Tesi di Laurea in Medicina
Facoltà di Medicina e Psicologia – Università di Roma “La Sapienza”

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È Molto Diffusa
Un terzo della popolazione europea riporterà
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È Molto Diffusa
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Epigenetica
Renthal and Nestler
Dialog. Clin Neurosci 11, 2009

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Epigenetica

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SATB1 e SATB2 e le MAR
La cromatina è organizzata in anse.

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Le Matrix Attachment Regions (MARs) sono dei domini che permettono
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SATB1 e SATB2 e le MAR
I fattori SATB si legano alla base delle anse e fungono da landing point per
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Immunoreatività

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Immunoreatività
Mancanza di co-localizzazione tra FOXP2 e SATB21/ nel
complesso basolaterale dell’amigdala

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Immunoreatività
Assenza di espressione del SATB-1/2 nei neuroni

GABAergici inibitori nell’amigdala

Anti-GAD = rosso

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Training di Fear Conditioning
I dati mostrano l’efficacia del modello, con un aumento significativo del freezing

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Quantificazione segnale
Costante diminuzione a 24h e a 72h del segnale di
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Quantificazione segnale
Il segnale di SATB2 in amigdala basolaterale è
difficilmente apprezzabile e mostra una variazione ...
Interpretazioni
• Diminuzione di SATB1 nei topi trattati
• Diminuzione di SATB1 potrebbe impedire complessamento HDAC con
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Epigenetica?
Un meccanismo complesso per un sistema complesso

D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning s...
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Thesis Presentation: Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo

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Thesis Presentation: Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo

  1. 1. Tesi di Laurea in Medicina Facoltà di Medicina e Psicologia – Università di Roma “La Sapienza” Angelo D’Ambrosio “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo.”
  2. 2. La Patologia Psichiatria È Molto Diffusa Un terzo della popolazione europea riporterà una patologia psichiatrica nel corso della vita. (Alonso J, Angermeyer MC, Bernert S, et al., 2004) Prevalenza maggiori disturbi psichiatrici: •Disturbi d’ansia: 10.6% •Disturbi dell’umore: 6.8% •Schizofrenia: 0.4% •Disturbi della personalità: 13.4% D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 2
  3. 3. La Patologia Psichiatria È Molto Diffusa La maggior parte dei farmaci a nostra disposizione agisce sulle sinapsi e in partcolare sul sistema delle monoammine (serotina, noradrenalina, GABA) VIENE TRATTATO IL SINTOMO NON LA CAUSA D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 3
  4. 4. Epigenetica Renthal and Nestler Dialog. Clin Neurosci 11, 2009 D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 4
  5. 5. Epigenetica D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 5
  6. 6. SATB1 e SATB2 e le MAR La cromatina è organizzata in anse. D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 6
  7. 7. SATB1 e SATB2 e le MAR Le Matrix Attachment Regions (MARs) sono dei domini che permettono l’attracco del DNA alla matrice nucleare e la formazione e la regolazione delle anse della cromatina. D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 7
  8. 8. SATB1 e SATB2 e le MAR I fattori SATB si legano alla base delle anse e fungono da landing point per una molteplicità di effettori, fra i quali anche HDAC e HAT. D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 8
  9. 9. SATB1 e SATB2 I fattori SATB sono necessari per lo sviluppo di molte linee cellulari e sono coinvolti in alcune patologie. SATB1 Switch da emoglobina fetale ad adulta Differenziazione CD4+CD8+ Patologia SATB2 Necessario lyonizzazione chromosoma X Sviluppo osseo Attivazione IgM in cellule B Deficit causa ritardo mentale Fenotipo metastatico K mammella Nel Sistema Nervoso Sviluppo IEG Corretta formazione precoce delle spine dendritiche Patologia Deformazioni crani-facciali, palato schisi, ritardo mentale, Screening K Colon Retto Nel Sistema Nervoso Fenotipo cortico-corticale neuroni corteccia Swtich colinergico delle fibre sudoromotorie del simpatico D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 9
  10. 10. SATB1 e SATB2, Riassumendo I fattori SATB regolano l’espressione di molti geni permettendo la modifica della cromatina. Fungono quindi da interruttori generali del fenotipo cellulare. Le informazioni sulla loro funzione fa intuire un possibile ruolo nelle funzioni cognitive superiori e quindi anche nella loro patologia. Il nostro studio è un primo approccio alla definizione di SATB2 nei processi di apprendimento e affettivi. A tal fine abbiamo indagato l’effetto del modello del Fear Conditioning sull’espressione nell’amigdala di topo. D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 10
  11. 11. Fear Conditioning E’ un paradigma di memoria associativa. Presentando più volte uno stimolo emotivamente neutro, come un suono, con uno rilevante, come il dolore causato da una scossa elettrica, alla fine lo stimolo neutro sarà in grado autonomamente di provare risposte associate a quello rilevante. La risposta che noi andiamo a misurare è il freezing. D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 11
  12. 12. Amigdala D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 12
  13. 13. Protocolli Di Fear Conditioning D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 13
  14. 14. Protocollo Di Fear Conditioning Fear Acquisition US CS Pausa 2s 2s 30s 120s PreCS 2s 30s P P CS1 2s 30s CS2 2s 30s 30s P P CS3 CS4 30s 30s 120s CS4 PostCS Fear Extinction CS Pausa 30s 30s 120s PreCS P 30s P CS1 CS2 P CS3 CS14 120s CS15 PostCS Control Training 30s CS Pausa 30s 120s PreCS P CS1 CS2 Reinstatement US CS Pausa 30s P 30s 30s P P CS3 CS4 120s CS5 PostCS Fear Testing 2s CS 30s 120s 120s PreCS CS1 PostCS Pausa 30s 120s PreCS 120s CS1 PostCS D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 14
  15. 15. Metodi Topi C57/Bl6n. Perfusione tramite infusione transcardica di acido picrico e paraformaldeide. Immunostaining con immuno perossidasi e immuno fluorescenza. Anticorpi utilizzati per le proteine SAT: •Rabbit policlonale anti-SATB1 (rRbSATB1) [1:1000] da Abcam (ab49061) •Mouse monoclonale anti-SATB2 (mMsSATB2) [1:1500] da Abcam (ab51502) •Rabbit monoclonale anti-SATB12 (mRbSATB2) [1:500] da Abcam (ab92446) D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 15
  16. 16. Immunoreatività D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 16
  17. 17. Immunoreatività Mancanza di co-localizzazione tra FOXP2 e SATB21/ nel complesso basolaterale dell’amigdala Anti-FOXP2 = rosso mMs-SATB2 = verde D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 17
  18. 18. Immunoreatività Assenza di espressione del SATB-1/2 nei neuroni GABAergici inibitori nell’amigdala Anti-GAD = rosso mMs-SATB2 = verde D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 18
  19. 19. Training di Fear Conditioning I dati mostrano l’efficacia del modello, con un aumento significativo del freezing FA: fear acquisition FC: fear conditioning S/L: Short/Long D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 19
  20. 20. Quantificazione segnale Costante diminuzione a 24h e a 72h del segnale di SATB1 nell’amigdala basolaterale. D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 20
  21. 21. Quantificazione segnale Il segnale di SATB2 in amigdala basolaterale è difficilmente apprezzabile e mostra una variazione a campana, sebbene non significativa. D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 21
  22. 22. Interpretazioni • Diminuzione di SATB1 nei topi trattati • Diminuzione di SATB1 potrebbe impedire complessamento HDAC con cromatina, favorendo la trascrizione genica necessaria per plasticità sinaptica • SATB1 e SATB2 potrebbero interagire positivamente o negativamente. • Impossibile valutare effetti di modifiche post-trascrizionali su SATB1 e SATB2. • In futuro sarà necessario sviluppare dei knock-out condizionali per valutare gli effetti del deficit dei fattori SATB sull’apprendimento di ansia e paura nel Fear Conditioning. D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 22
  23. 23. Epigenetica? Un meccanismo complesso per un sistema complesso D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012 23
  24. 24. GRAZIE!

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