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Cromatografia de capa fina
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Cromatografia de capa fina

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  • 1. Cromatografía de capa fina Introducción La cromatografía de capa fina, llamada TLC por sus siglas en inglés, Thin Layer Chromatography, es un tipo de cromatografía donde la fase estacionaria es una capa delgada de un material depositado sobre un soporte, a este conjunto se le llama placa. La fase móvil es un disolvente o mezcla de disolventes, llamada eluyente, que se mueve por la fase estacionaria por capilaridad. Generalmente, las placas están formadas por una capa de gel de sílice u otro material con propiedades adsorbentes. Obtención del cromatograma La muestra se disuelve en muy poca cantidad de un disolvente volátil. Si se va a utilizar patrones de alguna sustancia se preparan de la misma manera. A continuación se dibuja una línea base con lápiz y unos puntos de referencia donde se pincharán las muestras con un capilar. Se debe preparar la cubeta en la que se va a realizar la cromatografía. Esta cubeta es un simple recipiente de vidrio en donde se añade el eluyente que se va a utilizar, siempre en un nivel inferior a la línea base que se ha dibujado en la placa. En la cubeta se introduce una tira de papel de filtro para que el vapor del eluyente esté por toda la cubeta. En este momento se introduce con cuidado la placa en la cubeta y se tapa, esperando a que el nivel del eluyente ascienda por la placa. Cuando el nivel se encuentra casi en el borde superior, se extrae la placa y se dibuja una nueva línea en este nivel. El disolvente al ser volátil se evapora en poco tiempo dejando la placa seca. Ahora se debe buscar un método para visualizar el resultado del cromatograma y ver la separación de los componentes pinchados en la placa. En el caso de que la sustancia sea coloreada no habría ningún problema ya que se verían los componentes. Para otros compuestos, las placas comerciales suelen llevar una sustancia fluorescente que si se
  • 2. irradia con luz UV, se pueden ver los componentes como manchas oscuras circulares. Estas manchas se deben marcar sobre la placa con lápiz. Otro método puede ser hacer reaccionar los componentes con alguna sustancia que coloree esos compuestos para dar una señal visual. Factores que influyen en la elución El factor que más influye en la separación de los componentes en este tipo de cromatografía es la polaridad de estos componentes. La placa está formada por una capa de gel de sílice, una sustancia muy polar, y por lo tanto, atraerá en mayor medida a componentes más polares. Al realizar el cromatograma, las sustancias más polares interaccionarán más con el soporte y su velocidad de desplazamiento será menor, esto significa que al revelar la placa cromatográfica, el componente más polar se encontrará en un lugar más cercano a la línea base que hemos dibujado, y por el contrario, el componente menos polar se moverá más rápidamente y se encontrará más alejado de la línea base. La polaridad del eluyente es un factor que consigue que los componentes se muevan más rápido o más lento en una cromatografía. Es decir, para un eluyente con mayor polaridad, éste estará más atraído por el soporte y los componentes serán más libres para moverse mejor, por lo que, al revelar la placa, los componentes saldrán más alejados de la línea base. Por la misma razón, con un eluyente menos polar, éste casi no interacciona con el soporte polar, y los compuestos tendrán una mayor interacción con el soporte, por lo que su velocidad será más pequeña y al terminar la cromatografía, se habrán desplazado muy poco a partir de la línea base. Por estos factores, es recomendable la elección de un buen eluyente para la separación de los compuestos que queremos. Para cada experiencia será distinto el tipo de eluyente que necesitemos,
  • 3. dependiendo de los componentes a separar, por lo tanto, lo mejor será realizar varias pruebas con distintos tipos de eluyentes para así considerar el más óptimo para nuestra cromatografía. Aplicaciones La cromatografía de capa fina es un método muy útil, rápido y barato que se puede utilizar principalmente para: • Identificación de alguna sustancia conocida en una mezcla por su comparación con un patrón de la sustancia pura. • Medir el grado de pureza de una muestra, si existen varias manchas en el cromatograma, es señal de que existen varios componentes en la muestra. • Obtener una medida semicuantitativa de algún componente. Pichando la misma cantidad en la placa cromatográfica, cuanto mayor sea la mancha obtenida en el cromatograma, la concentración de esa sustancia será mayor.

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