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Présenté par : FADI Ayman
Recherche et dénombrement d’Escherichia coli
Méthode du Nombre le Plus Probable (NPP)
PLAN
INTRODUCTION
La présence des microorganismes dans l’eau peut constituer un danger pour le
consommateur, il est donc nécess...
INTRODUCTION
Le dénombrement de ces microorganismes se fait soit par la méthode de filtration
sur membrane soit par la mét...
GENERALITES
Définitions:
Npp : Indice basé sur les lois statistiques qui représente le nombre
évalué de micro organismes ...
PRINCIPE DU NPP
Les prises d’essais de l’échantillon d’eau sont ensemencées dans un milieu de
culture liquide conçu pour p...
REFERENCES NORMATIVES
 Référence normative : NM ISO-9308-2
 But : La recherche et le dénombrement des Escherichia Coli e...
DOMAINE D’APPLICATION
 Cette méthode peut être appliquée à tous les types d’eau,
même ceux contenant une quantité appréci...
MODE OPERATOIRE
Matériel:
• Incubateur
• Tubes à essais
• Pipettes
• Autoclave
• Vortex
• Cloches de Durham
MODE OPERATOIRE
Milieux de culture
 Bouillon au lauryl-sulfate .
 Bouillon EC
 L’indole
MODE OPERATOIRE
Réactifs
 Réactif de KOVACS
Le réactif de KOVACS est destiné à la mise
en évidence de la production d’ind...
MODE OPERATOIRE
Réalisation des essais
Réalisation des essais
TEST
CONFIRMATIF
MODE OPERATOIRE
Coliformes fécaux
EC medium
Dénombrement des tubes positifs troubl...
EXPRESSION DES RÉSULTATS
 Exemple :
Echantillon sur milieux simple concentration(1ml)………….:3 tubes (+)
Dilution au 1/10……...
EXPRESSION DES RÉSULTATS
Lire la valeur du NPP dans la table de Mac
Grady et en déduire la concentration des
bactéries dan...
CONCLUSION
 Le mauvais côté de cette méthode est le
temps assez long pour la réalisation des
tests aussi que les différen...
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Recherche et dénombrement d’Escherichia coli par la méthode du Nombre le Plus Probable (NPP)

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Recherche et dénombrement d’Escherichia coli par la méthode du Nombre le Plus Probable (NPP)

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Recherche et dénombrement d’Escherichia coli par la méthode du Nombre le Plus Probable (NPP)

  1. 1. Présenté par : FADI Ayman Recherche et dénombrement d’Escherichia coli Méthode du Nombre le Plus Probable (NPP)
  2. 2. PLAN
  3. 3. INTRODUCTION La présence des microorganismes dans l’eau peut constituer un danger pour le consommateur, il est donc nécessaire de mettre en place des voies et moyens pour détecter les microorganismes présents dans l’eau. Les méthodes de détection sont utilisées soit pour dénombrer, soit pour déceler la présence d’un microorganisme spécifique (E. coli par ex).
  4. 4. INTRODUCTION Le dénombrement de ces microorganismes se fait soit par la méthode de filtration sur membrane soit par la méthode du nombre le plus probable. Cette dernière se base sur une estimation statistique du nombre des microorganismes supposés distribués dans l’eau d’une manière aléatoire.
  5. 5. GENERALITES Définitions: Npp : Indice basé sur les lois statistiques qui représente le nombre évalué de micro organismes présents dans 100 ml d'eau (par exemple coliformes) E. coli: c’est une bactérie coliforme, lactose +, oxydase -, en plus, elle produit du gaz à partir du mannitol ainsi que de l’indole à partir du tryptophane. Milieu de culture : C’est une préparation au sein de laquelle des micro-organismes peuvent se multiplier. Il doit donc satisfaire les exigences nutritives du micro-organisme étudié.
  6. 6. PRINCIPE DU NPP Les prises d’essais de l’échantillon d’eau sont ensemencées dans un milieu de culture liquide conçu pour permettre la croissance d’un microorganisme ou de groupe de microorganismes. La croissance se traduit par l’apparition d’un trouble du milieu et une production du gaz, éventuellement, une modification visible.
  7. 7. REFERENCES NORMATIVES  Référence normative : NM ISO-9308-2  But : La recherche et le dénombrement des Escherichia Coli et des bactéries coliformes présentes dans tous les types d’eau. Cette méthode consiste a calculer le nombre le plus probable des microorganismes par culture dans un milieu liquide dans une série de tubes.
  8. 8. DOMAINE D’APPLICATION  Cette méthode peut être appliquée à tous les types d’eau, même ceux contenant une quantité appréciable de particules en suspension
  9. 9. MODE OPERATOIRE Matériel: • Incubateur • Tubes à essais • Pipettes • Autoclave • Vortex • Cloches de Durham
  10. 10. MODE OPERATOIRE Milieux de culture  Bouillon au lauryl-sulfate .  Bouillon EC  L’indole
  11. 11. MODE OPERATOIRE Réactifs  Réactif de KOVACS Le réactif de KOVACS est destiné à la mise en évidence de la production d’indole à partir du Tryptophane par les bactéries qui possèdent une tryptophanase.
  12. 12. MODE OPERATOIRE Réalisation des essais
  13. 13. Réalisation des essais TEST CONFIRMATIF MODE OPERATOIRE Coliformes fécaux EC medium Dénombrement des tubes positifs trouble + gaz Indole 44°C+ 0.5 °C/24H Lecture sur la table de Mac graddy 44°C+ 0.5 °C/24H Addition de réactif Kovacs Coloration rose Choix des triplets
  14. 14. EXPRESSION DES RÉSULTATS  Exemple : Echantillon sur milieux simple concentration(1ml)………….:3 tubes (+) Dilution au 1/10………………………………………………………………:3 tubes (+) Dilution au 1/100………………………………………………………….…:2 tubes (+) Dilution au 1/1000…………………………………………………………..:1 tube (+) Dilution au 1/10 000………………………………………………..………:0 tube (+)
  15. 15. EXPRESSION DES RÉSULTATS Lire la valeur du NPP dans la table de Mac Grady et en déduire la concentration des bactéries dans l’échantillon : •choix de la dilution : 10-1 •Détermination du NPP : regroupement choisi = 321 dans la table de Mac Grady le NPP correspondant à 321 est 15. •Calcul : Fd V NPP N ensemencé  mLcoliformesN /10.5,115010 1 15 21 
  16. 16. CONCLUSION  Le mauvais côté de cette méthode est le temps assez long pour la réalisation des tests aussi que les différents milieux de cultures qui nécessite.  La méthode NPP est l’un des méthodes les plus précises en terme de résultats pour le dénombrement des bactéries.

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