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ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DEL REACTIVO
                                                                La suspensión de...
PROCEDIMIENTO                                                    8.   Añadir una gota de la suspensión del antígeno
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RPR Sífilis      Macro-VueTM               Rev. 11/07/02
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Reagina Plasmatica Rapida (RPR)

Pruebas de Sifilis

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Reagina Plasmatica Rapida (RPR)

  1. 1. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DEL REACTIVO La suspensión del antígeno siempre debe refrigerarse cuando no se utilice. Proteger de la luz ¡No congelar!. El antígeno es estable sin abrir y almacenado entre 2-8°C, hasta la fecha de caducidad marcada en su respectiva etiqueta. Los controles son estables hasta la fecha de caducidad indicada en su etiqueta cuando se almacenan entre 2-8°C. Lleve a temperatura ambiente la suspensión del antígeno y los controles antes de utilizarse. RPR MATERIAL PROPORCIONADO Prueba Rápida de Reagina q Aguja No. 18 sin bisel utilizada para dispensar (Sífilis) aproximadamente 17mL de la suspensión del antígeno. Prueba en placa de floculación con carbón activado para la q Pipetas/ agitadoras utilizadas para dispensar determinación cualitativa y cuantitativa de anticuerpos aproximadamente 50 mL (0.05 mL) de muestra. reagínicos en suero o plasma q Tarjetas de Prueba (círculos de aproximadamente 18 mm). Utilice como superficie de prueba. RESUMEN Y PRINCIPIO Se debe tener cuidado en la manipulación de las tarjetas de prueba para evitar introducir contami- La prueba de RPR es una prueba de floculación no nantes al circulo de prueba. Extienda cada muestra treponémica macroscópica que es utilizada para detectar y sobre el total del área del círculo de prueba. cuantificar reaginas, un anticuerpo anti-lipídico encontrado en el suero o plasma de personas con sífilis y ocasionalmente Nota: Deseche la aguja cuando el equipo se haya utilizado en personas con infecciones agudas o crónicas en otras completamente. condiciones aparte de la sífilis. El antígeno utilizado en el equipo es una modificación del MATERIALES REQUERIDOS PERO NO antígeno VDRL que contiene micropartículas de carbón para PROPORCIONADOS realzar la diferencia entre un resultado positivo y negativo. q Rotador (100 ± 2 rpm) Si una muestra contiene reaginas, ocurre la floculación con las partículas de carbón contenidas en la suspensión del q Solución salina (0.9%) antígeno, la cual aparece como un cúmulo negro. Las q Cronómetro muestras no reactivas se observan con un ligero color gris. q Lámpara PRESENTACIONES RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Equipo para 50 pruebas Las muestras pueden ser sueros activados o inactivados o Equipo para 100 pruebas plasmas recolectados con EDTA como anticoagulante. Evite Equipo para 200 pruebas la hemólisis. La lipemia no interfiere con la suspensión del antígeno, sin embargo, si la muestra esta severamente Equipo para 300 pruebas lipémica de manera que se obscurece el estado de las Equipo para 500 pruebas partículas de antígeno, la muestra no debe ser utilizada. REACTIVOS ESTABILIDAD DE LA MUESTRA q Suspensión de Antígeno RPR. Las muestras de suero se reportan estables por 5 días, q 1 Suspensión de cardiolipina , conteniendo micropar- almacenadas entre 2-8°C. Los plasmas recolectados con tículas de carbón activado. EDTA y almacenados entre 2-8°C se reportan estables hasta 24 hrs.2 q Control Positivo RPR. q Control líquido estabilizado, reactivo con antígeno RPR. SUSTANCIAS INTERFERENTES q Control Negativo RPR. Como con todos los antígenos tipo cardiolipina, pueden ocurrir resultados falsos positivos. Estos resultados pueden q Control líquido estabilizado, no reactivo con antígeno ser causados por enfermedades como lepra, lupus RPR. eritematoso, mononucleosis infecciosa, paludismo y Precauciones: Unicamente para uso diagnóstico in-vitro. neumonía viral. Varios reportes indican la presencia de resultados falsos PREPARACIÓN DEL REACTIVO positivos en el embarazo.3,4 Enfermedades autoinmunes y La suspensión del antígeno debe agitarse por 5 a 10 adicciones narcóticas pueden dar reacciones falso-positivas.5 segundos antes de abrirse, para resuspender las partículas de carbón. Los controles están listos para su uso.
  2. 2. PROCEDIMIENTO 8. Añadir una gota de la suspensión del antígeno previamente resuspendido, exactamente sobre cada una Procedimiento cualitativo de las gotas de las diluciones anteriores utilizando el 1. Lleve a temperatura ambiente la suspensión del antígeno frasco gotero al cual se le ha insertado la aguja No. 18 de RPR, los controles y las muestras. sin bisel. 2. Tome la pipeta/agitador del extremo sellado. Al tiempo 9. Agite por 8 minutos a 100 rpm en un rotador mecánico. que oprime y mantiene presionado dicho extremo, 10. Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y coloque la pipeta dentro de la muestra. Suelte para agítela breve y suavemente. permitir que la pipeta aspire un poco de muestra. 11. Leer el resultado macroscópicamente. 3. Sostenga en posición vertical la pipeta/agitador directamente sobre un círculo de la tarjeta de prueba y coloque una gota de muestra sobre esta área. RESULTADOS CUANTITATIVOS 4. Utilizando el extremo plano de la pipeta/agitador, La última dilución que contenga agregados macroscópicos extienda la muestra para cubrir el total de la superficie indica el título de la muestra. del círculo. Deseche la pipeta/agitador. Repita el mismo Ejemplo: procedimiento para cada muestra. 5. Agite el frasco de la suspensión del antígeno antes de Tubo No. Dilución del suero Resultado utilizarlo. Sosténgalo en posición vertical y dispense varias gotas en la tapa del frasco para asegurarse de 1 1:2 Positivo que el paso por la aguja es correcto. No limpie la aguja. 2 1:4 Positivo Coloque una gota de la suspensión del antígeno sobre 3 1:8 Positivo cada muestra. NO EXTIENDA! 4 1:16 Negativo 6. Agite por 8 minutos a 100 rpm en un rotador mecánico. 7. Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y El título del suero problema será: 1:8. agítela breve y suavemente. 8. Lea macroscópicamente bajo una lámpara de luz intensa. LIMITACIONES El diagnóstico de la sífilis no debe ser hecho basado en un RESULTADOS CUALITATIVOS resultado positivo único de una prueba no treponémica, sin el soporte de una historia positiva o evidencia clínica. Las Reactivo: Presencia de flóculos grandes o pequeños muestras de suero que son reactivas en pruebas cualitativas en el centro o la periferia del círculo de prueba. deben ser cuantificadas para establecer un tratamiento en Débil reactivo: Presencia de flóculos pequeños pero el cual los cambios de título puedan ser determinados como definidos. un indicador de la respuesta al mismo. No reactivo: Apariencia lisa, uniforme pero sin flóculos Las muestras de plasma no deben ser utilizadas para visibles. pruebas cuantitativas. Las muestras que son no-reactivas pero dudosas, se deben de repetir y cuantificar ya que se pueden detectar reacciones poco frecuentes de prozona. Los resultados positivos deben ser confirmados mediante pruebas de las muestras utilizando procedimientos cuantitativos. Se recomiendan pruebas serológicas CARACTERÍSTICAS DE FUNCIONAMIENTO confirmativas como el ensayo de microhemaglutinación para Se obtuvieron 625 muestras de laboratorios públicos de salud anticuerpos treponémicos (MHA-TP). El diagnóstico final y fueron sujetos a comparación entre la prueba de RPR Sífilis debe estar en base a la correlación de los resultados de y Tarjetas de Prueba Macro-Vue TMRPR (BBL Division of prueba junto con otros hallazgos clínicos. (Véase Becton Dickinson and Company) con los siguientes Limitaciones) resultados: Procedimiento cuantitativo RPR Sífilis Macro-VueTM 1. Seleccione los sueros positivos obtenidos en la prueba No-reactivo 431 433 cualitativa. Reactivo 194 192 2. Colocar en una gradilla cuatro tubos 12 x 75 mm y numerarlos. 3. Agregar a cada uno de ellos 0.5 mL de solución salina. Hubo una concordancia de 431 de los sueros no reactivos y de 194 de los sueros reactivos. Esto representa un 99.4% 4. Depositar 0.5 mL de suero problema en el tubo No. 1 y de concordancia. mezclar. Veinticinco (25) de los sueros reactivos probados por ambos 5. Pasar 0.5 mL del tubo No. 1 al tubo No. 2 y mezclar. procedimientos fueron seleccionados al azar y comparados 6. Continuar esta operación hasta el tubo No. 4. en un procedimiento semi-cuantitativo descrito anteriormente. 7. Depositar 0.05 mL de cada una de las diluciones sobre Los títulos se extendieron de 1:4 a 1:512. Hubo concor- anillos diferentes de la placa de reacción. Extienda sobre dancia en la dilución final en 22 casos. Los otros 3 resultados el total de la superficie de cada círculo donde se fueron como se mencionan a continuación: colocaron las diluciones.
  3. 3. RPR Sífilis Macro-VueTM Rev. 11/07/02 A. 1:4 1:8 IN-118 B. 1:128 1:64 C. 1:32 1:16 Fabricado en México por: Laboratorios Licon S.A. Viveros del Rocío No. 33 Esto representa una concordancia dentro de una dilución en Col. Viveros de la Loma todos los casos. C.P. 54080 Tlalnepantla, Edo. de México Tel.: (55) 5362-0299 BIBLIOGRAFÍA Fax: (55) 5362-1792 1. MANUAL OF TESTS FOR SYPHILIS, 1990, APHA publication. 2. Larsen, SA, Pettit DE, Perryman MW, Hambie EA, Mullally R, Whittington W. EDTA-treated plasma in the rapid plasma reagin card test and the toluidine red unheated serum test for serodiagnosis of syphilis. J Clin Microbiol 1983; 17:341-345. 3. Walker, An. N: Brit. Jr. Ve. Dis., 47:259-262, August 1971. 4. Garner, M.F. & Backhouse , J.L.: Med. Jr. Australia, 1:737- 739, April 1973. 5. Kaufman, R.E.: Weiss, S, Moore, J.D.; Falcone, V. And Weisner, P.J.: Brit. Jr. Ven. Dis., 50:350-353, 1974.

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