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Práctica 6. Identificación de proteínas.

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En el siguiente archivo se desarrolla la práctica para la identificación de proteínas, en el cual se encuentran las técnicas llevadas a cabo y sus respectivos resultados.

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Práctica 6. Identificación de proteínas.

  1. 1. CETis No.62 Práctica No.6: Identificación de proteínas. Especialidad: Laboratorio clínico. Asignatura: Bioquímica. Profesora: Marta Gabriela Aceves Morales. Equipo No.5: Moreno Vidal Manuel Alejandro. Quintanilla Moreno Jennifer. Razo Arredondo Ramón Emmanuel. Romero Vázquez Leslie. Vidal Ramírez Ramiro. Grado y grupo: “6°E
  2. 2. OBJETIVO. Realizar experimentos para identificar las proteínas, como la configuración y la identificación por el reactivo BIURET. MARCO TEORICO. Proteína, cualquiera de los numerosos compuestos orgánicos constituidos por aminoácidos unidos por enlaces peptídicos que intervienen en diversas funciones vitales esenciales, como el metabolismo, la contracción muscular o la respuesta inmunológica. Se descubrieron en 1838 y hoy se sabe que son los componentes principales de las células y que suponen más del 50% del peso seco de los animales. El termino proteína deriva del griego proteico, que significa primero. El plasma sanguíneo normal contiene de 6.5 a 7.5gr de proteínas por 100al. Las proteínas plasmáticas pueden dividirse en 3 grupos: a) fibrinógenos; b) globulinas; c) albuminas. Cada una de estas variedades pueden ser precipitadas en bases a su solubilidad en soluciones salinas, y se logra una separación simple o burda mediante precipitación salina de dichas proteínas o fuerzas iónicas diferentes. La precipitación salina con sulfato de amonio es una etapa preliminar útil en muchas técnicas de aislamiento de proteínas en particular de enzimas. Existen 2 tipos de lograr esta etapa de purificación o bien sea añadiendo sulfato de amonio sólido, o bien sea con una solución saturada (100 por 100) neutra del mismo. En el primer caso, existe ventaja de mantener en un mínimo el aumento de volumen; en cambio la solución saturada presenta la ventaja de una manipulación más cómoda. Las moléculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que forman el tejido conectivo y el pelo, hasta los glóbulos compactos solubles, capaces de atravesar la membrana celular y desencadenar reacciones metabólicas. Tienen un peso molecular elevado y son específicas de cada especie y de cada uno de sus órganos. Se estima que el ser humano tiene unas 30.000 proteínas distintas, de las que solo un 2% se ha descrito con detalle. Las proteínas sirven sobre todo para construir y mantener las células, aunque su descomposición química también proporciona energía, con un rendimiento de 4 kilocalorías por gramo, similar al de los hidratos de carbono. Las enzimas son proteínas, al igual que la insulina y casi todas las demás hormonas, los anticuerpos del sistema inmunológico y la hemoglobina.
  3. 3. REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET). MATERIAL. -1 gradilla -Pescado
  4. 4. -Espinaca -Levadura -Tubos de ensaye -Albúmina -Grenetina
  5. 5. -Caseína REACTIVOS. -NaOH al 10% -Sulfato cúprico al 1% en gotero PROCEDIMIENTO. 1. En cada tubo de ensaye colocar 2ml de solución de proteína (diluida al 1%). 2. Añadir a cada tubo 2ml de NaOH al 10% y agitar. 3. Agregar gota a gota solución de sulfato cúprico al 1% hasta la aparición de un color rosa o violeta (máximo 10 gotas). 4. Reportar a que gota aparece el color.
  6. 6. RESULTADOS. ProteÍna Gotas Utilizadas Espinacas 10 Gotas Levadura 6 Gotas Grenetina 4 Gotas Pescado 3 Gotas Albúmina 3 Gotas Leche 3 Gotas REACCIÓN XANTOPROTEICA. MATERIAL. -Tubos de ensaye
  7. 7. -Gradilla -Baño maría REACTIVOS. -Proteínas. - NaOH concentrado (gotero)
  8. 8. - HNO3 concentrado PROCEDIMIENTO. 1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína. 2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado. 3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua. 4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a él vire de color. Observar y reportar resultados. RESULTADOS. Proteína Gotas Utilizadas Coloración Espinaca 5 Gotas Verde Levadura 4 Gotas Amarillo fuerte Grenetina 10 Gotas Verde Pescado 10 Gotas Amarillo fuerte Albumina 3 Gotas Amarillo fuerte Leche 7 Gotas Amarillo fuerte
  9. 9. COAGULACIÓN POR CALOR. MATERIAL. -16 tubos de ensaye. -Gradilla. -Baño maría. REACTIVOS. -Ácido acético al 1%
  10. 10. -Acetona -Éter -Tetracloruro de carbono -Butanol
  11. 11. -Proteínas -NaOH concentrado con gotero PROCEDIMIENTO. 1. Calentar a hervir 5ml de solución de proteína 2. Añadir 2 gotas de ácido acético al 1% 3. Colocar en 4 tubos, la solución repartida por igual y agregar de la siguiente manera: Tubo1= 1ml acetona Tubo2= 1ml de éter Tubo3= 1ml de butanol Tubo4= 1ml tolueno 4. Agitar fuertemente para tratar de disolver el coagulo. Reportar en tabla. 5. Los tubos que no disolvieron el coagulo, agregar 3 gotas de NaOH concentrado, y agitar. 6. Observar y anotar diferencias. RESULTADOS. Proteína Acetona Éter Butanol Tolueno Espinacas Soluble Soluble Soluble Soluble Levadura Soluble Soluble Soluble Soluble Grenetina Soluble Soluble Soluble Soluble Pescado Soluble Soluble Soluble Soluble Albumina No Soluble No Soluble No Soluble No Soluble Leche Soluble Soluble Soluble Soluble
  12. 12. OBTENCIÓN DE CASEÍNA DE LA LECHE. MATERIAL. -2 vasos de precipitados de 250ml
  13. 13. -1 probeta de 100ml -1 embudo -2 papeles filtro REACTIVOS. -Leche entera
  14. 14. -HCl 0.2N -Acetona -Éter PROCEDIMIENTO. 1. Colocar 100ml de leche en un vaso de precipitado 2. Agregar 100ml de agua destilada 3. Con una pipeta añadir HCl 0.2N hasta obtener un pH de 4.8 4. Dejar reposar hasta que el sedimento precipite. 5. Suspender el precipitado en 100ml de agua destilada y dejar reposar. 6. Repetir este lavado 4 veces. 7. Filtrar el precipitado final en un embudo Buchner, colectando en el papel la proteína.
  15. 15. 8. Suspender la caseína en 25ml de agua destilada, agitar para homogeneizar y filtrar. Repetir 4 veces. 9. Después del último lavado, suspender la proteína en 5ml de éter y 5ml de acetona, y filtrar. 10.Colocar el polvo obtenido en un desecador con cloruro de calcio y pesar el polvo 24 horas después. RESULTADOS. Caseína. CONCLUSIONES. Las proteínas constituyen una de las moléculas más importantes en el organismo ya que cumplen muchas funciones. Las proteínas están constituidas por aminoácidos por los cuales los métodos que llevamos acabó en esta ocasión se basan en el reconocimiento de los aminoácidos En las reacciones donde se obtuvo precipitación se debió a un cambio en el estado físico de la proteína, mientras que en la coagulación se ha producido un cambio en el estado físico y en la estructura química por eso es irreversible nuestro equipo pudo llevar acabo todos los experimentos con éxito y obteniendo los resultados esperados. Por lo anterior podemos concluir que el objetivo de la práctica pudo ser alcanzado.
  16. 16. OBSERVACIONES. Para esta práctica cabe mencionar que es muy importante nuestra capacidad de precisión y atención, ya que se trabaja con solventes corrosivos y tóxicos que pueden dañar nuestra salud, además para las pruebas que se realizan por método cuantitativo es importante poner atención al momento de poner las gotas de reactivo y así observar en que tiempo aparecen las coloraciones. CUESTIONARIO. 1.- ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de las PROTEÍNAS? Se llama desnaturalización de las proteínas a la pérdida de las estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna estructura tridimensional fija. La desnaturalización provoca diversos efectos en la proteína:  Cambios en las propiedades hidrodinámicas de la proteína: aumenta la viscosidad y disminuye el coeficiente de difusión.  Una drástica disminución de su solubilidad, ya que los residuos hidrofóbicos del interior aparecen en la superficie.  Pérdida de las propiedades biológicas. 2. ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización? Con el ácido clorhídrico se tiene mayor poder de desnaturalización ya que tiene mayor pérdida de conformación nativa por ser éste un ácido fuerte y provocar cambios en sus propiedades. 3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína? Podríamos realizar sobre esa sustancia la reacción de Biuret para detectar la presencia de proteínas. 4. ¿Qué coloración da la reacción del Biuret? Provoca una coloración violeta cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas. 5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret? Sí, puesto que el reactivo reacciona con cualquier proteína ya sea líquida o sólida.
  17. 17. 6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué? Será negativa porque si analizamos un solo aminoácido, no hay ningún enlace peptídico puesto que este enlace se da entre dos aminoácidos, y la reacción de Biuret va a dar positivo cuando exista enlace peptídico (CO-NH) coordinándose con él el Cu en medio alcalino. 7.-Explica la reacción Xantoproteica La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la presencia de proteínas solubles en una solución, empleando ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro. La reacción xantoproteica se puede considerar como una sustitución electrofílica aromática de los residuos de tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dando un compuesto coloreado amarillo a pH ácido. Según las guías químicas es una reacción cualitativa, más no cuantitativa. Por ende determina la presencia o no de proteínas. Para cuantificar se usa otra reacción, como la de Biuret, y se hace un análisis espectro fotométrico. BIBLIOGRAFÍA. - Título: Desnaturalización de las proteínas. Tema: Desnaturalización de las proteínas. Link: http://www.ehu.eus/biomoleculas/proteinas/desnaturalizacion.htm - Título: Blogspot. Tema: Reconocimiento de prótidos. Link: http://gutierrezpechoainhoacmc.blogspot.mx/2011/03/reconocimiento-de- protidos.html - Título: Wikipedia. Tema: Reacción Xantoproteica. Link: https://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_xantoproteica

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