, San Juan, Argentina 3 PROIMI, Tucumán, 1 Argentina Killer yeast strains produce inhibitory glycoproteins, and enzymes that eliminate other yeasts (called Sensitive). There are not many studies about the behavior of OBJECTIVE these yeasts under enological and aerobic conditions, specially mixed cultures of killer and sensitive strains. The enological interest in killer yeasts arises because these yeasts, To investigate the dynamic of yeast when present, might dominate a wine fermentation. When sensitive strains are inoculated in musts, its action can be interfered or they can be eliminated by killer strains present in musts during the fermentation process. A selected killer strain may not be completely dominant in wine fermentations possessing a native sensitive yeast flora population in mixed cultures of killer– because the prevalence of a yeast strain in the fermentations depends on different factors like growth rate of killer and sensitive strains, the initial proportion of them, the sensitive wild and mutant strains under sensitive yeasts susceptibility to the different killer strains toxins (Jacobs, C.J. and Van Vuuren, H.J.J., 1991). oenological and aerobic conditions Materials and Methods Aerobic Conditions Microorganisms: Saccharomyces cerevisiae NCYC1006 (S); S. cerevisiae ATCC36900 (K); BSc411 (wild S. cerevisiae, K); MN41 (Acridine Orange 100 µmax BSc400 (K) = 0.3498 µmax BSc377 (S) = 0.3966 cured plasmid mutant, S); BSc400 (wild S. cerevisiae, K) BSc377 (wild S. cerevisiae, S). Microvinifications: they were realized in 250 ml Erlenmeyer 80 flasks with 150 ml of concentrated must, diluted to 21°Brix. A Müller valve (a glass device which contains 50% sulphuric acid that allows only CO2 to % -S 60 escape from the system) aseptically closed the vessels, and incubated at 25°C. Yeast population was enumerated by the plate count technique. After 3 K days of incubation at 25°C and 37°C (toxin inactivation temperature) , colonies were transferred at random to buffered YPD-methylene blue agar to 40 determine their sensitive or killer character (Vazquez et al. 2001). Aerobic conditions assay: they were done by batch process using a 1 L bioreactor. 20 Both strains were inoculated at a final concentration of 3x106 cells. ml-1, pH 4.6. Agitation (300 rpm), sterile aeration (0,6 l.min-1) and temperature (25°C). 0 Figure 3: 10%K/90%S Samples were taken periodically (90 min) during 24 h. Biomass concentration was determined by direct cellular counting with hemocytometer. Assays 100 0 90 180 270 360 450 540 630 720 810 1440 Conditions : 10% K/90% S; 50% K/50% S in aerobic and anaerobic conditions 80 Results and Discussion 60 % -S K Fermentation Assay Figure 1: 50%K/50%S 40 20 100 0 Figure 4: 50%K/50%S 90 0 90 180 270 360 450 540 690 810 900 1440 80 Time (min) 70 %BS c400 (K) % BS c377(S ) % -S 60 K 50 40 30 100 Figure 5: 50%K/50%S 100 Figure 6: 10%K/90%S 20 µmax BSc411 (K) = 0.3303 10 80 µmax MN41 (S) = 0.4385 80 0 60 %K - S 60 0hs 24hs 72hs 120hs 168hs 216hs 264hs 336hs 408hs 504hs 600hs 40 40 100 Figure 2: 10%K/90%S 20 20 90 80 0 0 0 90 180 270 360 450 540 630 720 810 0 90 180 270 360 450 540 630 720 810 70 % BSc411 (k) % MN41 (S) Time (min) % BSc411 (K) % MN41 (S) Time (min) 60% -S 50 Results obtained with BSc411 (wild K) and the mutant resulting from Acridine Orange treatment MN41 (S), in aerobic conditions K 40 are consistent with those obtained using killer and sensitive wild yeasts (Figures 5 and 6). In this case, the µmax of MN41 is 24,7% higher 30 than the specific growth rate of BSc411. 20 10 Results in Figure 7 showed that when the sample was % killer strain at different incubation temperature Figure 7: Proportions of K/S at 25°C and 37°C 0 incubated at 37°C (temperature of toxin inactivation), the number of 100 0hs 24hs 72hs 120hs 168hs BS c400 (K) 216hs 264hs BS c377(S ) 336hs 408hs 504hs 600hs killer strains descended in relation with those incubated at 25°C. At Time 80 25°C the toxin can interact with the cells that are near. The In both conditions, (50% S-50% K; 90% S-10% K) the wild killer yeast dominated the must in temperature to inactivate the toxin is below that one considered 60 40 mutagenic (Vodkin M. 1977). less than 24h. On the other hand, the percentage of BSc400 (K) descended from 100 - 93% -depending on 20 the culture conditions- to 11 - 7% at the last stages of the experiments (Figures 1 and 2). In spite of the Bibliography fact that the killer strain dominated the must in a relatively short period of time (less than 24 h), the 0 Jacobs, C.J. and Van Vuuren, H.J.J. (1991). Am. J. Enol. and Vitic. 42: 295 - 300. sensitive one was not completely eliminated. Gradually declination of environment pH may affect both 0 12 24 48 72 96 120 144 192 216 240 264 288 336 360 408 456 600 672 Vazquez et al. (2001). Vol. 14. Food Microbiology Protocols. Humana Press Inc. Totowa, New toxin stability and physiological state of killer cells. Those facts probably allowed the raise of BSc377 % K iller 25° C % K iller 37° C T im e (h ) Jersey. biomass at 552 h in both experiments. Vodkin, M. (1977). J Bacteriol Oct; 132,1:346-8. Conclusions · Results obtained in mixed killer-sensitive culture experiments under aerobic and oenological conditions showed the influence of specific growth rates of the sensitive strains with respect to the possibility of prevalence on the culture medium. Other factors like pH, the rate of subtract consumption may influence the strains competition in these kinds of experiments. · Cultivation temperature of samples with the purpose of evaluate killer-sensitive proportions is an important factor for the estimation of the sensitive strain.

×