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Preparacion de medios de cultivos jhonás
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Preparacion de medios de cultivos jhonás

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Preparacion de medios de cultivos jhonás Preparacion de medios de cultivos jhonás Document Transcript

  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERIA E.A.P AGROINDUSTRIAL PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS. CURSO : MICROBIOLOGÍA GENERAL GRUPO : “B” DOCENTE :Blgo.Mblgo. Eterio Alva Muñoz CÓDIGO : 0201212035 INTEGRANTES :MUÑOZ ROJAS ANDREA GISELA CICLO: “IV” NUEVO CHIMBOTE - PERÚ 2013
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO 1. Medio puro. Peptona cloruro de sodio. 50g pesar. [Balanza analítica]. pesar. [Balanza analítica]. añadir. [Homogenizamos]. Extracto de carne agua destilada. 3g y1000ml Agar. 15g añadimos. [50 ml de aguapara disolver la sustancia]. [El balón de fondo plano con algodón, seda, hilo sellamos Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave]. calentamos llevar a un autoclave. anotar [Sometemos en una cocina eléctrica las mezclas de isimos en el laboratorio].
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL 2. Caldo común. Peptona y cloruro de sodio. 0.25g pesar. [Balanza analítica]. pesar. [Balanza analítica]. añadir. [Disolverlas en la cantidad]. Extracto de carne. 0.15g y1000ml . añadimos. [50 ml de aguapara disolver la sustancia]. [El balón de fondo plano con algodón, seda, hilo sellamos Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave]. calentamos llevar a un autoclave. anotar [Sometemos en una cocina eléctrica las mezclas de isimos en el laboratorio].
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL 3. Agar común. Peptona cloruro de sodio. 0.25g pesar. [Balanza analítica]. pesar. [Balanza analítica]. añadir. [Homogenizamos]. Extracto de carne agua destilada. 3g y1000ml Agar. 0.75g añadimos. [50 ml de aguapara disolver la sustancia]. [El balón de fondo plano con algodón, seda, hilo sellamos Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave]. calentamos llevar a un autoclave. anotar [Sometemos en una cocina eléctrica las mezclas de isimos en el laboratorio].
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL 4. Medio saboraud. Peptona y glucosa. 0.5 y 2g pesar. [Balanza analítica]. pesar. [Balanza analítica]. añadir. [Homogenizamos]. Extracto de carne agua destilada. 3g y1000ml Agar. 0.75g añadimos. [50 ml de aguapara disolver la sustancia]. [El balón de fondo plano con algodón, seda, hilo sellamos Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave]. calentamos llevar a un autoclave. anotar [Sometemos en una cocina eléctrica las mezclas de isimos en el laboratorio].
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL I. INTRODUCCIÓN El medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de los microorganismos el cual constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos. Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y deben estar exentos de cualquier microorganismo contaminante. Los medios de cultivo contienen como mínimo: carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras. De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse en: Líquido: Se denominan caldos de cultivo y no tienen agar en su formulación. Semisólidos: Contienen 0.5% de agar en su formulación. Se utilizan para estudiar la movilidad de las bacterias (presencia o ausencia de flagelo). Sólidos: Contienen de 1.5 a 2% de agar en su formulación. Estos medios inmovilizan a las células, permitiéndoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. El agar es el principal agente solidificante utilizado en los medios de cultivo. Se disuelve completamente a 100°C y se solidifica al enfriarse a 42°C. La composición precisa del medio de cultivo dependerá del microorganismo que se quiera cultivar, por lo que las necesidades nutricionales tienden a variar de al tipo de microorganismo. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer. Durante las prácticas se van a manejar medios de cultivo de composición muy variada y de tres tipos diferentes en cuanto a ingredientes. Este último aspecto es importante a la hora de la preparación de los mismos. Aunque los medios artificiales o sintéticos se pueden preparar a partir de sus componentes individuales, se pueden adquirir comercialmente como medios deshidratados a los que solamente hay que añadir la cantidad de agua necesaria. El fabricante indica la composición, la caducidad, y la cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar e incluso como debe esterilizarse. Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él. La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuación. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoría de las bacterias Grampositivas). CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio. 1. Disponibilidad de nutrientes adecuados: Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura.
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL 2. Consistencia adecuada del medio: Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla. 3. Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases: Los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerófilos en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones. 4. Condiciones adecuadas de humedad: Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio. 5. Luz ambiental: La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos. 6. PH: La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. 7. Temperatura:Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). 8. Esterilidad del medio:Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especímenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es la autoclave.
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL II. OBJETIVOS Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de los microorganismos in vitro. Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que imprescindibles, en el laboratorio de microbiología Al finalizar el trabajo práctico el estudiante estará en capacidad de: Conocer los medios de cultivo. Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y manejar adecuadamente la autoclave. III. FUNDAMENTO Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Puesto que la diversidad metabólica de los microorganismos es enorme, la variedad de medios de cultivo es también muy grande. La mayoría de los medios de cultivo se comercializan en forma de liofilizados que es preciso rehidratar. La preparación de un medio de cultivo se reduce en general a pesar la cantidad de medio y redisolverla en agua destilada (libre de inhibidores del crecimiento) siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias termolábiles se esterilizan por filtración y se añaden al resto de los componentes previamente esterilizados en laautoclave. IV. MATERIALES Balanza Infernillo eléctrico Probeta 500 ml Balones de fondo plano Gasa Tubos de ensayo Algodón Hilo Pabilo Espátula Papel Bond Plumón Tijera
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL - INGREDIENTES o Pectona. o NaCl o Glucosa. o Agua Destilada. o Extracto de Carne. o Agar. V. PROCEDIMIENTO 1° Caldo común (Bacteria) - Preparación: Peptona 5 gr Cloruro de Sodio (NaCl) 5 gr Extracto de Carne 3 gr Agua Destilada 1000 ml - Pesamos todos los productos para parte del agua destilada (50 ml) e n t o n c e s : Peptona para 50ml (agua destilada) 0.25 de Peptona g
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL Extracto de Carne para 50ml (agua destilada) 0.15 de Ext. De Carne g NaCl para 50ml (agua destilada) 0.25g de NaCl - Medimos 50 ml de agua destilada en una probeta.
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL - Pasar aproximadamente la mitad de los 50 ml a un balón de fondo plano, donde se realizara la mezcla de lo anteriormente medido. Vaciamos la mitad del agua destilada al balón de fondo plano Pasamos los productos medidos al balón de fondo plano Mezclamos Vaciamos el resto de agua destilada al balón de fondo plano - Sellar el balón de fondo plano con algodón, seda, hilo Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave.
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL 2° Agar común (Bacteria) - Preparación: Peptona 5 gr Cloruro de Sodio (NaCl) 5 gr Extracto de Carne 3 gr Agua Destilada 1000 ml Agar 15 gr - Pesamos todos los productos para parte del agua destilada (50 ml) entonces: Peptona para 50ml (agua destilada) 0.25 de Peptona g
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL Extracto de Carne para 50ml (agua destilada) 0.15 de Ext. De Carne g NaCl para 50ml (agua destilada) 0.25g de NaCl Agar para 50ml (agua destilada) 0.75 de Agar g - Medimos 50 ml de agua destilada en una probeta.
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL - aproximadamente la mitad de los 50 ml a un balón de fondo plano, donde se realizara la mezcla de lo anteriormente medido. Vaciamos la mitad del agua destilada al balón de fondo plano Vaciamos el resto de agua destilada al balón de fondo plano - Pasamos los productos medidos al balón de fondo plano Mezclamos Sellar el balón de fondo plano con algodón, seda, hilo Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave.
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL 3° Agar Sabouraud (Hongo) - Preparación: - Pesamos todos los productos para parte del agua destilada (50 ml) entonces: Glucosa 40 gr Peptona 10 gr Agua Destilada 1000 ml Agar 15 gr Peptona para 50ml (agua destilada) 0.5 g de Peptona Glucosa para 50ml (agua destilada) 2g de Glucosa Agar para 50ml (agua destilada) 0.75 de Agar g - Medimos 50 ml de agua destilada en una probeta.
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL - Pasar aproximadamente la mitad de los 50 ml a un balón de fondo plano, donde se realizara la mezcla de lo anteriormente medido. Vaciamos la mitad del agua destilada al balón de fondo plano Vaciamos el resto de agua destilada al balón de fondo plano - Pasamos los productos medidos al balón de fondo plano Mezclamos Sellar el balón de fondo plano con algodón, seda, hilo Pabilo.
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL - Después de realizado los medio de cultivos se le iba colocando el nombre y cubriendo con papel bond para evitar que se pierda o contamine el medio de cultivo.
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL - Procedemos a calentar los tres balones de fondo plano, con la intención de poder disolver totalmente los productos mezclados, para ello calentamos en el infernillo eléctrico hasta notar la presencia de burbujas en la superficie del cultivo (no hervir).
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL VI. RESULTADOS VII. GLOSARIO. Define los siguientes términos. 1. Elemento traza Un elemento traza es un compuesto químico que es necesario en cantidades ínfimas para el crecimiento, desarrollo y fisiología de un organismo. También puede ser referido como micronutriente. 2. Macronutrientes Los macronutrientes son aquellos nutrientes que suministran la mayor parte de la energía metabólica del organismo. Los principales son glúcidos, proteínas, y lípidos. Otros incluyen alcohol y ácidos orgánicos. 3. Micronutrientes Son sustancias que el organismo de los seres vivos necesitan en pequeñas dosis. Son indispensables para los diferentes procesos bioquímicos y metabólicos de los organismos vivos y sin ellos morirían. Algunos de los más importantes micronutrientes son el yodo, el hierro y la vitamina A. Existen otros micronutrientes como el zinc, el ácido fólico, el calcio y todas las vitaminas y minerales.
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL 4. Reactivo grado reactivo o químicamente puro Son aquellos cuyo grado de impureza es mínimo, son utilizados en laboratorios. 5. Peptona Son una variedad de hidrolizados proteínicos derivados de caseína, carne y vegetales, que en su presentación final ofrecen una fuente efectiva de nitrógeno y carbono en otros nutrientes. En formulaciones adecuadas estimulan y promueven el crecimiento bacteriano. 6. Cloruro de sodio El cloruro de sodio es un compuesto iónico formado por un catión sodio (Na+) y un anión cloruro (Cl-), y como tal, puede reaccionar para obtener cualquiera de estos dos iones. Como cualquier otro cloruro iónico soluble, precipita cloruros insolubles cuando es agregado a una solución de una sal metálica apropiada como nitrato de plata 7. Extracto de carne El extracto de carne es un caldo de carne muy concentrado, normalmente de vacuno. Se usa para dar sabor a carne a diversas recetas, y para elaborar consomés y sopas. 8. Glucosa La glucosa es un monosacárido con fórmula molecular C6H12O6. Es una hexosa, es decir, contiene 6 átomos de carbono, y es una aldosa, esto es, el grupo carbonilo está en el extremo de la molécula (es un grupo aldehído). Es una forma de azúcar que se encuentra libre en las frutas y en la miel. 9. Agar Agar o agar-agar es una gelatina vegetal de origen marino. Químicamente el agar es un polímero de subunidades de galactosa; en realidad es una mezcla heterogénea de dos clases de polisacáridos: agaropectina y agarosa. El agar nutritivo es usado como medio de cultivo para el crecimiento de bacterias y hongos, pero no para virus (aunque los virus bacteriófagos crecen frecuentemente en bacterias cultivadas en agar).
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL 10. Autoclave Una autoclave es un recipiente de presión metálico de paredes gruesas con un cierre hermético que permite trabajar a alta presión para realizar una reacción industrial, una cocción o una esterilización con vapor de agua. Su construcción debe ser tal que resista la presión y temperatura desarrollada en su interior. La presión elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a los 100 °C. La acción conjunta de la temperatura y el vapor produce la coagulación de las proteínas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la reproducción de éstos, cosa que lleva a su destrucción. VIII. CONCLUSIONES Se reconocieron los diferentes medios de cultivoexistentes para el crecimiento de microorganismosaplicando conceptos básicos de nutrición ypreparación de los mismos. Con la realización de la práctica de preparación de medios para el cultivo de tejidos vegetales, se lograron los objetivos establecidos en la misma, proporcionando al alumno gran conocimiento de cómo prepararlo y cuáles son los nutrimentos necesarios de acuerdo a la consistencia que el medio de cultivo obtuvo. Es importante mencionar que se obtuvieron buenos resultados ya que se pudo hacer la preparación del medio sin dificultad alguna. Aprendimos los pasos para elaborar un medio de cultivo, sus cálculos respectivos de las cantidades necesarias para su preparación. IX. BIBLIOGRAFIA http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedra Micro/10_Preparaci%C3%B3n_de_medios_de_cultivo.pdf http://www.slideshare.net/WARAUYA20/medios-de-cultivosmetodologa-y-usos
  • UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL http://www.slideshare.net/Pashmina19/medios-de-cultiv0 http://yactivany.blogspot.com/2012/03/practica-n3-preparacion-demedios-para.html http://www.unavarra.es/genmic/microgral/manual%20practicas%20 micagral.pdf