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Fde 048 guia de trabajo n° 1

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  • 1. Código FDE 048 GUÍA DE TRABAJO Versión 03 INGENIERIA BIOMEDICA Fecha 2009-06-091. IDENTIFICACIÓN Asignatura BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR Guía No. 1 Área Nivel II Microscopia Básicas de la Tecnología o de la Ingeniería Código BCO22 Pensum 3 Correquisito(s) Prerrequisito(s) Créditos TPS TIS TPT TIT TRABAJO INDEPENDIENTE TRABAJO PRESENCIAL Trabajo Trabajo Trabajo Trabajo X Teórico Práctico Teórico Práctico2. IDENTIFICACIÓN INDICADOR DE COMPETENCIAS CONTENIDO TEMÁTICO LOGRO -Identificar los componentes del microscopio compuesto y sus El microscopio compuesto Realiza montajes funciones. apropiados para realizar - Aprender a realizar una La Célula procariota observaciones al preparación para realizar microscopio. observaciones al microscopio. La célula eucariota animal y - Manipular correctamente el vegetal. Manipula el microscopio microscopio compuesto para de manera adecuada para realizar las observaciones. realizar las - Realizar observaciones de observaciones células Procariotes y eucariotes. - Reconocer diferencias Realiza dibujos morfológicas entre células indicando diferencias de animales y vegetales sus observaciones.El MICROSCOPIOEl microscopio es el elemento más importante para el estudio de la morfología celular. El tipo demicroscopio más utilizado es el microscopio óptico, que utiliza la luz visible para crear una imagenaumentada del objeto. El microscopio óptico simple posee una lente convexa doble con unadistancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general seutilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentosmayores. Algunos microscopios ópticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces,lo que resulta de gran utilidad considerando, que una célula animal típica mide entre 10 y 20 µm dediámetro.
  • 2. Código FDE 048 GUÍA DE TRABAJO Versión 03 INGENIERIA BIOMEDICA Fecha 2009-06-09El microscopio compuesto puede dividirse en:I. Sistema mecánico; conformado por:a) El pie o base de sustentación.b) El brazo o columna.c) La platina; que consiste en una plataforma horizontal con un orificio central por donde pasa laluz. Es aquí donde se ubica la preparación en un carro móvil que permite desplazarla.d) El tubo; es un cilindro metálico que lleva en el extremo próximo al observador el ocular y elrevólver en el extremo opuesto.e) El revólver es una pieza giratoria que posee diferentes lentes objetivos, cada uno de ellos poseeun aumento distinto.f) Los tornillos de focalización; el enfoque se realiza modificado la distancia entre la preparación yel objetivo. El ajuste se realiza con dos tornillos; el macrométrico que se usa para los ajustesgruesos y el micrométrico para el ajuste fino o de precisión. Este último tiene una escala graduada,en donde cada marca representa un avance de dos micrones.II. Sistema óptico está compuesto por:a) La fuente luminosa que se ubica bajo el condensador.b) El condensador consiste en un sistema de lentes que concentra la luz en la preparación. Posee untornillo de control que permite mover este dispositivo.c) El diafragma o iris; se localiza en el condensador y permite regular la cantidad de luz que sale deeste.d) Lentes oculares; se encuentran en la parte superior del tubo, por lo general tienen un aumento de8X, 12X ó 16X.e) Lentes objetivos; se encuentran montadas en el revólver que permite su intercambio durante laobservación. Los diferentes lentes están marcados con su aumento y la apertura numérica. Elobjetivo menor tiene un aumento de 4X, los otros generalmente son 10X, 40X y 100X.Microscopios especialesVarias propiedades ópticas pueden utilizarse en combinación con un microscopio.Nos referiremos al microscopio de campo oscuro, contraste de fases, fluorescencia y al microscopioelectrónico.Microscopio de campo oscuroSe basa en la propiedad que tienen los objetos muy pequeños del orden de la longitud de onda de laluz (o el borde de algunos objetos microscópicos) de dispersar la luz. Si iluminamos oblicuamenteel objeto en tal forma que el rayo de luz no entre al objetivo, se observará un campo oscuro. Lasmembranas biológicas, macromoléculas como las proteínas desvían la luz que los ilumina,permitiendo de este modo que la luz entre al objetivo y sea vista por el observador.Microscopio de contraste de fasesEn este caso la luz es retardada en ciertas zonas del condensador y acelerada para compensar en laszonas correspondientes del objetivo, la luz se desvía más o menos de acuerdo a la refracción. La luzretardada por el condensador en estas condiciones no pasa por la parte aceleradora del objetivo y elretardo. El resultado es que la luz proveniente de la zona límite entre dos fases llega al observadorcon diferentes grados de retardo, produciendo zonas oscuras donde hay cambio de fases.
  • 3. Código FDE 048 GUÍA DE TRABAJO Versión 03 INGENIERIA BIOMEDICA Fecha 2009-06-09Microscopio de FluorescenciaUn objetivo fluorescente es aquel que al recibir la luz de onda corta, la absorbe y emite luz de ondamás larga. La mayoría de los especímenes biológicos no son fluorescentes pero puede añadirse a lapreparación un marcador fluorescente. El microscopio de fluorescencia requiere dos filtros: uno quedeje pasar la luz de onda corta, pero no la de onda larga, para iluminar el objeto o el marcador, y elotro que bloquea el paso de la luz de onda corta, usada para iluminar y deja pasar la luz de ondalarga, emitida por el objeto.Microscopio ElectrónicoEste instrumento, permite aumentos cercanos a 1.000.000 X (mil veces el aumento del microscopiode luz), logrando visualizar átomos y moléculas. Su introducción en la década de los 50 abrió elcampo de la Citología clásica a la Biología Celular actual.El principio de este instrumento es simple, puesto que la óptica usada es la misma que la delmicroscopio de luz (o compuesto). El microscopio electrónico de transmisión consta de unacolumna donde está el cañón de electrones, condensadores, objetivo, lentes intermedias, ocular –proyector y el portaobjeto. Como los electrones no son visibles al ojo humano incluyen una pantallade observación y un sistema fotográficoA diferencia del anterior, el microscopio electrónico de barrido no posee lentes, salvocondensadores. Estos producen un haz muy fino de electrones que choca en la superficie de lamuestra y se desprenden nubes de electrones secundarios. Estos, son reconocidos por un detectorque asociado a un sistema generador de imágenes nos da una imagen de la superficie de la muestra.Instrucciones básicasAntes de observar cualquier preparación debe tener presente que el microscopio es un instrumentodelicado. Debido a esto debe utilizarse tomando en cuenta algunas instrucciones básicas:a) Coloque el microscopio en una posición cómoda sobre una superficie plana. Tómelo siempre delbrazo o columna. Si desea cambiar la posición del instrumento levántelo y NO lo arrastre por elmesónb) Es conveniente chequear la limpieza de los diferentes lentes antes de comenzar la observaciónc) Encienda la lámpara, baje el condensador y abra el diafragma completamente.Realización de la observacióna) Aleje el objetivo de la platina y coloque la lente de aumento menor.b) Seleccione la preparación que desea observar, revísela para asegurarse que esta se encuentralimpia.c) Abra la pinza del carro, coloque la preparación con el cubreobjeto hacia arriba y cierre el carro.d) Ajuste la posición del carro de modo que la región a observar quede justo en el orificio de laplatina.e) Usando el macrométrico acerque la lente a la preparación. Cuando logre un foco aproximadoutilice el micrométrico (gírelo lentamente) para el ajuste de precisión.f) Si desea cambiar el aumento, gire el revólver y seleccione el nuevo objetivo a utilizar.Debiera bastar un pequeño ajuste del micrométrico para llegar a foco, si fuera necesario reajuste lailuminación usando el condensador. Si requiere usar el lente de inmersión NUNCA lo use comoobjetivo seco, puede rayarlo.
  • 4. Código FDE 048 GUÍA DE TRABAJO Versión 03 INGENIERIA BIOMEDICA Fecha 2009-06-09LA CÉLULATodos los seres vivos están constituidos por células, en algunos casos una sola célula conforma unorganismo completo (unicelulares), en otros varias células se han organizado para constituir unorganismo (pluricelulares). Lo anterior ha llevado a la especialización celular para la realización devariadas funciones, producto de lo cual, es posible observar una amplia diversidad celular en unsolo organismo. Existen múltiples formas y tamaños celulares, como también, diferentes niveles deorganización: i) los procariotas no presentan compartimentos intracelulares. ii) los eucariotas, encambio presentan una mayor complejidad, poseen compartimentalizaciones y han desarrollado unamultiplicidad de estructuras membranosas adaptadas para realizar funciones específicasdenominadas organelos. El material genético se encuentra en un compartimento denominadonúcleo.El estudio de la estructura y funciones celulares ha experimentado tres períodos fundamentales. Elprimer periodo se inicia a comienzos del siglo XVII y se caracteriza por el descubrimiento de unmundo detectable por lupas o lentes. Las primeras observaciones fueron de glóbulos rojossanguíneos por Fierre Borel en 1656. En 1665, Robert Hooke introdujo el término célula paradescribir la estructura del corcho y en 1674, Antón van Leeuwenhoek observó organismosunicelulares vivos. Al paso de los años, los lentes se perfeccionaron y transformaron enmicroscopios ópticos. El segundo período, comienza a fines del siglo XIX y se caracteriza por latentativa de interpretar las estructuras celulares con respecto a su función. El tercer período encambio, acentúa el conocimiento de la función de lo componentes celulares a nivel molecular.Todas las células comparten dos características esenciales: la primera es la presencia de unamembrana externa que separa el protoplasma de la célula del medio externo, la segundacaracterística es el material genético que regula las actividades celulares y transmite lascaracterísticas a la descendencia. Célula eucariota animal:Imagen de http://www.aldeaeducativa.com/aldea/Fotos.ASP?which=/IMAGES/celula.gif
  • 5. Código FDE 048 GUÍA DE TRABAJO Versión 03 INGENIERIA BIOMEDICA Fecha 2009-06-09El NÚCLEO es el elemento más prominente, rodeado de una envoltura nuclear, es el depósito de lacromatina (ADN y proteínas); que puede encontrarse condensada en cromosomas.El CITOPLASMA posee una complicada red de membranas que delimitan compartimentos:organelas; la presencia de la membrana garantiza que las condiciones internas del compartimientopuedan diferir de las del citoplasma. Las organelas están suspendidas en el citosol, (literalmentesignifica "solución celular") solución acuosa de sales, azúcares, aminoácidos, ác. grasos y nucleótidos.Para formar y organizar el citoplasma y las organelas existe una red de fibras proteicas que constituyenel citoesqueleto Las principales organelas son: El tamaño de la célula está en relación con su función. La mayor parte de las células eucariotas sólo son visibles con el microscopio, estando su diámetro comprendido entre 10 y 100 micrones. Por lo general el tamaño resulta constante para cada tipo celular e independiente del tamaño del organismo, es decir una célula del riñón de un caballo es del mismo orden que la de un ratón. La diferencia en el tamaño del órgano se debe al número de células y no al tamaño de las mismas. Sistema métrico decimal y relación de tamaños.3. RECURSOS REQUERIDOS Microscopio Placa cubreobjetos Placa portaobjetos Palillo de dientes Cultivo de microorganismos Hojas de trasdescantia Tejido de epitelio bucal Agua
  • 6. Código FDE 048 GUÍA DE TRABAJO Versión 03 INGENIERIA BIOMEDICA Fecha 2009-06-094. PROCEDIMIENTO1.- En el esquema señale las diferentes partes del microscopio.2.- Realice una preparación de Células de la epidermis de una hoja: se realiza un corte en el lado delenvés de una hoja de Tradescantia, se ubica en el portaobjetos, se cubre con una gota de agua,cubrir con el cubreobjetos. La observación de la estructura del tejido, se realiza en los aumentos 4X,10X y 40X.3. Realice una preparación con una gota de cultivo celular, realice otro montaje y coloréelo con azulde metileno que se observa4. Realizar un raspado delicado de la cara interna de la mejilla con el palillo de dientes, después deenjuagarse muy bien la boca y colocar la muestra resultante sobre un portaobjetos, cubrir con elcubreobjetos y observar, después agregar una gota de colorante azul de metile..5. PARÁMETROS PARA ELABORACIÓN DEL INFORMEEntregue el esquema del microscopio con las partes, y con los dibujos de las observacionesrealizadas6. BIBLIOGRAFÍA 1. Alberts, B. Bray, D. et. al. Introducción a la biología celular. 2ª ed. Editorial Médica Panamericana, Madrid. 2006. 2. Karp G. Biología Celular y Molecular. McGraw-Hill/Interamericana, México. 2006. 3. Cooper y Hausman. La Célula. 5ª ed. Editorial Marbán, Madrid. 2005 4. Lodish, H. et. al. Biología Celular y Molecular. 5ª ed. Panamericana, Buenos Aires, Argentina. 2005. 5. Gartner, L. P., Hiatt, J. L. Atlas color de Histología. 3ª ed. Editorial Médica Panamericana. 2003. 6. Alberts, B. et. al. Biología Molecular de la célula. 4ª ed. Editorial Omega, Barcelona. 2002.www.profesormd.comhttp://www.welchallyn.com/medical/products/pdfdownload/http://www.welchallyn.com/medical/www.gruposaludgtz.org/proyecto/mspas-gtzwww.pubmeb.gov Elaborado por: SANDRA SULAY ARANGO VARELA Versión: Fecha: 03/2012 Aprobado por: ALFONSO RESTREPO JURADO

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