SCALARADIAL, DOS
SESTERTERPENOS MARINAS COMO
POTENTES FACTORES QUE INDUCEN
APOPTOSIS EN LÍNEAS CELULARES DE
CARCINOMA HUMA...
INTRODUCCIÓN
• El cáncer es una
causa principal de
muerte en países
industrializados.
• Apoptosis: una forma
de muerte de ...
HIPÓTESIS
• El scalaradial y cacospongionoloide
inhiben la proliferación de células
cancerígenas e inducen apoptosis
OBJETIVOS
• Ver la capacidad del scalaradial y
cacospongionoloide para inhibir la
proliferación e inducir apoptosis en var...
MÉTODO EXPERIMENTAL
Scalaradial (SC) fue
aislado de la
esponja scalaris
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Cacospongionoloide
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ENSAYO COMETA
25 min
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CITOMETRÍA DE FLUJO
* Dihexyloxacarbocyanine
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Clasificación de células
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APOPTÓSIS EN MATRIZ
Kit de apoptosis de
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ANÁLISIS POR WESTERN BLOT
Células
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GAPDH • Densitom
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ANÁLISIS ESTADÍSTICO
• La significancia estadística fue calculada por
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• El nivel de s...
RESULTADOS
• Efecto de SC y CSP en viabilidad celular
EFECTO DE SC Y CSP EN
MORFOLOGÍA CELULAR
EFECTO DE SC Y CSP EN
FRAGMENTACIÓN DE DNA
EFECTO DE SC Y CSP EN
PROTEÍNAS SEÑALIZADORAS DE
APOPTOSIS
EFECTO DE INHIBIDORES DE
CASPSAS Y P53
EFECTO DE SC Y CSP EN
TRANSLOCACIÓN NUCLEAR P50 Y
P65
DISCUSIONES
T47D
HCT116
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HeLa
Reducen viabilidad
celular en de una
manera dependiente de
concentración.
Apoptosis
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Proteínas anti-
apoptoticas
son inhibidas
Survivin Bcl-2 IAPs
• Vía p53
• Vía
caspas
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CPS
Reguladas a
nivel
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CONCLUSIONES
• CS y CSP inducen muerte celular por
características como: reducción m y
fragmentación de DNA.
• SC y CSP no...
REFERENCIAS
• 1. World Health Organization (2005) Global action against
cancer. Geneva, Switzerland.
• 2. Al-Ejeh F, Kumar...
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Presentacion biologia celular (2)

  1. 1. SCALARADIAL, DOS SESTERTERPENOS MARINAS COMO POTENTES FACTORES QUE INDUCEN APOPTOSIS EN LÍNEAS CELULARES DE CARCINOMA HUMANO DANIELA DE STEFANO , JOSEFINA TOMMONARO , SHOAIB AHMAD MALIK, , CARMINE IODICE , SALVATORE DE ROSA , MARIA CHIARA MAIURI , ROSA CARNUCCIO. 2011
  2. 2. INTRODUCCIÓN • El cáncer es una causa principal de muerte en países industrializados. • Apoptosis: una forma de muerte de célula programada. • Productos marítimos naturales (sesterterpenoides), i mportantes en el descubrimiento y el desarrollo de nuevas
  3. 3. HIPÓTESIS • El scalaradial y cacospongionoloide inhiben la proliferación de células cancerígenas e inducen apoptosis
  4. 4. OBJETIVOS • Ver la capacidad del scalaradial y cacospongionoloide para inhibir la proliferación e inducir apoptosis en varias líneas de célula de carcinoma humanas. • Determinar apoptosis a través de diferentes métodos empleando células cancerigenas diferentes . • Determinar la vía por la cual producen apoptosis
  5. 5. MÉTODO EXPERIMENTAL Scalaradial (SC) fue aislado de la esponja scalaris Cacospongia Cacospongionoloide (CSP) se aisló de la esponja Fasciospongia cavernosa
  6. 6. CULTIVO CELULAR Cultivo celular de T74D, A431,HeLa Cultivo celular de HCT116 se sembraron en placas durante 24 hrs Incubación Ensayo de MTT para viabilidad celular Las células se sembraron en 96 plocillos de cultivo Las células fueron incubadas con SC ,CSP o solos Ensayo MTT Incubación durante 3 h Espectrofotómetro de micro placas
  7. 7. ENSAYO COMETA 25 min 25 min A un pH de 13 Células teñidas con bromuro de etidio Cuantificación de la fragmentación del ADN Acido tricloroacético 15 min Cuantificación (difenilamina)
  8. 8. CITOMETRÍA DE FLUJO * Dihexyloxacarbocyanine yoduro * Yoduro de propidio Clasificación de células HeLa y células HCT116
  9. 9. APOPTÓSIS EN MATRIZ Kit de apoptosis de matriz humana Células HeLa : tratadas y no tratadas Quimioluminiscencia Escaneo de membrana Cuantificació n : • Con tratamiento vs. Células sin tratar.Relación expresada:
  10. 10. ANÁLISIS POR WESTERN BLOT Células T47D Electrofor esis Anti-p50 Anti-p65 GAPDH • Densitom etria
  11. 11. ANÁLISIS ESTADÍSTICO • La significancia estadística fue calculada por one-way analysis de varianza ANOVA . • El nivel de significancia es definido como p<0.05
  12. 12. RESULTADOS • Efecto de SC y CSP en viabilidad celular
  13. 13. EFECTO DE SC Y CSP EN MORFOLOGÍA CELULAR
  14. 14. EFECTO DE SC Y CSP EN FRAGMENTACIÓN DE DNA
  15. 15. EFECTO DE SC Y CSP EN PROTEÍNAS SEÑALIZADORAS DE APOPTOSIS
  16. 16. EFECTO DE INHIBIDORES DE CASPSAS Y P53
  17. 17. EFECTO DE SC Y CSP EN TRANSLOCACIÓN NUCLEAR P50 Y P65
  18. 18. DISCUSIONES T47D HCT116 A431 HeLa Reducen viabilidad celular en de una manera dependiente de concentración. Apoptosis Reducción m Fragmentación de DNA
  19. 19. Proteínas anti- apoptoticas son inhibidas Survivin Bcl-2 IAPs • Vía p53 • Vía caspas SC y CPS Reguladas a nivel transcripcional por NF- B SC y CSP son capaces de inhibir translocación nuclear p50y p65.
  20. 20. CONCLUSIONES • CS y CSP inducen muerte celular por características como: reducción m y fragmentación de DNA. • SC y CSP no actúan vía p53; y la activación de las caspasas son las moléculas clave de su efecto. • La significativa reducción de la expresión de varias proteínas antiapoptóticas sugieren propiedades anticancerígenas prometedoras de SC y CSP. • SC y CSP son capaces de inhibir translocación nuclear p50y p65. • Son necesarias posteriores investigaciones
  21. 21. REFERENCIAS • 1. World Health Organization (2005) Global action against cancer. Geneva, Switzerland. • 2. Al-Ejeh F, Kumar R, Wiegmans A, Lakhani SR, Brown MP, et al. (2010) . Harnessing the complexity of DNA- damage response pathways to improve cancer treatment outcomes. Oncogene 29(46): 6085–6098. • 3. Udagawa T, Wood M (2010) Tumor-stromal cell interactions and opportunities for therapeutic intervention. Curr Opin Pharmacol 10(4): 369–374. • 4. Lin X, Liu M, Hu C, Liao DJ (2010) Targeting cellular proapoptotic molecules for developing anticancer agents from marine sources. Curr Drug Targets 11(6): 708–715. • 5. De Rosa S, Mitova M (2005) ‘‘Bioactive marine sesterterpenoids’’ in Studies in Natural Products Chemistry, Ed. Atta-ur- Rahman, Elsevier, Amsterdam, Netherlands Vol. 32, 109– 168. • 6. Napolitano JG, Daranas AH, Norte M, Ferna´ndez JJ (2009) Marine macrolides, a promising source of antitumor compounds. Anticancer Agents Med Chem 9(2): 122–137. • 7. . Liu Y, Levy R (1997) Phospholipase A2 has a role in proliferation but not in differentiation of HL-60 cells. Biochim Biophys Acta 1355(3): 270–280. • 8. Xie Y, Liu L, Huang X, Guo Y, Lou L (2005) Scalaradial inhibition of epidermal growth factor receptor-mediated Akt phosphorylation is independent of secretory phospholipase A2. J Pharmacol Exp Ther 314(3): 1210–1217. • 9. Ruipe´rez V, Casas J, Balboa MA, Balsinde J (2007) Group V phospholipase A2- derived lysophosphatidylcholine mediates cyclooxygenase-2 induction in lipopolysaccharide- stimulated macrophages. J Immunol 179(1): 631–638. • 13. De Rosa S, Crispino A, De Giulio A, Iodice C, Pronzato R, et al. (1995) ‘‘Cacospongionolide B, a new sesterterpene, from the marine sponge Fasciospongia cavernosa’’ J Nat Prod 58: 1776–1780. • 14. Zamzami N, Marchetti P, Castedo M, Decaudin D, Macho A, et al. (1995) Sequential reduction of mitochondrial transmembrane potential and generation of reactive oxygen species in early programmed cell death. J Exp Med 182: 367–377. • 15. Rook GA, Dalgleish A (2011) Infection, immunoregulation, and cancer. Immunol Rev 240(1): 141–159. • 16. Chaturvedi MM, Sung B, Yadav VR, Kannappan R, Aggarwal BB (2011) NFkB addiction and its role in cancer: ‘one size does not fit all’. Oncogene 30(14): 1615–1630. • 17. Beth L (2007) Autophagy and cancer. Nature 446: 745–747. • 18. Fedorov SN, Radchenko OS, Shubina LK, Balaneva NN, Bode AM, et al. (2006) Evaluation of cancer-preventive activity and structure-activity relationships of 3-demethylubiquinone Q2, isolated from the ascidian Aplidium glabrum, and its synthetic analogs. Pharm Res 23: 70–81. • 19. Fedorov SN, Shubina LK, Bode AM, Stonik VA, Dong Z (2007) Dactylone inhibits epidermal growth factor-induced transformation and phenotype expression of human cancer cells and induces G1-S arrest and apoptosis. Cancer Res 67: 5914–5920. • 20. Liu JJ, Lin M, Yu JY, Liu B, Bao JK (2011) Targeting apoptotic and autophagic pathways for cancer therapeutics. Cancer Lett 300(2): 105– 114. • 21. Demaria S, Pikarsky E, Karin M, Coussens LM, Chen YC, et al. (2010) Cancer and inflammation: promise for biologic therapy. J Immunother 33: 335–351. • 22. Richardson A, Kaye SB (2008) Pharmacological inhibition of the Bcl-2 family of apoptosis regulators as cancer therapy. Curr Mol Pharmacol 1(3): 244–254. • 23. Deorukhkar A, Krishnan S (2010) Targeting inflammatory pathways for tumor radiosensitization. Biochem Pharmacol 80(12): 1904–1914.

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