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CITOGENÉTICA MOLECULAR

BÉJAR VILELA ROSARIO
CITOGENETICA MOLECULAR
 Se fundamenta en la capacidad que poseen los ácidos nucleicos para
hibridizarse entre sí.

 Perm...
CITOGENÉTICA MOLECULAR
 Biología molecular y citogenética.
 Utilización de una serie de técnicas del estilo de hibridaci...
FISH

 Método Directo: Utiliza nucleótidos marcados con
sustancias fluorescentes puede observarse la señal
inmediatamente...
ADNsc
- Reconoce 2 - 3% secuencias
centromericas.
- Detección de cromosomas
concretos
- Anormalidades numéricas

-

Secuencia es...
TECNICA DE FISH
 PREPARACION PREVIA DE LA MUESTRA
 PREPARACION DE LAS PLACAS
 PREPARACION DE LAS SONDAS
 HIBRIDACION
...
PCR
 Técnica que permite la amplificación in vitro de una
secuencia específica de ADN hasta generar millones de
copias de...
FASES DE AMPLIFICACIÓN DE PCR
Separar las hebras molde para la síntesis de
nuevas hebras

“Aparear” primers a la hebra mol...
 Sondas marcadas
fluorescentemente son para
cada cromosoma hechas
para marcar DNA específico
de cada cromosoma con
difere...
SKY
GRACIAS
Citogenética molecular
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Citogenética molecular

  1. 1. CITOGENÉTICA MOLECULAR BÉJAR VILELA ROSARIO
  2. 2. CITOGENETICA MOLECULAR  Se fundamenta en la capacidad que poseen los ácidos nucleicos para hibridizarse entre sí.  Permite la detección y localización de secuencias específicas de ADN.
  3. 3. CITOGENÉTICA MOLECULAR  Biología molecular y citogenética.  Utilización de una serie de técnicas del estilo de hibridación por fluorescencia in situ (FISH).
  4. 4. FISH  Método Directo: Utiliza nucleótidos marcados con sustancias fluorescentes puede observarse la señal inmediatamente después del FISH al microscopio de fluorescencia.  Método Indirecto: Utilizan sondas unidas a moléculas como la biotina o digoxigenina marcadas con sondas fluorescentes que permiten su observación al microscopio de fluorescencia. Hay una amplia variedad de sondas comerciales y tambien pueden fabricarse con la técnica “nick translation
  5. 5. ADNsc
  6. 6. - Reconoce 2 - 3% secuencias centromericas. - Detección de cromosomas concretos - Anormalidades numéricas - Secuencia especifica del ADN: LOCUS DETERMINADO - Reordenamiento estructurales - Anormalidades estructurales Detección de cromosomas concretos Anormalidades numéricas
  7. 7. TECNICA DE FISH  PREPARACION PREVIA DE LA MUESTRA  PREPARACION DE LAS PLACAS  PREPARACION DE LAS SONDAS  HIBRIDACION  LAVADOS POST-HIBRIDACION  DETECCION  TINCION DE CONTRASTE (yoduro de propidium o DAPI)  VISUALIZACION (microscopio de epifluorescencia)
  8. 8. PCR  Técnica que permite la amplificación in vitro de una secuencia específica de ADN hasta generar millones de copias de una manera rápida y sencilla  Permite analizar muestras con cantidades mínimas de ADN
  9. 9. FASES DE AMPLIFICACIÓN DE PCR Separar las hebras molde para la síntesis de nuevas hebras “Aparear” primers a la hebra molde para dirigir la síntesis de DNA . La síntesis de DNA requiere de primers para comenzar. Adición de nucleótidos, uno a la vez, para extender la hebra de DNA (extremo 3’) utilizando a la hebra madre como molde A partir de este ciclo, se empieza a acumular, de forma exponencial, la secuencia diana de ADN
  10. 10.  Sondas marcadas fluorescentemente son para cada cromosoma hechas para marcar DNA específico de cada cromosoma con diferentes fluoróforos.  La diferencia espectral generada por el etiquetado combinatorio son capturadas y analizadas usando un interferómetro agregado a un microscopio de fluorescencia.  El programa de procesamiento de imágenes entonces asigna un pseudocolor a cada combinación espectralmente diferente, permitiendo la visualización de cromosomas coloreados.
  11. 11. SKY
  12. 12. GRACIAS

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