UNIVERSIDAD CATOLICA LOS ANGELES DE CHIMBOTE
FACULTA DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
CURSO : TOXI...
I. INTRODUCCION
Las Benzodiacepinas son psicotrópicos que actúan sobre el SNC utilizados como
para la el tratamiento de la...
II. MATERIALES Y REACTIVOS
MATERIALES:
 Vaso de precipitación
 Mechero
 Pinza
 Tijera
 Soporte universal
 Pera de de...
7. Se extrae la fase acuosa a la cual le agregamos 10 mL NH4OH al 10 % para
alcalinizar la muestra y obtener metabolitos t...
IV. ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS
Muestra
0rina 10 mL
Muestra + HCl se
homogeniza
Se agrega 10 mL
HCl al 10 %
Se ...
CORMATOGRAFIA EN CAPA FINA CCF
 PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIÓN DEL DILUYENTE
Metanol : Acetona
2mL 2mL
 SEMBRADO DE L...
 PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACION DEL MEDIO
Metanol : Acetona : Trietanolamina
1ml 1mL 0.05mL – 0.1 mL
20 mL 20 mL 0.1 m...
V. DISCUSION
La muestra biológica (orina) es válida para la identificación de posibles metabolitos
tóxicos.
El método Scre...
VII. RECOMENDACIÓNES
Es importante tener en cuenta que para realizar un análisis de metabolitos
benzodiacepinicos en muest...
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Determinacion de benzodiacepinas

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  1. 1. UNIVERSIDAD CATOLICA LOS ANGELES DE CHIMBOTE FACULTA DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA DE FARMACIA Y BIOQUIMICA CURSO : TOXICOLOGIA II DOCENTE : Q.F MANUEL HERNANDEZ AGUILAR. TEMA : DETERMINACION DE BENZODIACEPINAS ALUMNA :  Huanambal Guevara, Flor Liliana TRUJILLO - PERÚ 2013
  2. 2. I. INTRODUCCION Las Benzodiacepinas son psicotrópicos que actúan sobre el SNC utilizados como para la el tratamiento de la ansiedad, insomnio. A pesar de que el uso clínico también pueden causar tolerancia, dependencia y adicción. Las muertes por BZD son extremadamente raras, a no ser que se ingieran con otros fármacos como barbitúricos, etanol y antidepresivos (1). Para identificar si una persona ha consumido o no Benzodiacepinas se realiza un análisis toxicológico realizando un screening toxicológico en muestras biológicas (orina), consistente en una investigación o análisis general que tiene por finalidad confirmar o descartar la presencia de sustancias toxicas (2). Para la obtención del extracto seco, el proceso de extracción que se realiza es por decantación, este proceso se puede repetir varias veces para tener un mejor producto luego a este se le aplica un método de investigación como CCF (3). La cromatografía es una técnica que consiste en la separación de una mezcla de dos o más compuestos Todas las técnicas cromatográfica dependen de la distribución de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase móvil, llamada también activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relación con la otra, denominada fase estacionaria. La fase móvil puede ser un líquido o un gas y la estacionaria puede ser un sólido o un líquido. OBJETIVOS:  Obtención de extracto seco por método Screening  Identificar metabolitos tóxicos de BZD en muestra biológica de Orina.  Aplicar la técnica de cromatografía en capa fina para la identificación de sustancias toxicas.
  3. 3. II. MATERIALES Y REACTIVOS MATERIALES:  Vaso de precipitación  Mechero  Pinza  Tijera  Soporte universal  Pera de decantación  Papel tornasol  Pipeta  luna de reloj  pipeteador  viales de vidrio  capilares REACTIVOS:  Cloroformo  mL NH4OH al 10 %  Metanol  Agua Destilada  HCl al 10 %  Acetona  Trietanolamina  Ácido Acético Glacial III. PROCEDIMIENTO: OBTENCION DEL EXTRACCTO SECO. 1. Se toma 10 mL de orina en un vaso de precipitado. 2. Se agrega 10 mL HCl al 10 % para acidificar la muestra y mejorar el proceso de extracción 3. Se homogeniza con una varilla y se lleva a baño maría a 60 °C por 30 min. 4. Se saca del baño maría y se deja enfriar a T° ambiente, luego filtramos. 5. El filtrado se agrega a la pera de decantación y se agrega 10 mL de cloroformo, se mezcla suavemente y se deja separar. 6. Una vez separado las fases se extrae: la fase orgánica se coloca en un vial previamente rotulado para evitar confusiones.
  4. 4. 7. Se extrae la fase acuosa a la cual le agregamos 10 mL NH4OH al 10 % para alcalinizar la muestra y obtener metabolitos tóxicos en medio básico, para confirmar que este en medio básico utilizamos el papel tornasol rojo pasa de rojo a azul al cambiar de estado ácido a alcalino. 8. Agregamos 10 mL de cloroformo a la mezcla suavemente y se deja separar. 9. Después de separar las fases extraemos la fase orgánica y se coloca en un vial previamente rotulado. 10. Seguidamente se coloca a desecar los productos obtenidos. INVESTIGACION EN CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA 1. Luego de haber desecado la muestra, se agrega el diluyente por las paredes del vial que el extracto seco. 2. Seguidamente en la placa cromatografía previamente cortada y rayada se realiza el sembrado con un capilar. 3. Esta placa se coloca en el vaso de precipitado que contiene el medio (metanol, acetona, trietanolamina) para realizar el corrido. 4. Se espera que el solvente recorra el 80 % de la placa. 5. Luego se retira la placa y se deja secar. 6. Después de haber secado la placa cromatografíca se procede a realizar el revelado 7. El revelador se coloca en un spray para revelar 8. Luego aplicar con el spray el revelador Dragendorff en la capa cromatográfica 9. Luego se observa : si hay presencia o no de BZD (positivo forma de media luna y se manifiestan como manchas de color naranja intensa sobre un fondo naranja más claro)
  5. 5. IV. ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS Muestra 0rina 10 mL Muestra + HCl se homogeniza Se agrega 10 mL HCl al 10 % Se saca del BM y se deja enfriar a T° Ambiente. Filtramos Se agrega 10 mL cloroformo + la muestra filtrada La fase orgánica se coloca en un vial Fase Acuosa La fase orgánica se coloca en un vial La fase Acida La fase Básica Obtención del extracto seco Acida Básico Se lleva a la estufa a 100 °C para desecación
  6. 6. CORMATOGRAFIA EN CAPA FINA CCF  PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIÓN DEL DILUYENTE Metanol : Acetona 2mL 2mL  SEMBRADO DE LA PLACA CROMATOGRÁFICA Acetona 2mL + Metanol 2mL Extracto seco + diluyente Placa Cromatográfica Sembrado de la Placa Cromatográfica Colocamos el sembrado en el medio Esperamos el 80 % recorrido de la placa Sacamos la placa del medio y dejamos secar Luego de aplicar el spray con el revelador no se observó manchas de naranja intenso en forma de media luna que indica para de BZD solo se observó un fondo color naranja claro.
  7. 7.  PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACION DEL MEDIO Metanol : Acetona : Trietanolamina 1ml 1mL 0.05mL – 0.1 mL 20 mL 20 mL 0.1 mL  PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACION DEL REVELADOR DE DRAGENDORFF A B - Pesar 0.85mg de sub nitrato de bismuto - Pesar 8gr de KI - 10 mL de ácido acético glacial - 20 mL de agua destilada - 40 mL de agua destilada Procedimiento: Diluir el sub nitrato de nitrato con agua destilada, luego agregamos el ácido acético glacial. Procedimiento: Diluir el KI con agua destilada. A B HAG H2O 1 1 2 5 5 5 10 25 5mL de A + 5mL de B+ 10mL HAG + 25 mL H20 Metanol 1mL + Acetona 1mL+ Trietanolamina 0.1 mL Reactivo Dragendorff
  8. 8. V. DISCUSION La muestra biológica (orina) es válida para la identificación de posibles metabolitos tóxicos. El método Screening para determinación de BZD es válido, sin embargo el resultado obtenido en la práctica fue negativo esto se debe a diversos factores como:  La muestra estuvo contaminada  Error del operador por mala manipulación de la muestra  Los materiales utilizados estuvieron contaminado con otras sustancias La CCF es una técnica analítica y tiene como objetivo el análisis de una mezcla de componentes, se desarrolla rápidamente debido a su simplicidad y velocidad, para el análisis cualitativo de los productos de una reacción, puesto que permite conocer de manera rápida y sencilla los componentes que hay en una mezcla. El Rf se puede determinar para cada una de las manchas el valor de Rf (factor de retención), o la distancia que cada compuesto se desplaza en la placa. Cada compuesto tiene un Rf característico que depende del disolvente empleado y del tipo de placa de CCF utilizada, pero es independiente del recorrido del disolvente. De esta manera se puede ayudar a identificar un compuesto en una mezcla al comparar su Rf con el de un compuesto conocido (preferiblemente cuando se hacen eluir en la misma placa de CCF) (5) . VI. CONCLUSIONES  Se obtuvo el extracto seco por el método Screening  Se preparado el revelador de Dragendorff  Se preparó el medio para el recorrido de la placa  Se preparó el diluyente  Se realizó la investigación de metabolitos tóxicos en cromatografía en capa fina, el resultado fue negativo, no se observó la presencia de BZD en la muestra de orina.  Se analizó una muestra de orina tanto drogas de carácter ácido como básico, por lo tanto se procedió a realizar una extracción en medio ácido, y de la fase acuosa que resultó de esta extracción, se procedió a alcalinizar y realizándose otra extracción para obtener la fracción básica.
  9. 9. VII. RECOMENDACIÓNES Es importante tener en cuenta que para realizar un análisis de metabolitos benzodiacepinicos en muestras de orina, se debe conocer la solubilidad, el metabolismo de cada BZD y contar con los materiales y equipos necesarios, así como también de sustancias de referencia de metabolitos con el fin de obtener resultados precisos y confiables. La extracción liquido-liquido es una técnica muy utilizada por lo que uno de los factores a tener en cuenta para este tipo de extracción es la reelección del solvente adecuado es la densidad, la polaridad, selectividad y la solubilidad de la droga (4) REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. Gómez. Intoxicación por Benzodiacepinas. Departamento de toxicología de la Universidad de Antioquina. Capitulo VIII. 1275-1277. 2. Camargo F. Screening toxicológico de sustancias psicoactivas en muestras biológicas. Instituto Medido Forense. Argentina. 2010. 3. Fiorenza G. Manual De Procedimientos Analíticos Toxicológicos Para Laboratorios De Baja Complejidad. Argentina. 2007 4. Villalobos M. implementación de un método de análisis por cromatografía de metabolitos de BZD en muestras de orina. Universidad Industrial de Santander. Colombia. 2004. 5. http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_tipus.html

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