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自宅で合成する細胞培養液: DIY-DMEM & L15

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自宅で細胞培養や将来的な純肉培養をするための培養液を合成する方法まとめです。

Published in: Entertainment & Humor
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自宅で合成する細胞培養液: DIY-DMEM & L15

  1. 1. 自宅実験用DIY培養液 1
  2. 2. 背景1:DIY(食品グレード)培養液について 過去の実験で、基礎培地(DMEM)はグリーンダカラで6割までの置換 が可能だった。 しかし一般家庭での細胞培養には、培地をすべて市販の原料で 調製できる必要がある。 ※研究用試薬 = 一般人は買えない。できた物を食べるのもNG 一般人も買える = 食品添加物か食品。用量を守れば食べてもOK (*゚∀゚)=3 そこで、基礎培地として一般的なDMEMおよびL15培地を、すべ て市販の材料で調製し、細胞培養をしてみる。
  3. 3. 背景2:DMEMとL15の組成 ブドウ糖、アミノ酸、ビタミンB類はDMEMとL15で共通だが、ミネラル 分は異なる。 DMEM⇒https://www.sigmaaldrich.com/life-science/cell-culture/learning-center/media-formulations/dme.html L15⇒ https://www.sigmaaldrich.com/life-science/cell-culture/learning-center/media-formulations/l-15.html DMEM L15 アミノ酸 20種類 アミノ酸 20種類 水溶性 ビタミン (B類) 水溶性 ビタミン (B類) グルコース (ぶどう糖) グルコース (ぶどう糖) CaCl2, MgSO4, KCl, NaCl, NaHCO3, NaH2PO4, 硝酸鉄 CaCl2, MgCl2, MgSO4, KCl, NaCl, KH2PO4, Na2HPO4
  4. 4. 材料1(糖分・アミノ酸・ビタミンB類) 1粒0.32g、アミノ 酸0.22g、残りは糖 質や繊維 1粒0.2g=1個で DMEM 2L分に。 シェラックの殻 グルコース(パ ン焼き 用)4.5g/Lが必 要https://item.rakuten.co.jp/fancl-shop/5272/?i asid=07rpp_10095___e4-jpeuuk00-aev-615 07def-77bf-41df-8809-18631a826757 https://item.rakuten.co.jp/ kenkocom/x252760h/ https://item.rakuten.co.jp/a uc-garlic/budoutou-3000/
  5. 5. 材料2(ミネラル分・DMEM) https://item.rakuten.co.jp/m amoru/4571474270191/ https://item.rakuten.co.jp/m atsubayakuhin/10000000/ CaCl2 (塩化 カルシウム) NaCl(食塩) https://item.rakuten.co.jp/ jyugo/t-4987306019126/ KCl(減塩食塩) NaClとKClが1:1で混 ざっている MgSO4 (硫酸 マグネシウム) 1:1モル量混合により NaH2PO4を生成する ※硝酸鉄は省いた ・要求量がごく微量 ・硝酸鉄は食品添加物ではないので一般に買えない。 ・一般入手が可能な塩化鉄での代替は検討可能 重曹 https://www.amazon.co.jp/%E 3%82%AA%E3%83%AB%E3 %83%88%E3%83%AA%E3% 83%B3%E9%85%B8-%E3%8 3%AA%E3%83%B3%E9%85 %B8%EF%BC%98%EF%BC %95%EF%BC%85%E3%80% 8C%E9%A3%9F%E5%93%81 %E6%B7%BB%E5%8A%A0% E7%89%A9%E3%80%8D%E F%BC%95%EF%BC%90%EF %BC%90%EF%BD%87/dp/B0 062HL4PU リン酸
  6. 6. 材料2(ミネラル分・L15) https://item.rakuten.co.jp/ mamoru/4571474270177/ MgCl2 (塩化 マグネシウム) https://item.rakuten.co.jp/ kurimoto/100001011/ NaCl(食塩) https://item.rakuten.co.jp/ jyugo/t-4987306019126/ KCl(減塩食塩) NaClとKClが1:1で混 ざっている 重曹 https://www.amazon.co.jp/%E 3%82%AA%E3%83%AB%E3 %83%88%E3%83%AA%E3% 83%B3%E9%85%B8-%E3%8 3%AA%E3%83%B3%E9%85 %B8%EF%BC%98%EF%BC %95%EF%BC%85%E3%80% 8C%E9%A3%9F%E5%93%81 %E6%B7%BB%E5%8A%A0% E7%89%A9%E3%80%8D%E F%BC%95%EF%BC%90%EF %BC%90%EF%BD%87/dp/B0 062HL4PU リン酸 1:1モル量混合により NaH2PO4を生成する https://item.rakuten.co.jp/m amoru/4571474270191/ MgSO4 (硫酸 マグネシウム) 炭酸カリウム 1:2モル量混合により KH2PO4を生成する
  7. 7. 等倍溶液 20倍溶液 合成手順 DMEMの場合: 食塩 0.58g 重曹 0.37g 減塩食塩 0.13g L15の場合: NaCl 0.95g 減塩食塩 0.10g 水125ml アミノ酸 サプリ1錠 + 水99ml ビタミンB サプリ1錠 合成にあたっての基本方針 ・食塩、グルコース、アミノ酸など、量を要する材料は等倍溶液を作る。 ・ビタミンB類、他ミネラルなどの微量成分は、 20倍溶液を作り、これを 20倍希釈する。 ・リン酸化合物は、リン酸とミネラルから合成する DMEMの場合: CaCl2 0.50g MgSO4 0.25g 重曹 0.19g 10倍希釈したリ ン酸 1.4ml L15の場合: CaCl2 0.50g MgSO4 0.20g MgCl2 0.19g K2CO3 0.06g 10倍希釈したリ ン酸 1.4ml 等倍溶液と20倍溶液を19:1で混ぜ、ぶどう糖4.5g/Lを追加して完成
  8. 8. 実験の様子 ・サプリメントの賦形剤(固め剤)で濁るので、濾過が必要。 ・液が落ち着いてから濾過しないと濾紙が詰まるので注意 皮むきで支 えている 濾過済み 等倍溶液
  9. 9. 細胞培養実験(参考) DIY-DMEMで初代培養した鶏胚の 心臓細胞: 細胞の接着と増殖を確認した。 (培養実験 by twitter @thesow41) https://www.nicovideo.jp/watch/sm33104702 ※L15での細胞培養は実験中

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