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CRITERIOS de CLASIFICACIÓN
• La identificación de bacterias puede basarse en
muchos caracteres:
• Morfología celular
• Pre...
Morfología
Reacción de Gram
Metabolismo
Requerimiento de O2
Aerobias /anaerobias
facultativas
GRAM (+)
Cocos
Catalasa (+)
...
Cocos Gram (+) más frecuentes en
infecciones humanas
GENERO ESPECIE
Catalasa (+) S. aureus
Staphylococcus S. epidermidis
S...
Cocos Gram (+) más frecuentes en
infecciones humanas
GENERO ESPECIE
Catalasa (-) S. pyogenes
S. agalactiae
Estreptococos G...
Catalasa (+)
• Micrococcus
• Kocuria*
• Nesterenkonia*
• Kytococcus*
• Dermatococcus*
• Arthrobacter*(>BGP)
• Alloiococcus...
CPCatalasa +: Algoritmo
Bacitracina 0.04 UI
Resistente
Staphylococcus
Macrococcus*
Sensible
ClNa 6,5%
Rothia mucilaginosa
...
Género Staphylococcus
Producción de
Coaguasa
Sensibilidad a
Novobiocina
Uso del medio
Chapman
Diferenciación presuntiva del Gro. Staphylococcus
Staphylococcusspp
COAGULASA
(+)
S. aureus
(-)
NOVOBIOCINA (5µg)
R
S. sap...
Diferenciación presuntiva del Gro. Staphylococcus
+ Frecuentes S. aureus
S. epidermidis
S. Saprophyticus
S. haemolyticus
S...
CPCatalasa -: …Algoritmo
• Frecuencia de los Géneros
Géneros más frecuentes Streptococcus
Enterococcus
Géneros menos frecu...
CPCatalasa -: Algoritmo
Hemólisis (A sangre
carnero)
ß
Tabla A
No-ß (α – γ)
Morfología en
m. líquidos
Cadenas
Vancomicina ...
Tabla A: Estreptococos ß-H
Especie/Grupo
Reacción Bioquímica
BE ClNa Ba Hip PYR Grupo CAMP VP
S. pyogenes - - + - + A - -
...
Tabla C: no-ßH-Vanco-S
Especie/Grupo REACCIÓN BIOQUÍMICA
OPT SB BE ClNa Hip PYR HEM Grupo
serológico
S. pneumoniae + + - -...
Tabla D
Diferenciación entre los Grupos S. bovis y G. viridans
PYR (-); BE (+); ClNa (-); ADH (-); VP (+)
Manitol
(+) /Sor...
Tabla B
CGP/ en cadenas / Catalasa (-) / Vanco-R
PYR
(+)
Enterococcus spp
(-)
Cadenas
Leuconostoc spp
Bacilos
Probable
Lac...
Género Enterococcus
BE (+); ClNa (+); PYR (+); LAP (+)
Especie REACCIÓN BIOQUÍMICA
Hemólisis Pir Arg Man Sorbi Sor Ara Raf...
Identificación de Estreptococos del Grupo Viridans
Enterobacterias
Diferenciación entre Escherichia coli y Citrobacter feundii
Bacteria Levine TSI Citrato LDC Indol
E. Coli ...
Enterobacterias
Diferenciación entre las distintas especies de los géneros Klebsiella, Enterobacter y Serratia
Bacteria TS...
Enterobacterias
Diferenciación bioquímica entre P. mirabilis, P. vulgris y P. penneri
Bacteria Invasión
en Agar
Levine TSI...
Bacteria Invasion
en Agar
Levine TSI IMViC LDC U F. A. ODC
M. morganii No S/C OH/H
gas
++-- - + + +
Providencia
spp
No S/C...
Bacteria Levine TSI IMViC U
Adonitol
Manitol
Inositol
Arabitol
Trehalosa
P. rettgeri S/C OH/H
Sin gas
++-+ + + + + + -
P. ...
Bacteria Levine TSI LDC IMViC U
Salmonella entérica
serovar Typhi *
S/C OH/H
Anillo negro
Sin gas
+ -+-- -
Salmonella enté...
Bacteria Levine TSI IMViC LDC ODC U Acetato
E. Coli
(inactivo) Sin cambio Alcalino
ácido/sin
gas
++-- V V - V
Shigella spp...
Bacteria TSI LDC U IMViC
Proteus spp* OH/H
Fondo negro
con gas
Desaminada + V+-V
Salmonella entérica
(no Typhi)
OH/fondo n...
Enterobacterias
Diferenciación bioquímica entre las familias Vibrionaceae, Aeromonadaceae y
Enterobacteriaceae
FAMILIA Pru...
BGN-Fermentadores Oxidasa (+)
GÉNEROS Especies más frecuentes
A. hydrophila
Aeromonas (Aeromonadaceae ) A. sobria
A. cavia...
Diferenciación bioquímica entre los géneros de la familia Vibrionaceae,
Aeromonadaceae y del género Plesimonas .
Género He...
BGN-NO Fermentadores de Glucosa
Géneros más
frecuentes
Pseudomonas, Acinetobacter, Stenotrophomonas
Burkholderia, Achromob...
Pseudomonas del grupo
fluorescentes
Especie P. fenacínico1 P. fluorescente ADH Glu (Ox.) Gelatinasa 42°C
P. aeruginosa +* ...
Microorganismo
42°C Gela-
tina
ADH LCD U Glu Lac Manit Xil
Complejo BC V V + V V + V + V
P. aeruginosa + V + - V + - V +
P...
Diferenciación BQM de BGNNF
Ox. (-) más frecuentes
Especie
Morfología
Oxidasa
Motilidad
LDC
Esculina
DNAsa
Manitol
ONPG
S....
Microorganismo
Movilidad LCD U Glu Maltosa Hidrólisis
de la
Esculina
Complejo BC + V V + + V
S. maltophilia + + - + + V
Ac...
Género Stenotrophomonas
Especie de importancia clínica: S. maltophilia
Características culturales y bioquímicas
 Hemólisi...
Género Neisseria y relacionados
Microorganismo
Morfología
(Gram)
Oxidasa
Catalasa
Superoxol
TM AN
Pigmento
TSI
DNasa
GMLSF...
Diferenciación de las especies del género
Haemophilus
Especie Requerimiento de factores Hemólisis
X (protoprfirina) V (NAD...
BGP aerobios más frecuentes en
muestras clínicas
Especie* Catalasa Hemólisis Pig. rosado Kinyoun Motilidad
Corynebacterium...
BGPositivos: diferenciación:
Listeria, Enterococcus y S. agalactiae
Especie Catalasa Hemólisis
ClNa
6,5%
BE Movilidad CAMP...
Procesa-
miento
de
la
Muestra
Algoritmo de Trabajo
Muestra
Observación
Macroscópica:
Consistencia, moco,
pus, sangre
Microscópica
Fresco
/coloraciones
S...
EMB: búsqueda de EPEC-Salmomella spp y Shigella spp
EMB
Colonias Fermentadoras de
LACTOSA: Brillo metálico
4 colonias al a...
ESQUEMA ► 1
Bacteria Levine TSI Citrato LDC Indol
E. Coli Colonias con
brillo metálico
H+/gas - V +
C. freundii H+/fondo n...
ESQUEMA ► 2
Bacteria Levine TSI Citrato LDC SIM Urea
E. coli
CT
OH-/ H+/gas - V - + + -
Shigella spp OH-/ H+/gas (-) - - -...
Tablas de Identificación
Agar SS: Salmonella spp – Shigella spp
Agar SS (24-48h)
Colonias Centro negro/SH2 (+)
LIA
+ /SH2 (+) ► 4
Colonias Transpar...
ESQUEMA ►3
Bacteria SS TSI LDC IMViC U
Salmonella entérica serovar
Typhi *
CT OH/H
Anillo negro
Sin gas
+
- + - -
-
Salmon...
Bacteria TSI LDC U IMViC
Proteus spp* OH/H
Fondo negro
con gas
Desaminada + V+-V
Salmonella entérica
(no Typhi)
OH/fondo n...
3- F-AISLAMIENTO DE E. coli PRODUCTOR DE VEROCITOTOXINA
Asociado a Diarrea Hemorrágica y Síndrome Urémico Hemolítico
Suspe...
Búsqueda de E. coli enterohemorrágica (ECEH)
Agar Mc Conkey con Sorbitol
10 colonias NO fermentadoras de Sorbitol
Confirma...
Búsqueda de Vibrio cholerae
AGUA PEPTONADA ALCALINA
INCUBAR 6-8 HS A 37 ºC
REPIQUE A AGAR TCBS
INCUBAR 18-24 HS A 37ºC
COL...
Búsqueda de Vibrio cholerae: BQM
Características BQM Resultado
Hemólisis ß o γ
TSI H+ / H+ / sin gas
Citrato de Simmons +
...
Diferenciación de Vc
Diferenciación serológica
Especie Aglutinación Con antisuero O1 Clínica
Vibrio cholerae O1 + Causa el...
Búsqueda de Aeromonas spp
Medio de siembra: Agar Sangre(AS) o AS con Ampicilina 30 Ug/ ml.
AS
Colonias Beta hemolíticas
(o...
DIFERENCIACIÓN DE LOS GENEROS DE LA FAMILIA VIBRIONACEAE
VIBRIO AEROMONAS PLESIOMONAS
Hemólisis ,, , 
Dnasa + + -
OD...
Esculina Gas de
Glucosa
ODC LDC VP Manitol Sacarosa Indol
Grupo hydrophila* + + - + + + + +
Grupo
caviae*
+ - - - - + + +
...
Algoritmo de Fauces: A.S.carnero
Colonias ß-Hemolíticas
BCITRACINA - PYR
1:S/ (+) – 2:R / (+) – 3:R / (-)
3-Otros Estrepto...
Esputo: Criterio de aceptación
Células Epiteliales
Planas
PMN Criterio
< 10 > 25 Aceptable
10 - 25 > 25 Aceptable
> 25 > 2...
Esputo: Procesamiento
Esputo
Ex. macroscópico
Aspecto:
salivoso,
mucopurulento,
hemoptoico
Ex. microscópico
Celulas en fre...
Aspirado traqueal: Procesamiento
Aspirado traqueal
Ex. macroscópico
Aspecto:
salivoso,
mucopurulento,
hemoptoico
Ex. micro...
Aspirado traqueal: Procesamiento
0,5 ml Secreciones + 0,5 ml Sol. Fisiol. = 1 (1/2)
0,1 ml de 1 + 0,9 ml Sol. Fisiol. = 2 ...
Lavado Bronco Alveolar
BAL
< 1% CEE / Macrófagos alveolares
Homogeneizar en Vortex 1 - 2’
Mx. sin centrifugar
Siembra: 0,5...
Cepillo Protegido
Cepillo Protegido
Homogeneizar en Vortex 1 ’ en 1 ml de BHI
Mx. sin
centrifugar
Sembrar 0,1 ml
AS + Ach ...
Utilidad de las Muestras
Mx E At BAL Cepillo Bx. Pulmón
Contaminación
orofaríngea
+++ ++ + NO NO
Mx
representativa
< 10 CE...
Micobacterias patógenas oportunistas y saprófitas
Velocidad de
Crecimiento
Pigmentación Pat. oportunistas No o rara vez
pa...
Estudio del exudado vaginal (FSP)
FV
pH
(FSMedio)
SF
Obs. En Fresco
Levaduras
Trichomonas
vaginalis
Test con KOH
Medio de
...
Estudio de Endocervix
Endocervix
M. de Transporte
Siembra en A-Sangre*
Thayer Martin
Oxidasa
(+)/dc(-)
Coloraciones / GRAM...
Investigación de EBH
Hisopado introito vaginal + hisopado perineal
Caldo Todd-Hewitt (Ac. Nal 15 µg/ml + Colistin (10 µg/m...
Diferenciación:
Listeria, Enterococcus y S. agalactiae
Especie Catalasa Hemólisis BE CAMP PYR
Listeria
monocytogenes
+ ß +...
Vaginosis Bacteriana: Criterios
1-Amsel y col.: 3 ó más de los siguientes criterios
*Presencia de flujo vaginal abundante,...
Vaginosis bacteriana
Infecciones Vs. Dx. Diferecial
Criterio Dx Normal VB Vaginitis x TV Vaginitis por
Candida
pH 3.8 – 4.2 > 4.5 > 4.5 < 4.5
S...
Investigación de CT en nuestras clínicas
Muestra Clínica
Detección por (Ag) Serología
(Ac)
Cultivo
celular
PCR Elisa IFD
H...
Micoplasmas
Especies Cuadro clínico Diagnóstico
M. pneumoniae NMN atípica Cultivo
Elisa
Sondas de DNA
PCR
IFD / Ac
M. homi...
Procesamiento de las Mx.
Especie Ferment. de GLU H. de ADH H. De UREA
M. hominis - + -
U. urealyticum - - +
M. hominis + -...
Características de LCR en MNG
Etiología Citología Química Aspecto
Células
mm3
L (%) PNM (%) Glu
(mg%)
∏
(mg%)
Cl
(mEq/l)
V...
LCR: Etiología según la edad
Huésped Agente
Neonatos (0 – 2 meses) ENTB (Escherichia coli)
Streptococcus agalactiae
Lister...
LCR: Etiología en
Inmunosuprimidos
Alteración en la
Inmunidad Celular
Cryptococcus neoformans
Mycobacterium tuberculosis
L...
Líquido de derrame pleural
Características Trasudado Exudado Empiema
Derrame PN no
complicado
Derrame PN
complicado
Aspect...
Tipos de medios
Medio Características
Basal Permiten crecer casi todas las
bacterias.
Selectivos Favorecen el crecimiento ...
Medio (S) Componentes Utilidad/Aplicación
Agar sangre Agar tripticasa –soja, agar brucella o
infusión de carne y corazón c...
Medio (S) Componentes Utilidad/Aplicación
Agar de
Skirrow
Agar base de peptona y proteína de
soja, con lisado de sangre de...
Medio (L) Componentes Utilidad/Aplicación
Caldo
Selenito
Caldo base de peptona con sales
biliares y citrato férrico.
Medio...
Catalasa
Determina la capacidad de producir la enzima catalasa.
Staphylococcus spp catalasa (+)
Streptococcus spp y Entero...
OXIDASA
Identifica bacterias que contengan la enzima
citocromo oxidasa (respiración).
Enterobacteriacae (-)
Pseudomonadace...
Coagulasa
Determina la capacidad de coagular el plasma
por la acción de la enzima coagulasa.
Permite diferenciar S. aureus...
Hidrólisis del DNA
Detecta la enzima termoestable
«DNAsa», capaz de romper los
enlaces Fosfodiéster de la molécula
del DNA...
Ensayo de ureasa
Para diferenciar organismos capaces de hidrolizar urea
con la ureasa (Tribu Proteae).
El medio contiene U...
Prueba de PYR
Detecta la actividad de la enz. l-pirrolidonilarilamidasa
(PYRasa), que hidroliza el sustrato pirrolidonil-ß...
Prueba de LAP
Determina la presencia de la enzima leucino
aminopeptidasa (LAP). Los discos contienen el
sustrato: leucina-...
Fenilalanina deaminasa
Detecta la acción de la enzima fenilalanina deaminasa.
Diferencia Morganella, Providencia, y Proteu...
Sensibilidad a Bacitracina
Se usa en la confirmación presuntiva de
Streptococcus pyogenes, ya que, a diferencia
de la mayo...
Sensibilidad a Novobiocina
Esta prueba puede utilizarse
para la identificación
diferencial de Staphylococcus
saprophyticus...
Sensibilidad a Optoquina
Esta prueba puede utilizarse para la identificación
diferencial de Streptococcus pneumoniae dentr...
Factor CAMP
Permite detectar una proteína extracelular difusible,
«Factor CAMP» Que actúa en forma sinérgica con la
betali...
Hidrólisis de la Bilis Esculina (BE)
Medio de cultivo contiene extracto de carne,
peptona de carne (nutrientes), bilis de ...
Tree Sugar Iron Agar (TSI)
Diferencia bacterias por su capacidad para fermentar glucosa,
lactosa y/o sucrosa, y para produ...
El medio contiene peptona, Glu, Sac, Lac, tiosulfato y
una sal férrica. El indicador es rojo fenol (amarillo a
pH< 6,8 / r...
Resultados (Tubo/Base) Símbolo Interpretación
Rojo/Amarillo K/A
Solo fermenta la Glucosa, y
luego utiliza las peptonas
Ama...
Resultados (Tubo/Base) Símbolo Interpretación
Rojo/Amarillo con
disrupción del agar K/A,G
Solo fermenta la Glucosa, con
pr...
Prueba de I.M.V.iC
1-Indol
2-Rojo de Metilo
3-Voges Proskauer
4-Citrato
Producción de Indol (1)
Identificar bacterias por su capacidad de producir
indol usando la enzima triptofanasa, la cual
co...
Triptofano Indol + ácido piruvico + amonio
triptofanasa
Indol + p-dimetletilenamino-benzaldehido Rosindol (Rojo)
HCl
Alcoh...
El triptofano se adiciona al medio en una concentración
1%. Esta presente en peptonas obtenidas por digestión
enzimática.
...
Positive positive negative control.
Glucosa Piruvato Lactato
Acetil-CoA
Formiato
Etanol
CO2
Acetato
H2
Succinato
+
CO2
Fermentación acido-mixta
Voges-Proskauer (VP - 3)
Algunos microorganismos no producen suficientes ácidos
estables que bajen el pH. El producto fina...
Glucosa Piruvato Lactato
Acetil-CoA
Formiato
Etanol
CO2
Acetato
H2
Succinato
+
CO2
Glucosa Piruvato
2.3 Butanodiol + CO2
E...
Determinar si un microorganismo es capaz de utilizar Citrato como
única fuente de carbono.
Citrato (4)
Citrato de Sodio Ac...
Agar Citrato (de Simmons): Es un
medio definido que contiene
Citrato de Sodio como única
fuente de C y amonio como
fuente ...
Reducción de nitrato
Muestra la capacidad de Reducir NO3 a nitrito NO2 / o
N2 por acción de la enzima Nitrato Reductasa.
N...
Si no hay color: 1-el nitrato no se Redujo
2-se redujo a otros compuestos. (N2)
Test (-): El Zn0 reduce el nitrato a nitri...
Si no hay color: 1-el nitrato no se Redujo
2-se redujo a otros compuestos. (N2)
Test (+): El Zn0 reduce el nitrato a nitri...
Ensayo de decarboxilasas
Muestra la capacidad para decarboxilar un aminoácido.
En esta reacción se remueve el grupo carbox...
LIA (Lysine Iron Agar)
Pone en evidencia:
*la decarboxilación de Lisina (aa), en diamina cadaverina
*la desaminación de la...
LIA (Lysine Iron Agar)
S/inocular
DesaminaciónDecarboxilación
(+) (-)
Descarboxilación
SH2 (+)
LIA (Lysine Iron Agar)
S/inocular
Proteus sppEscherichia coli
Shigella spp
Salmonella
Proteus spp
SIM (Sulfídrico – Indol – Motilidad)
Tiene peptona como sustrato principal, adicionado de
tiosulfato sódico, Fe y amonio.
...
SIM (Sulfídrico – Indol – Motilidad)
Tiene peptona como sustrato principal, adicionado de
tiosulfato sódico, Fe y amonio.
...
SIM (Sulfídrico – Indol – Motilidad)
Tiene peptona como sustrato principal, adicionado de
tiosulfato sódico, Fe y amonio.
...
SIM (Sulfídrico – Indol – Motilidad)
Tiene peptona como sustrato principal, adicionado de
tiosulfato sódico, Fe y amonio.
...
Orientación para la identificación bacteriana y el procesamiento de muestras clínicas
Orientación para la identificación bacteriana y el procesamiento de muestras clínicas
Orientación para la identificación bacteriana y el procesamiento de muestras clínicas
Orientación para la identificación bacteriana y el procesamiento de muestras clínicas
Orientación para la identificación bacteriana y el procesamiento de muestras clínicas
Orientación para la identificación bacteriana y el procesamiento de muestras clínicas
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Orientación para la identificación bacteriana y el procesamiento de muestras clínicas
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Orientación para la identificación bacteriana y el procesamiento de muestras clínicas

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Guía digital:Orientación para la identificación bacteriana y el procesamiento de muestras clínicas. Materia: Microbiologia clínica Unidad: Bacteriología de la Universidad nacional Arturo Jauretche. Material realizado por la Dra. Ana Togneri

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Orientación para la identificación bacteriana y el procesamiento de muestras clínicas

  1. 1. CRITERIOS de CLASIFICACIÓN • La identificación de bacterias puede basarse en muchos caracteres: • Morfología celular • Presencia o ausencia de estructuras especiales: flagelos, endosporas. • Reacción frente a colorantes (Tinción) • Fisiología: Condiciones necesaria para su desarrollo / crecimiento (T°; Atm: O2, CO2, etc.) • Bioquímica: metabolismo (fermentación de carbohidratos; fuente de carbono, etc.) • Morfología de las colonias
  2. 2. Morfología Reacción de Gram Metabolismo Requerimiento de O2 Aerobias /anaerobias facultativas GRAM (+) Cocos Catalasa (+) Staphylococcus spp Catalasa (-) Enterococcus spp Bacilos GRAM (-) Cocos Bacilos Fermentadores de Glucosa Enterobacteriaceae No fermentadores de Glucosa Anaerobias Esporuladas/No esporuladas
  3. 3. Cocos Gram (+) más frecuentes en infecciones humanas GENERO ESPECIE Catalasa (+) S. aureus Staphylococcus S. epidermidis S. saprophyticus Otras especies Micrococcus spp y otros gérmenes relacionados Rothia (Stomatococcus) mucilaginosa
  4. 4. Cocos Gram (+) más frecuentes en infecciones humanas GENERO ESPECIE Catalasa (-) S. pyogenes S. agalactiae Estreptococos Grupo C-G Streptococcus S. pneumoniae E. Grupo viridans Grupo S. bovis S. Salivarius y S. uberis Enterococcus E. faecalis E. faecium E. raffinosus -74-
  5. 5. Catalasa (+) • Micrococcus • Kocuria* • Nesterenkonia* • Kytococcus* • Dermatococcus* • Arthrobacter*(>BGP) • Alloiococcus (Cat.débil) • Rothia mucilaginosa (Cat.∆) Catalasa (-) • Lactococcus • Vagococcus • Dolosicoccus • Abiotrophia** • Grabulicatella** • Globicatella • Leuconstoc • Gemella • Pediococcus • etc *Relacionados con Micrococcus Cocos Gram (+): Otros géneros ** EVN
  6. 6. CPCatalasa +: Algoritmo Bacitracina 0.04 UI Resistente Staphylococcus Macrococcus* Sensible ClNa 6,5% Rothia mucilaginosa (Se adhiere al agar) Micrococcus spp y géneros relacionados *Aún no se aislaron en humanos // R: ausencia de halo de inhibición
  7. 7. Género Staphylococcus Producción de Coaguasa Sensibilidad a Novobiocina Uso del medio Chapman
  8. 8. Diferenciación presuntiva del Gro. Staphylococcus Staphylococcusspp COAGULASA (+) S. aureus (-) NOVOBIOCINA (5µg) R S. saprophyticus S (>16mm) ECN
  9. 9. Diferenciación presuntiva del Gro. Staphylococcus + Frecuentes S. aureus S. epidermidis S. Saprophyticus S. haemolyticus S. hominis S. lugdunensis S. warneri S. capitis - Frecuentes S. simulans S. auricularis S. xylosus S. schleiferi S. cohnii S. saccharolyticus otros Otras Pruebas Bioquímicas Fosfatasa OH- Ornitina Decarboxilasa Hidrólisis de Urea Producción de Acetoína PYR Acido de: *D-Trehalosa *D-Manitol *D-Manosa
  10. 10. CPCatalasa -: …Algoritmo • Frecuencia de los Géneros Géneros más frecuentes Streptococcus Enterococcus Géneros menos frecuentes Lactococcus Aerococcus Gemella Pediococcus Leuconostoc EVNutricionales
  11. 11. CPCatalasa -: Algoritmo Hemólisis (A sangre carnero) ß Tabla A No-ß (α – γ) Morfología en m. líquidos Cadenas Vancomicina (30 µg) R (Tabla B) S (Tabla C) Grupos Vancomicina (30 µg) R Pediococcus S Otros géneros Si es α Optoquina «S» S. pneumoniae *Aún no se aislaron en humanos // R: ausencia de halo de inhibición
  12. 12. Tabla A: Estreptococos ß-H Especie/Grupo Reacción Bioquímica BE ClNa Ba Hip PYR Grupo CAMP VP S. pyogenes - - + - + A - - S. agalactiae - V -* + - B + - S. Grupo C - - -* - - C - - S. Grupo G - - -* - - G - - Enterococcus faecalis + + - V + D - - Grupo S. anginosus V - -* - - ** - + * Puede haber excepciones ; ** A,C,G,F, o no agrupable -80-
  13. 13. Tabla C: no-ßH-Vanco-S Especie/Grupo REACCIÓN BIOQUÍMICA OPT SB BE ClNa Hip PYR HEM Grupo serológico S. pneumoniae + + - - - -/+ α ------------ Grupo «S. bovis»1 - - + - - - γ/α D S. agalactiae - - - V + - γ/α B Grupo «S. viridans»2 - - -* - - - γ/α diversos Enterococcus spp - - + + V + γ/α D 1-2 : Diferenciación: Tabla D EGV: Grupos: S. anginosus S. mitis S. sanguinis S. mutans S. salivarius
  14. 14. Tabla D Diferenciación entre los Grupos S. bovis y G. viridans PYR (-); BE (+); ClNa (-); ADH (-); VP (+) Manitol (+) /Sorbitol (+) / S. mutans (-) /S. bovis I (Almidón +) (-) / Polisacárido extracelular (+) / S. slivarius (Ureasa V) (-) /S bovis II
  15. 15. Tabla B CGP/ en cadenas / Catalasa (-) / Vanco-R PYR (+) Enterococcus spp (-) Cadenas Leuconostoc spp Bacilos Probable Lactobacillus spp
  16. 16. Género Enterococcus BE (+); ClNa (+); PYR (+); LAP (+) Especie REACCIÓN BIOQUÍMICA Hemólisis Pir Arg Man Sorbi Sor Ara Raf E. faecalis γ(ß/α) + + + + - - - E. faecium γ/α - + + - - + - E. raffinosus γ/α + - + + + + +
  17. 17. Identificación de Estreptococos del Grupo Viridans
  18. 18. Enterobacterias Diferenciación entre Escherichia coli y Citrobacter feundii Bacteria Levine TSI Citrato LDC Indol E. Coli Colonias con brillo metálico Ácido/gas - V + C. freundii Ác./fondo negro/gas + - - Diferenciación entre Escherichia coli lactosa (+) lenta y Morganella morganii Bacteria Levine TSI IMViC LDC U F. Alc. ONPG E. coli Sin cambio Alcalino ácido/gas ++-- V - - + M. morganii ++-- - + + -
  19. 19. Enterobacterias Diferenciación entre las distintas especies de los géneros Klebsiella, Enterobacter y Serratia Bacteria TSI IMViC LDC ODC Motil. DNasa Polimixina K. pneumoniae Ac/gas --++ + - - - S E. cloacae --++ - + + - S E. aerógenes --++ + + + - S S. marcescens Ac/Ac. con o sin gas --++ + + + + R
  20. 20. Enterobacterias Diferenciación bioquímica entre P. mirabilis, P. vulgris y P. penneri Bacteria Invasión en Agar Levine TSI IMViC LDC ODC P. mirabilis +/- S/C OH fondo negro - + - V Desaminada + P. vulgris H fondo negro + + - V - P. penneri Ac/con o sin gas - + - - - P. mirabilis, P. vulgris y P. penneri: Ureasa + / Fenil Alanina + / Polimixina R
  21. 21. Bacteria Invasion en Agar Levine TSI IMViC LDC U F. A. ODC M. morganii No S/C OH/H gas ++-- - + + + Providencia spp No S/C OH/H Sin gas ++-+ Desaminada V + - Diferenciación entre Morganella morganii y Providencia spp. Enterobacterias F.A.= Fenil Alanina
  22. 22. Bacteria Levine TSI IMViC U Adonitol Manitol Inositol Arabitol Trehalosa P. rettgeri S/C OH/H Sin gas ++-+ + + + + + - P. stuartii U+ S/C OH/H Sin gas ++-+ + - - + - + P. suartii U- S/C OH/H Sin gas ++-+ - - - + - + P. alcalifaciens S/C OH/H Sin gas ++-+ - + - - - - Diferenciación entre las especies del género Providencia (LDC: desaminada; FA: +) Enterobacterias Las especies del género No invaden al agar
  23. 23. Bacteria Levine TSI LDC IMViC U Salmonella entérica serovar Typhi * S/C OH/H Anillo negro Sin gas + -+-- - Salmonella entérica *(no Typhi) S/C OH/fondo negro/ gas + -+-+ - Shigella spp** S/C OH/H Sin gas - V+-- - Diferenciación entre Salmonella entérica serovar Typhi , Salmonella entérica (no Typhi) y Shigella spp Enterobacterias Las especies del género No invaden al agar *Se confirma empleando antisueros correspondientes. S. Typhi presenta el Ag Vi, **Requiere confirmación serológica
  24. 24. Bacteria Levine TSI IMViC LDC ODC U Acetato E. Coli (inactivo) Sin cambio Alcalino ácido/sin gas ++-- V V - V Shigella spp V+-- - -* - - Diferenciación entre Escherichia coli lactosa (+) lenta y Shigella spp Enterobacterias *S. sonnei es ODC +
  25. 25. Bacteria TSI LDC U IMViC Proteus spp* OH/H Fondo negro con gas Desaminada + V+-V Salmonella entérica (no Typhi) OH/fondo negro con gas + /SH2+ - -+-+ Citrobacter freundii OH/fondo negro con gas - /SH2+ V -+-+ Edwardsiella tarda* OH/fondo negro con o sin gas + /SH2+ - ++-- Diferenciación bioquímica de los géneros de Enterobacteriaceae fuerte productoras de SH2 Enterobacterias * E. tarda y Proteus spp son R a Polomixinas / Colistín
  26. 26. Enterobacterias Diferenciación bioquímica entre las familias Vibrionaceae, Aeromonadaceae y Enterobacteriaceae FAMILIA Pruebas Bioquímicas Fermentación de la Glucosa (TSI) Oxidasa Vibrionaceae, Aeromonadaceae + + Enterobacteriaceae + -
  27. 27. BGN-Fermentadores Oxidasa (+) GÉNEROS Especies más frecuentes A. hydrophila Aeromonas (Aeromonadaceae ) A. sobria A. caviae V. cholerae Serogrupo O1 No O1 V. parahemolyticus Vibrio (Vibrionaceae) V. fluvialis V. vulnificus V. algynoliticus Plesiomonas (Enterobacteriaceae) P. shigelloides
  28. 28. Diferenciación bioquímica entre los géneros de la familia Vibrionaceae, Aeromonadaceae y del género Plesimonas . Género Hemólisis ClNa 6,5% ODC S a O129 DNAsa Aeromonas ß - -* - + Vibrio ß, α, γ V V + / - + Plesiomonas γ - + + - * Excepto Aeromonas veronii biotipo veronii
  29. 29. BGN-NO Fermentadores de Glucosa Géneros más frecuentes Pseudomonas, Acinetobacter, Stenotrophomonas Burkholderia, Achromobacter, Crhyseobacterium TSI Sin Cambio (Pico OH-/fondo neutro) Oxidasa - Acinetobacter Stenotrophomonas Burkholderia + Pseudomonas, Crhyseobacterium Burkholderia, Achromobacter
  30. 30. Pseudomonas del grupo fluorescentes Especie P. fenacínico1 P. fluorescente ADH Glu (Ox.) Gelatinasa 42°C P. aeruginosa +* + + + + / - + P. putida - + + + - - P. fluorescens - + + + + - 1: Piocianina (verde); Piorrubina (rojo); Piomelanina (marrón) *Algunas cepas no producen pigmentos fenacínicos = P. aeruginosa apiociánicas
  31. 31. Microorganismo 42°C Gela- tina ADH LCD U Glu Lac Manit Xil Complejo BC V V + V V + V + V P. aeruginosa + V + - V + - V + P. flurescens - + + - V + V V + P. putida - - + - V + V V + P. stutzeri V - - - V + - + + R. picketti V V - - + + V - + Brevundimonas spp V V - - - V - - V Bacilos GNNF Oxidasa (+) / MacConkey (+) Lac=Lactosa, Manit=Manitol, Xil=Xilosa
  32. 32. Diferenciación BQM de BGNNF Ox. (-) más frecuentes Especie Morfología Oxidasa Motilidad LDC Esculina DNAsa Manitol ONPG S. maltophilia bacilo -/+ + + + + - V Acinetobacter spp coco - - - - - ND ND Complejo B. cepacia bacilo +/- + + +/- - + + ND: no determinado ONPG: ortofenil ß galactopiranósido +/-: mayoría de las cepas con reacción (+) -/+: mayoría de las cepas con reacción (-)
  33. 33. Microorganismo Movilidad LCD U Glu Maltosa Hidrólisis de la Esculina Complejo BC + V V + + V S. maltophilia + + - + + V Acinetobacter spp sacarolítico - - V + - V Acinetobacter spp asacarolítico - - V - V - Burkholderia gladioli + - V + - - P. oryzihabitans + - V + + - P. luteola + - V + + + Bacilos GNNF Oxidasa (-) / MacConkey (+)
  34. 34. Género Stenotrophomonas Especie de importancia clínica: S. maltophilia Características culturales y bioquímicas  Hemólisis: ß en zonas de desarrollo confluente  Olor amoniacal  Oxidasa (-) / algunas cepas pueden ser (+)  Hidrólisis de la Esculina (+)  Hidrólisis de DNA (+)  LDC (+)  Oxidación (+) de Maltosa y Manitol
  35. 35. Género Neisseria y relacionados Microorganismo Morfología (Gram) Oxidasa Catalasa Superoxol TM AN Pigmento TSI DNasa GMLSF (CTA) N. gonorrhoeae Dc- + + +↑↑ + - - SD ND + - - - - N. meningitidis Dc- + + +↓/- + V - SC/SD ND + + - - - Neisseria spp Dc-* + + - -** + V H/OH - VVVVV1 Moraxella catarrhalis Dc- + + - - + - SC + - - - - - Acinetobacter spp Dc-/b- - + - ND + - SC - VVVVV Kingella spp B- + - - V + - H/SD - + V - - - *Sólo N. enlongata tiene forma bacilar **Algunas especies pueden desarrollar 1N. lactamica utiliza L-S-F
  36. 36. Diferenciación de las especies del género Haemophilus Especie Requerimiento de factores Hemólisis X (protoprfirina) V (NAD o NADP) Haemophilus influenzae1 + + - Haemophilus parainfluenzae2 - + - Haemophilus haemolyticus + + + Haemophilus parahaemolyticus - + + Haemophilus aegyptius + + - Haemophilus ducreyi + - + débil Aggregatibacter aphrophilus - V - Aggregatibacter segnis - + - 1-2 Especies más frecuentes en patología humana -187-
  37. 37. BGP aerobios más frecuentes en muestras clínicas Especie* Catalasa Hemólisis Pig. rosado Kinyoun Motilidad Corynebacterium spp y especies relacionadas +/- γ, ß - - V1 Listeria + ß - - + Erysipelothrix - α - - - Lactobacillus - α, γ - - - Nocardia2 + γ - + - Rodhococcus + γ + + - Mycobacterium spp 3,4 + γ - + - *No producen esporas/ Bacillus spp: formas esporas internas 1:Las especies móviles, en general tienen pig. Amarillo-2: BGP ramificados 3,4: M. complejo fortuitum-chelonae (cto. Rápido), BGP no ramificado
  38. 38. BGPositivos: diferenciación: Listeria, Enterococcus y S. agalactiae Especie Catalasa Hemólisis ClNa 6,5% BE Movilidad CAMP PYR Listeria monocytogenes + ß + + + + - Enterococcus faecalis - ß + + - - + S. agalactiae - ß V - - + -
  39. 39. Procesa- miento de la Muestra
  40. 40. Algoritmo de Trabajo Muestra Observación Macroscópica: Consistencia, moco, pus, sangre Microscópica Fresco /coloraciones Siembra M. sólidos: EMB - SS AS –MKS* -(TCBS*) M. enriquecidos Caldo selenito Agua P. alcalina
  41. 41. EMB: búsqueda de EPEC-Salmomella spp y Shigella spp EMB Colonias Fermentadoras de LACTOSA: Brillo metálico 4 colonias al azar TSI – CITRATO► 1 Colonias No fermentadoras de LACTOSA: Transparentes 4 colonias al azar TSI – CITRATO-LIA- UREA-SIM ► 2
  42. 42. ESQUEMA ► 1 Bacteria Levine TSI Citrato LDC Indol E. Coli Colonias con brillo metálico H+/gas - V + C. freundii H+/fondo negro/gas + - - E. coli: Realizar serología de ECEP en pacientes menores de 2 años, gerontes e inmunosuprimidos.
  43. 43. ESQUEMA ► 2 Bacteria Levine TSI Citrato LDC SIM Urea E. coli CT OH-/ H+/gas - V - + + - Shigella spp OH-/ H+/gas (-) - - - - - - Salmonella spp OH-/ H+/SH2/gas + + / SH2 + - + - Edwarsiella tarda OH-/ H+/SH2/gas - + + + V - Proteus spp OH-/ SH2/gas +/- DesNH2 + V + +
  44. 44. Tablas de Identificación
  45. 45. Agar SS: Salmonella spp – Shigella spp Agar SS (24-48h) Colonias Centro negro/SH2 (+) LIA + /SH2 (+) ► 4 Colonias Transparentes /SH2 (-) TSI – CITRATO-LIA- UREA-SIM Búsqueda de Salmonella spp. S. Parathyphi A y Shigella spp ► 3
  46. 46. ESQUEMA ►3 Bacteria SS TSI LDC IMViC U Salmonella entérica serovar Typhi * CT OH/H Anillo negro Sin gas + - + - - - Salmonella entérica *(no Typhi) CT OH/fondo negro/ gas + - + - + - Salmonella paratyphi A CT OH/H/ gas -/anillo negro - + - + - Shigella spp** CT OH/H Sin gas - V + - - - *Se confirma empleando antisueros correspondientes. S. Typhi presenta el Ag Vi, **Requiere confirmación serológica
  47. 47. Bacteria TSI LDC U IMViC Proteus spp* OH/H Fondo negro con gas Desaminada + V+-V Salmonella entérica (no Typhi) OH/fondo negro con gas + /SH2+ - -+-+ Citrobacter freundii OH/fondo negro con gas - /SH2+ V -+-+ Edwardsiella tarda* OH/fondo negro con o sin gas + /SH2+ - ++-- Diferenciación bioquímica de los géneros de Enterobacteriaceae fuerte productoras de SH2 ESQUEMA ►4 *E. tarda y Proteus spp son R a Polomixinas / Colistín
  48. 48. 3- F-AISLAMIENTO DE E. coli PRODUCTOR DE VEROCITOTOXINA Asociado a Diarrea Hemorrágica y Síndrome Urémico Hemolítico Suspensión de M. Fecal AGAR EMB LEVINE AGAR MACCONKEY-SORBITOL INCUBAR 24 HS 37ºC 10 colonias Ferment. de Lactosa 10 colonias No Ferm. De Sorbitol TSI, CITRATO SEROLOGIA O157 SEROLOGIA POSITIVA E. coli O26, O111 Confirmación Bioquímica De E. coli y Sorbitol en tubo(-) Y Beta Glucuronidasa (-) INFORME PRESUNTIVO DE E. coli O157 ENVIAR A LABORATORIO DE REFERENCIA PARA CONFIRMAR PRODUCCIÓN DE VEROCITOTOXINA EN CULTIVO DE TEJIDO
  49. 49. Búsqueda de E. coli enterohemorrágica (ECEH) Agar Mc Conkey con Sorbitol 10 colonias NO fermentadoras de Sorbitol Confirmación BQM de E. coli ß- glucuronidasa (-) // Serología O157 (+) E. Coli O157 ► Posible productor de shiga toxina Detección de Toxina (LNR) O157 Toxigénico o no Toxigénico. -155-
  50. 50. Búsqueda de Vibrio cholerae AGUA PEPTONADA ALCALINA INCUBAR 6-8 HS A 37 ºC REPIQUE A AGAR TCBS INCUBAR 18-24 HS A 37ºC COLONIAS AMARILLAS (Ferm. de Lactosa) TSI AS INCUBAR 18-24 HS INCUBAR 18-24 HS ALC/AC SIN GAS REAC. DE OXIDASA AC/AC SIN GAS POSITIVA SEROLOGIA PARA V. chloreae O1 POSITIVA PRESUNTO AISLA MIENTO DE Vibrio cholerae O1 ENVIAR A CENTRO DE REFERENCIA PARA SU CONFIRMACION Oxidasa (-) No Vc
  51. 51. Búsqueda de Vibrio cholerae: BQM Características BQM Resultado Hemólisis ß o γ TSI H+ / H+ / sin gas Citrato de Simmons + LDC + ODC + Motilidad + Indol + Voges-Proskauer V ClNa 0% + S a O129 (150 µg) + (Halo de inhibición)
  52. 52. Diferenciación de Vc Diferenciación serológica Especie Aglutinación Con antisuero O1 Clínica Vibrio cholerae O1 + Causa el «cólera» Vibrio cholerae NO O1 - No causa epidemias Diferenciación BQM de Vibrio cholerae O1 en sus biotipos Prueba BQM V. cholerae O1 Biotipo clásico V cholerae O1 Biotipo El Tor Hemólisis γ ß o γ VP - + Sensibilidad a Polimixina (50 µg) S R
  53. 53. Búsqueda de Aeromonas spp Medio de siembra: Agar Sangre(AS) o AS con Ampicilina 30 Ug/ ml. AS Colonias Beta hemolíticas (o eventualmente No hemolíticas) Reacción de oxidasa (3 ó más colonias al azar) POSITIVA NEGATIVA: No Aeromonas spp TSI Fermentador No Fermentador (Alc./Ac. ó Ac./Ac.) (sin cambio) Presunt. Aeromonas spp Evaluar según Huésped (Ver Tablas de Identificación)
  54. 54. DIFERENCIACIÓN DE LOS GENEROS DE LA FAMILIA VIBRIONACEAE VIBRIO AEROMONAS PLESIOMONAS Hemólisis ,, ,  Dnasa + + - ODC D -* + ClNa 6% D - - Sensibilidad al O129(150g) + - + * Aeromonas veronii biogrupo veronii es ODC + DIFERENCIACIÓN DEL GENERO VIBRIO DE AEROMONAS VIBRIO HALOFILICOS VIBRIO NO HALOFILICOS AEROMONAS ODC D + -* ClNa 6% + D - ClNa 0% - + + Sensibilidad al O129(150g) + + - * Aeromonas veronii biogrupo veronii es ODC +
  55. 55. Esculina Gas de Glucosa ODC LDC VP Manitol Sacarosa Indol Grupo hydrophila* + + - + + + + + Grupo caviae* + - - - - + + + A. veronii bg. sobria - + - + + + + + A. veronii bg. veronii + + + + + + + + A. schubertii - - - + D - + - A. handaei - + - + + + - + A. trota - + - + - D D + * Son Resistentes a Cefalotina Diferenciación BQM de las especies de Aeromonas spp más frecuentes
  56. 56. Algoritmo de Fauces: A.S.carnero Colonias ß-Hemolíticas BCITRACINA - PYR 1:S/ (+) – 2:R / (+) – 3:R / (-) 3-Otros Estreptococos ß H VP (+): Flora habitual (-): Serología C G 1 -2: Streptococcus pyogenes
  57. 57. Esputo: Criterio de aceptación Células Epiteliales Planas PMN Criterio < 10 > 25 Aceptable 10 - 25 > 25 Aceptable > 25 > 25 No aceptable > 25 10 - 25 No aceptable > 25 < 10 No aceptable
  58. 58. Esputo: Procesamiento Esputo Ex. macroscópico Aspecto: salivoso, mucopurulento, hemoptoico Ex. microscópico Celulas en fresco Gram / ZN (Kinyoun-Giemsa- Grocott) Cultivo AS / Ach Medio para BGN
  59. 59. Aspirado traqueal: Procesamiento Aspirado traqueal Ex. macroscópico Aspecto: salivoso, mucopurulento, hemoptoico Ex. microscópico Celulas en fresco Gram / ZN (Kinyoun-Giemsa- Grocott) Cultivo (*) AS / Ach Medio para BGN (*) Diluciones
  60. 60. Aspirado traqueal: Procesamiento 0,5 ml Secreciones + 0,5 ml Sol. Fisiol. = 1 (1/2) 0,1 ml de 1 + 0,9 ml Sol. Fisiol. = 2 (1/20) 0,1 ml de 2 + 0,9 ml Sol. Fisiol. = 3 (1/200) 0,1 ml de 3 + 0,9 ml Sol. Fisiol. = 4 (1/2000) Sembrar 0,1 ml de 3 y 4
  61. 61. Lavado Bronco Alveolar BAL < 1% CEE / Macrófagos alveolares Homogeneizar en Vortex 1 - 2’ Mx. sin centrifugar Siembra: 0,5 ml + 4,5 SF (1/10)=1 0,5 ml de 1 + 4,5 ml SF (1/100)= 2 Centrifugar 10 ml ►Sedimento Fresco Coloraciones Sembrar 0,1 ml de 1 y 2
  62. 62. Cepillo Protegido Cepillo Protegido Homogeneizar en Vortex 1 ’ en 1 ml de BHI Mx. sin centrifugar Sembrar 0,1 ml AS + Ach + Medio para BGN+ ANA Centrifugar ►Sedimento Coloraciones (↓S)
  63. 63. Utilidad de las Muestras Mx E At BAL Cepillo Bx. Pulmón Contaminación orofaríngea +++ ++ + NO NO Mx representativa < 10 CEP // >25 PMN < 1% CEP Siempre FBCopio NO NO SI SI NO G. comunes SI SI SI SI SI Hongos SI SI SI NO (esc.) SI Micobacterias SI SI SI NO (esc.) SI ANAE NO NO NO SI SI Rto. Sign 3° - 4° Estría ≥ 106 ufc/ml ≥ 104 ufc/ml ≥ 103 ufc/ml ≥ 104 ufc/gr. S ↓ ↑ ↑ (86%) +/- (75%) +/- E ↓ ↓ ↑ (82%) ↑↑ (100%) ↑↑
  64. 64. Micobacterias patógenas oportunistas y saprófitas Velocidad de Crecimiento Pigmentación Pat. oportunistas No o rara vez patógenos Lento > 7 días Fotocromógenas M. kansasii M. marinum M. simiae M. asiaticum Escotodromógenas M. scrofulaceum M. szulgai M. xenopi M. gordonae M. flavescens No cromógenas M avium M intracellulare M ulcerans M malmoense M haemophilum M gastri M terrae M triviale Rápido < 7 días No cromógenas M fortuitum M abscessus M chelonae M smegmatis Cromógenas M vaccae M phlei
  65. 65. Estudio del exudado vaginal (FSP) FV pH (FSMedio) SF Obs. En Fresco Levaduras Trichomonas vaginalis Test con KOH Medio de Transporte Siembra en A-Sangre* Saburaud (Levaduras) Coloraciones GRAM/Giemsa -129-
  66. 66. Estudio de Endocervix Endocervix M. de Transporte Siembra en A-Sangre* Thayer Martin Oxidasa (+)/dc(-) Coloraciones / GRAM Dc (-) -129- TSI / H2O2 30% / AS sin CO2 ND / + ↑↑ / ND Probable Neisseria gonorrhoeae Azúcares
  67. 67. Investigación de EBH Hisopado introito vaginal + hisopado perineal Caldo Todd-Hewitt (Ac. Nal 15 µg/ml + Colistin (10 µg/ml) Medio de cultivo sólido «Adecuado» Colonias «sospechosas» Pruebas confirmatorias
  68. 68. Diferenciación: Listeria, Enterococcus y S. agalactiae Especie Catalasa Hemólisis BE CAMP PYR Listeria monocytogenes + ß + + - Enterococcus faecalis - ß + - + S. agalactiae* - ß - + - Partimos del Agar Sangre Ovina Partimos de Agar Cromogénico *Eventual confirmación serológica
  69. 69. Vaginosis Bacteriana: Criterios 1-Amsel y col.: 3 ó más de los siguientes criterios *Presencia de flujo vaginal abundante, fino y homogéneo *pH > 4,5 *Pruebas de aminas (+) *Presencia de células guía («Clue cells») 2-Nugent: Morfotipos en la coloración de GRAM SCORE 0 1 2 3 4 Lactobacillus spp > 30 5 - 30 1 - 4 < 1 0 GV y Bacteroides spp 0 < 1 1 - 4 5 - 30 > 30 BGN «curvos» 0 1 - 4 5 > 30 - - VB=puntaje total ≥ 7; 4 – 6: corresponde a un estado intermedio de desbalance; Muestra normal: puntaje total de 0 a 3. 97% S-100% E
  70. 70. Vaginosis bacteriana
  71. 71. Infecciones Vs. Dx. Diferecial Criterio Dx Normal VB Vaginitis x TV Vaginitis por Candida pH 3.8 – 4.2 > 4.5 > 4.5 < 4.5 Secreción Transparente ↑homogénea y gris ↑amarilla, verdosa ↑blanco, leche cortada «Fishy odor» - + +/- - Síntoma No ↑flujo, mal olor, ardor ↑flujo, mal olor, ardor, picazón, disuria ↑flujo, ardor, picazón Microscopía (fresco 400X) Flora lactobacilar, cel epiteliales Clue cells leucocitos (< 10/cpo.) TV, leucocitos (>10/cpo.) Levaduras con pseudoh. GRAM (1000x) B+ rectos Cb (-) y/ fl. ANAE. - Levaduras con pseudoh. GIEMSA ↑↑ - - TV -
  72. 72. Investigación de CT en nuestras clínicas Muestra Clínica Detección por (Ag) Serología (Ac) Cultivo celular PCR Elisa IFD Hisopado Endocervical SI SI SI SI H. uretral SI SI SI SI Semen NO SI* NO SI 1°chorro miccional NO SI SI* NO** H. conjuntival SI SI SI SI L. Peritoneal (Mujer) SI SI NO NO Aspirado de bubones (LGV) SI SI SI SI +/- Suero H. anal SI NO NO NO H. / ANF SI NO NO NO + (IgM MIF) *No es la Mx ideal por su ↓↓ S// ** si en varones CT: Chlamydia trachomatis
  73. 73. Micoplasmas Especies Cuadro clínico Diagnóstico M. pneumoniae NMN atípica Cultivo Elisa Sondas de DNA PCR IFD / Ac M. hominis Ureaplasma urealyticum Cervicitis-Uretritis-Prostatitis- Esterilidad-Aborto-EIP-Fiebre post parto-PLNfritis Cultivo PCR M. genitallium Uretritis-Cervicitis-Salpingitis-EPI PCR
  74. 74. Procesamiento de las Mx. Especie Ferment. de GLU H. de ADH H. De UREA M. hominis - + - U. urealyticum - - + M. hominis + - - T. De Muestra -Abstinencia sexual por 72 h. -Obtención de material ↑↑ celular o Endocérvix - H. uretral o Orina – Esperma o Sangre - Tejidos – Esputo o Otros fluidos corporales
  75. 75. Características de LCR en MNG Etiología Citología Química Aspecto Células mm3 L (%) PNM (%) Glu (mg%) ∏ (mg%) Cl (mEq/l) V.N. 1 - 5 90 - 100 0 - 3 50 - 70 15 - 40 120-130 Cr de Roca MNG vi A A* N** N o A A N SIFILIS A A N N A N TBC y Cn A A N o A D A D Absceso cerebral A N A N A N MNG B. A N A D A D TURBIO MNG Leucémicas A A. blastos N D A N TURBIO Hem. SAc A A A N o A A N o A Hemorr.
  76. 76. LCR: Etiología según la edad Huésped Agente Neonatos (0 – 2 meses) ENTB (Escherichia coli) Streptococcus agalactiae Listeria monocytognes Lactante 2 m – 6 a Streptococcus pneumoniae Haemophilus influenzae Neisseria meningitidis Adultos y > 6 a Streptococcus pneumoniae Neisseria meningitidis Adultos / Ancianos Streptococcus pneumoniae Neisseria meningitidis ENT / Listeria monocytognes (↓↓) Asociados a shunt Staphylococcus epidermidis Staphylococcus aureus BGN
  77. 77. LCR: Etiología en Inmunosuprimidos Alteración en la Inmunidad Celular Cryptococcus neoformans Mycobacterium tuberculosis Listeria monocytogenes Pacientes VIH (+) Cryptococcus neoformans Mycobacterium avium-intracelllare Mycobacterium tuberculosis Listeria monocytogenes Candida spp Virus Parásitos
  78. 78. Líquido de derrame pleural Características Trasudado Exudado Empiema Derrame PN no complicado Derrame PN complicado Aspecto Claro/límpido Variable (V.) Variable (V.) Purulento Leucocitos/mm3 < 1000 V. (>1000) V. (>1000) > 15000 Rto. diferencial Variable PMN PMN PMN ∏ (g/dl) < 3,0 > 3,0 > 3,0 > 3,0 Glu (mg/dl) ≈ suero > 60 40 - 60 < 40 pH ≈ suero > 7,2 7,0 – 7,2 < 7,2 LDH < 200 < 1000 > 1000 > 1000 Bacterias No No No Presentes
  79. 79. Tipos de medios Medio Características Basal Permiten crecer casi todas las bacterias. Selectivos Favorecen el crecimiento de algún tipo de bacteria e inhiben el de otras. Enriquecido Líquidos o sólido: se obtiene a partir de un medio basal suplementado con nutrientes. Diferenciales Sirven para evaluar las propiedades bioquímicas de las bacterias y así identificar una población bacteriana. De transporte Permiten conservar las bacterias evitando la pérdida de viabilidad.
  80. 80. Medio (S) Componentes Utilidad/Aplicación Agar sangre Agar tripticasa –soja, agar brucella o infusión de carne y corazón con 5% de sangre ovina Nutritivo, detección de la capacidad hemolítica Agar chocolate Base de peptona enriquecida con una solución de hemoglobina al 2% Desarrollo de Haemophilus y Neisserias. Agar eosina azul de Metileno (EMB) Base de peptona con lactosa y sacarosa. La eosina y el az. De metileno actúan como indicador Crecimiento y diferenciación de BGN entéricos ferm. y no ferm. de lactosa Agar manitol salado Base de peptona, manitol y rojo de fenol como indicador. La CC. De sal de 7,5% inhibe a la > de las bacterias Aislamiento y diferenciación selectiva de estafilococos. Agar Salmomella- Shigella Base de peptona con lactosa, citato férrico y citrato de Na. Contiene rojo neutro como indicador. Sales biliares y verde brillante para inhibir coliformes Selectivo para el rescate de Salmonella spp y Shigella spp
  81. 81. Medio (S) Componentes Utilidad/Aplicación Agar de Skirrow Agar base de peptona y proteína de soja, con lisado de sangre de caballo Vancomicina para inhibir G(+), Polimixina B y TMS para inhibir G(-) Selectivo para el crecimiento de Campylobacter spp. Agar Thayer- Martin Base agar sangre enriquecido con hemoglobina y enriquecedor; Colistín, nistatina, vancomicina y TMS. Selectivo para Neisseria gonorrhoeae y N. meningitidis Agar de Bordett- Gengou Medio con base de papa y glicerol más 15-20% de sangre ovina desfibrinada y 2,5 µg/ml del meticilina. Aislamiento de Bordetella pertussis Agar MacConkey con sorbitol Base peptona con lactosa, cristal violeta y sales biliares (inh. G+), rojo neutro como indicador. Puede reemplazarse lactosa por sorbitol. Aislamiento y diferenciación de BGN fermentadores y no ferm. de lactosa. E. coli O157
  82. 82. Medio (L) Componentes Utilidad/Aplicación Caldo Selenito Caldo base de peptona con sales biliares y citrato férrico. Medio selectivo para Salmonella y Shigella. Caldo Tioglicolato Digerido pancreático de caseína, caldo de soja y glucosa. Favorece el crecimiemto de aerobios, anaerobios y microorganismos con requerimientos especiales. Caldo Todd- Hewitt Es un caldo de enriquecimiento de estreptococos, se suplementa con Ac. Nalidíxico y colistín Selectivo y de enriquecimiento para estreptoccos. Caldo tripticasa-soja La tripteína y la peptona de soya aportan péptidos, aa, bases púricas y pirimídicas, minerales y vitaminas. La peptona de soya contiene alta CC’ de HdC. El ClNa mantiene el balance osmótico. El fosfato diK otorga capacidad buffer y la glucosa es la fuente de energía Permite en general el desarrollo de gérmenes Gram (+) y (-).
  83. 83. Catalasa Determina la capacidad de producir la enzima catalasa. Staphylococcus spp catalasa (+) Streptococcus spp y Enterococcus spp(-) Se adiciona H2O2 sobre una gota o ansada de cultivo sobre un porta objeto. Un burbujeo indica la presencia de la enzima. 2H2O2 Catalasa 2H2O+ O2 Burbujas de O2
  84. 84. OXIDASA Identifica bacterias que contengan la enzima citocromo oxidasa (respiración). Enterobacteriacae (-) Pseudomonadaceae, Neisseria spp(+) La enzima citocromo oxidasa cataliza el transporte de electrones de un dador (phenylenediamine) hacia el aceptor final de la respiración (O2) Si la enzima esta presente se observara una coloración purpura. Discos comerciales – Papel de filtro - Tubo
  85. 85. Coagulasa Determina la capacidad de coagular el plasma por la acción de la enzima coagulasa. Permite diferenciar S. aureus (coagulasa positivo) de otras especies de Staphylococcus. La prueba en tubo se puede leer tras incubación de 2h, si es (-) debe incubarse hasta 24h.
  86. 86. Hidrólisis del DNA Detecta la enzima termoestable «DNAsa», capaz de romper los enlaces Fosfodiéster de la molécula del DNA. Luego se revela con ClH. Si el DNA se degradó el complejo ADN-ClH no se forma, dando un halo claro alrededor del desarrollo bacteriano. Pos Neg Pos Neg
  87. 87. Ensayo de ureasa Para diferenciar organismos capaces de hidrolizar urea con la ureasa (Tribu Proteae). El medio contiene U y el indicador de pH rojo fenol (rosa oscuro a pH > 8.4)por el amonio liberado. Neg Pos. Neg Pos.
  88. 88. Prueba de PYR Detecta la actividad de la enz. l-pirrolidonilarilamidasa (PYRasa), que hidroliza el sustrato pirrolidonil-ß-naftil amida, (en los discos) y liberan un grupo pirrólico que reacciona con el reactivo cinamaldehído dando un compuesto de color rosado- rojizo. Se la utiliza para la identificación de cocos Gram (+) catalasa negativa. Pos. nEG. Positivo
  89. 89. Prueba de LAP Determina la presencia de la enzima leucino aminopeptidasa (LAP). Los discos contienen el sustrato: leucina-ß-naftilamida, que hidroliza la enzima, con liberación de ß- naftilamina, que reacciona con el reactivo revelador: N-N dimetilamino cinamaldehído, dando un compuesto rojo-rosado. PositivoPYR (+) LAP (+)
  90. 90. Fenilalanina deaminasa Detecta la acción de la enzima fenilalanina deaminasa. Diferencia Morganella, Providencia, y Proteus (+) de otras Enterobacteriaceae. El medio contiene el aa fenilalanina. La enzima remueve el grupo (NH2) y libera ácido fenil-pirúvico, que puede ser detectado por la adición de un Cl3Fe 10% (oxidante) con un cambio de color al verde. Negativo Positivo
  91. 91. Sensibilidad a Bacitracina Se usa en la confirmación presuntiva de Streptococcus pyogenes, ya que, a diferencia de la mayoría de los estreptococos, suelen ser sensibles a bajas concentraciones de bacitracina (0.04 U). La pueba NO tiene punto de corte.
  92. 92. Sensibilidad a Novobiocina Esta prueba puede utilizarse para la identificación diferencial de Staphylococcus saprophyticus (Resistente) del resto de los Estafilococos. Sensible > 16 mm Se usan discos con 5 µg de ATM
  93. 93. Sensibilidad a Optoquina Esta prueba puede utilizarse para la identificación diferencial de Streptococcus pneumoniae dentro de los Estreptococos alfa hemolíticos. Sensible > 14 mm Discos con 5 μg de clorhidrato de etil-hidrocupreína
  94. 94. Factor CAMP Permite detectar una proteína extracelular difusible, «Factor CAMP» Que actúa en forma sinérgica con la betalisina de Staphylococcus aureus, potenciando la lisis de los eritrocitos. CAMP (+) en S. agalactiae
  95. 95. Hidrólisis de la Bilis Esculina (BE) Medio de cultivo contiene extracto de carne, peptona de carne (nutrientes), bilis de buey (selectivo para coco+), esculina (glucósido) e iones hierro (indicador). La bacterias degradan la esculina a esculetina, que se combina con el Fe, dando un compuesto férrico de color pardo oscuro. Neg Pos.
  96. 96. Tree Sugar Iron Agar (TSI) Diferencia bacterias por su capacidad para fermentar glucosa, lactosa y/o sucrosa, y para producir SH2. Fermentación (medio ácido) + Tiosulfato de Sodio SH2 (gas) SH2 + iones férricos Sulfuro ferroso (↓↓ negro insoluble) Peptonas Amoniaco (NH3) pH (Rojo) Azúcar Productos ácidos pH (Amarillo)
  97. 97. El medio contiene peptona, Glu, Sac, Lac, tiosulfato y una sal férrica. El indicador es rojo fenol (amarillo a pH< 6,8 / rojo pH > 6,8) Se siembra en profundidad con aguja y luego se estría el pico de flauta. Fermentación Medio acidificado Fermentación (-) Medio OH- x uso de las peptonas Fermenta Glu: pico OH- /Fondo H+ Fermenta Glu + SH2
  98. 98. Resultados (Tubo/Base) Símbolo Interpretación Rojo/Amarillo K/A Solo fermenta la Glucosa, y luego utiliza las peptonas Amarillo/Amarillo A/A Fermenta la glucosa y la lactosa y o la Sacarosa Rojo/Rojo K/K No hay fermentación, Solo se utilizan las Peptonas Rojo/sin cambio K/NC No hay fermentación, Solo se utilizan las Peptonas aeróbicamente Amarillo/Amarillo con disrupción del agar A/A,G Fermenta la glucosa y la lactosa y o la Sacarosa con producción de gas
  99. 99. Resultados (Tubo/Base) Símbolo Interpretación Rojo/Amarillo con disrupción del agar K/A,G Solo fermenta la Glucosa, con producción de gas Rojo/Amarillo con disrupción del agar y PP negro K/A,G, H2S Solo fermenta la glucosa con producción de gas y H2S Rojo/Amarillo y PP negro K/A, H2S Solo fermenta la glucosa y produce H2S Amarillo/Amarillo y PP negro A/A, H2S Fermentación de glucosa, lactosa y / o Sacarosa con producción de H2S Sin cambio/ Sin cambio NC/NC No hay crecimiento
  100. 100. Prueba de I.M.V.iC 1-Indol 2-Rojo de Metilo 3-Voges Proskauer 4-Citrato
  101. 101. Producción de Indol (1) Identificar bacterias por su capacidad de producir indol usando la enzima triptofanasa, la cual convierte el aa triptofano en Indol, ácido pirúvico y amonio. Triptofano Indol + ácido piruvico + amonio triptofanasa Indol + p-dimetletilenamino-benzaldehido Rosindol (Rojo) HCl Alcohol isoamilico Reactivo de Kovacs Para detectar el metabolito Indol se utiliza el reactivo de Kovac, que contiene ácido clorhídrico, dimetilaminobenzaldehido y alcohol amílico. Una coloración roja indica resultado positivo.
  102. 102. Triptofano Indol + ácido piruvico + amonio triptofanasa Indol + p-dimetletilenamino-benzaldehido Rosindol (Rojo) HCl Alcohol isoamilico Reactivo de Kovacs Para detectar el Indol producido, se utiliza el rvo de Kovac, que contiene ácido clorhídrico, dimetilamino-benzaldehido y alcohol amílico. Una coloración roja indica resultado positivo.
  103. 103. El triptofano se adiciona al medio en una concentración 1%. Esta presente en peptonas obtenidas por digestión enzimática. Se adicionan 1 a 2 gotas del reactivo de KOVACS.
  104. 104. Positive positive negative control.
  105. 105. Glucosa Piruvato Lactato Acetil-CoA Formiato Etanol CO2 Acetato H2 Succinato + CO2 Fermentación acido-mixta
  106. 106. Voges-Proskauer (VP - 3) Algunos microorganismos no producen suficientes ácidos estables que bajen el pH. El producto final de la fermentación de la glucosa es acetoina y 2,3-butanediol. Después de 48 hs de incubación. Barritt's A (alpha-napthol) y Barritt's B (potassium hydroxide) se adicionan al cultivo y se agita ligeramente. Rojo positivo Prueba (-) - Prueba (+) Prueba (-) - Prueba (+)
  107. 107. Glucosa Piruvato Lactato Acetil-CoA Formiato Etanol CO2 Acetato H2 Succinato + CO2 Glucosa Piruvato 2.3 Butanodiol + CO2 Etanol Lactato Succinato Acetato CO2 + H2 Fermentación acido-mixta Fermentación butanediolica
  108. 108. Determinar si un microorganismo es capaz de utilizar Citrato como única fuente de carbono. Citrato (4) Citrato de Sodio Acido piruvico + Acido oxalacetico + CO2 Citrato premeasa Citrasa Exceso de Sodio + CO2 + H2O Na2CO3 (liberado luego de usar el citrato) (Alcalino --> pH)
  109. 109. Agar Citrato (de Simmons): Es un medio definido que contiene Citrato de Sodio como única fuente de C y amonio como fuente de nitrógeno. Si el citrato se utiliza se producen compuestos que alcalinizan el medio. El indicador de pH, azul de bromofenol, cambia de verde a pH neutro (6.9) a azul a pH mayores que 7.6. Citrato (4)
  110. 110. Reducción de nitrato Muestra la capacidad de Reducir NO3 a nitrito NO2 / o N2 por acción de la enzima Nitrato Reductasa. Nitrato (NO3) puede ser Reducido a diferentes compuestos por respiración anaerobia o por denitrificación. El medio de cultivo contiene nitrato de potasio como sustrato. Si el organismo Reduce el nitrato a nitrito este reaccionara con ácido sulfanilico y a- naftilamina (presentes en el reactivo o en el medio para Nitrato) para producir un color rojo. Si no hay color: 1-el nitrato no se Redujo 2-se redujo a otros compuestos. (N2) NO3 + 2 H + 2e- NO2 + H2O Nitrato reductasa
  111. 111. Si no hay color: 1-el nitrato no se Redujo 2-se redujo a otros compuestos. (N2) Test (-): El Zn0 reduce el nitrato a nitrito, dando color. Si al agregar Zn se produce el complejo coloreado, la bacteria NO usó el NO3
  112. 112. Si no hay color: 1-el nitrato no se Redujo 2-se redujo a otros compuestos. (N2) Test (+): El Zn0 reduce el nitrato a nitrito, dando color. Si al agregar Zn no se produce color la bacteria usó el NO3 y también el NO2
  113. 113. Ensayo de decarboxilasas Muestra la capacidad para decarboxilar un aminoácido. En esta reacción se remueve el grupo carboxylo (COOH) del aa produciendo amina y CO2. Como indicador de pH se usa púrpura de bromocresol. Se emplea aceite mineral que crean un ambiente de anaerobiosis para promover la fermentación. pH alcalino el indicador cambia a purpura (+) ADH(-) ODC(+) LDC(+) Control
  114. 114. LIA (Lysine Iron Agar) Pone en evidencia: *la decarboxilación de Lisina (aa), en diamina cadaverina *la desaminación de la Lisina en un alfa cetoácido. Ambas reacciones se evidencian por el cambio de color del púrpura de bromo cresol. La produción de SH2 se evidencia por la conversión de Tiosulfato sódico a Sulfato férrico S/inocular
  115. 115. LIA (Lysine Iron Agar) S/inocular DesaminaciónDecarboxilación (+) (-) Descarboxilación SH2 (+)
  116. 116. LIA (Lysine Iron Agar) S/inocular Proteus sppEscherichia coli Shigella spp Salmonella Proteus spp
  117. 117. SIM (Sulfídrico – Indol – Motilidad) Tiene peptona como sustrato principal, adicionado de tiosulfato sódico, Fe y amonio. Pos. nEG. POS: turbidez difusa en todo el medio NEG: crecimiento en el punto de siembra
  118. 118. SIM (Sulfídrico – Indol – Motilidad) Tiene peptona como sustrato principal, adicionado de tiosulfato sódico, Fe y amonio. Pos. nEG. POS: Formación de SFe que ennegrece la zona de crecimiento NEG: el medio no cambia de color.
  119. 119. SIM (Sulfídrico – Indol – Motilidad) Tiene peptona como sustrato principal, adicionado de tiosulfato sódico, Fe y amonio. Pos. nEG. POS: Formación de un anillo rojo luego de agregar el reactivo Kovacs NEG: sin color
  120. 120. SIM (Sulfídrico – Indol – Motilidad) Tiene peptona como sustrato principal, adicionado de tiosulfato sódico, Fe y amonio. 1 2 Combinación de los resultados: 1-Móvil, SH2 (+) e indológena 2-Inmóvil, SH2 e indol (-)

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