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Metabolismo de proteinas
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Metabolismo de proteinas Document Transcript

  • 1. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA INGENIERIA AGROINDUSTRIAL NOMBRE: ORTIZ MORENO ANGELA DOCENTE: ETERIO ALVA MUÑOZ CICLO: IV TEMA: METABOLISMO DE PROTEINAS NUEVO CHIMBOTE – PERU 2013
  • 2. METABOLISMO DE PROTEINAS METABOLISMO DE PROTEINAS I. INTRODUCCIÓN Las bacterias son muy versátiles en la degradación de polímeros. Sin embargo, existen microbios que son más activos frente a ciertos compuestos. Los proteolíticos, se caracterizan por ser degradadores de proteínas en forma más activa que otras, de igual manera los amilolíticos, los lipolíticos, hemolíticos,etc. Existe microorganismo que se comportan como proteolíticos. Amilolíticos, lipolíticos,etc., debido a que tienen un sistema enzimático muy versátil. La degradación se puede demostrar por la aparición de unidades monomericas derivados de los compuestos poliméricos, así, de las proteínas, se obtendrán aminoácidos, y a partir de estos derivados como indol, escatol, ácido sulfhídrico, amoniaco,etc. La degradación de estos compuestos nitrogenados se evidencia por la aparición de amoniaco, etc. La degradación de compuestos nitrogenados se evidencia por la aparición de amoniaco u otros compuestos. Siempre que existan las condiciones adecuadas, el microorganismo y el sustrato a degradarse, aparecen compuestos productos de la degradación. II. OBJETIVOS Demostrar la acción de las bacterias frente a compuestos poliméricos nitrogenados, como proteínas, urea, etc. Demostrar que no todas las bacterias tienen capacidad de degradar ciertos compuestos. Observar la presencia de algunos compuestos de la degradación de proteínas por medio de reactivos de lectura. III. MATERIAL Y METODOS 3.1 MATERIAL  Material biologíco:  Cultivos puros de Escherichia coli, proteus vulgaris, Pseudomonas. Medio de cultivo: Microbiología Página 2
  • 3. METABOLISMO DE PROTEINAS  Medio urea  Medio gelatina  Caldo triptonado Reactivos:  Reactivo de Kovac´s Material de vidrio.  Placas Petri  Tubos de ensayo 3.2 METODO (PROCEDIMIENTO) DEGRADACION DE PROTEINAS Licuefacción de gelatina. En los tubos contiendo medio gelatina se ha sembrado  Pseudomona  E. coli PRODUCCION DE INDOL Y H2S. Ciertos microbios son capaces de degradar al triptófano en indol, otros en degradar los aminoácidos azufrados y producir la liberación del ácido sulfhídrico y finalmente y otros producen las dos cosas. En los tubos conteniendo caldo triptonado se ha sembrado  Proteus  E. Coli DEGRADACION DE COMPUESTOS AMINADOS. Hidrolisis de la urea. De la hidrolisis de la urea se libera el amoniaco y como resultado el medio se torna alcalino haciendo virar el indicador de Ph al color grosella. Microbiología Página 3
  • 4. METABOLISMO DE PROTEINAS En los tubos conteniendo medio urea se ha sembrado:  Pseudomonas  E. Coli  Proteus IV. RESULTADOS MEDIO GELATINA Luego de una incubación de 24 horas y refrigeración de 4 horas se observa que el tubo sembrado con E.Coli se ha gelificado y el Pseudomonas no. Por lo tanto las Pseudomonan han reaccionado de forma positiva con la licuefacción de la gelatina. Fundamento: Microbiología Página 4
  • 5. METABOLISMO DE PROTEINAS La prueba de licuefacción de gelatina se utiliza como medio de cultivo gelatina nutritiva, en esta prueba se pretende determinar la capacidad de un microorganismo de producir enzimas de tipo proteolíticas (gelatinasas) que licuan/hidrolizan la gelatina o muestran cambios característicos debido a los productos de degradación. La gelatina como proteína derivada del colágeno animal es hidrolizada por la gelatinasa en sus aminoácidos constituidos, con pérdida de sus características gelificantes. PRODUCCION DE INDOL Y H2S. Se incubo a 37ºC durante 24 horas y tras la incubación, añadimos unas gotas de reactivo de Kovacs observando lo siguiente:  El E.coli reacciono de forma positiva observándose un aniño rojo rosella en la parte superior. Fundamento: El indol es un compuesto que se genera mediante la desaminación reductiva del triptófano y esta reacción es llevada a cabo por algunas bacterias que Microbiología Página 5
  • 6. METABOLISMO DE PROTEINAS poseen las enzimas denominadas en su conjunto triptofanasas.Para detectar la producción deindol se utiliza el medio Caldo triptófano y la lectura de la prueba se realiza con el reactivo de Kovacs (alcohol isoamilo, p-dimetilamino benzaldehído y ácido clorhídrico concentrado) con el que el indol producido reacciona generando una coloración rosa intensa. DEGRADACION DE LA UREA  El tubo conproteos y pseudónona han reaccionado de forma positiva, es decir estos microorganismos contienen ureasa. Fundamento Cuando una bacteria contiene la enzima ureasa puede descomponer la urea. Los productos de esta reacción de hidrólisis son el amoniaco y el dióxido de carbono. Por sí mismo, esto no sería perceptible. Cuando la reacción se produce en Microbiología Página 6
  • 7. METABOLISMO DE PROTEINAS presencia de indicadores de pH, sin embargo, produce un color perceptible. El amoníaco provoca un pH básico (alcalino) a desarrollar y el indicador de pH cambiar de color. El indicador más comúnmente utilizado para esta prueba es de color rojo fenol, que se vuelve de color rosa después de la exposición al amoniaco. La aparición de una coloración rosa es un resultado positivo. Esto significa que la bacteria contiene ureasa. CUESTIONARIO 1. ¿Qué importancia tiene el estudio de la degradación de proteínas? La degradación de proteínas también tiene un rol fundamental en la regulación del metabolismo. Así por ejemplo, durante una desnutrición los proteasomas de las células musculares son muy activos, ya que al degradarlas en sus constituyentes básicos -los aminoácidos- estos quedan libres para producir glucosa a partir de ellos, la que a su vez se quema para generar energía. Es así como la destrucción de las proteínas musculares explican la atrofia y debilidad de la masa muscular que se produce en individuos que sufren una desnutrición o una enfermedad avanzada, como el SIDA o una diabetes no tratada. La degradación de las proteínas desempeña importantes funciones, ya sea por la modulación de los niveles intracelulares de proteínas específicas (proteólisis limitada), como por la eliminación de proteínas anormales. La degradación de las proteínas, y de los biopolímeros en general, no fue considerada por mucho tiempo como un mecanismo necesario en la homeostasis de células y tejidos. Actualmente se sabe que en la degradación de determinadas proteínas reside el control de diversos procesos biológicos. Algunos fundamentales, como la progresión del ciclo celular. 2. ¿Fundamente la hidrolisis de las proteínas en la formación de indol y ácido sulfhídrico? Microbiología Página 7
  • 8. METABOLISMO DE PROTEINAS La prueba del indol es una prueba bioquímica realizada en especies bacterianas para determinar la habilidad del organismo de romper el indol del aminoácido triptófano. Esta división molecular es lograda por una serie de enzimas intracelulares diferentes, un sistema que en conjunto se le llama con frecuencia triptofanasa. Se genera el indol por una desaminación reductiva del triptófano via la molécula intermediaria ácido indolpirúvico. Las triptofanasas catalizan la reacción de desaminación, durante el cual se remueve el grupo amino (NH2) de la molécula de triptófano. Los productos finales de la reacción son el indol, ácido pirúvico, amoníaco (NH3) y energía. Como coenzimade la reacción se requiere al fosfato de piridoxal. Evalúa la presencia en las bacterias de la enzima triptofanasa, mediante la cual, ocurre la hidrólisis y desaminación oxidativa del triptófano, con formación de indol. El indol se evidencia al añadir el revelador: reactivo de Kovacs (p-dimetilamino benzaldehído) que al condensarse con el indol, forma un anillo de color rojo o fucsia. 3. ¿Explique el cambio de color en la hidrolisis de la urea? La capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos moléculas de amoniaco por la acción de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio. La hidrolisis de la urea es catalizada por la ureasa para dar dos moléculas de amoniaco. La ureasa es una enzima microbiana vinculada con la descomposición de los compuestos orgánicos. Microbiología Página 8
  • 9. METABOLISMO DE PROTEINAS DISCUSIONES Según el libro de Bacteriología General: Principios Y Prácticas de Laboratorio de Evelyn Rodríguez Cavallini  PRODUCCION DE INDOL El indol es uno de los productos derivados de la oxidación del triptófano, producido por la desanimación del ácido indol pirúvico, principal intermediario en la degradación del triptófano. Algunos microorganismos poseen la enzima triptifanasa, que les permite hidrolizar y desaminar oxidativamente el triptófano y formar entre otros productos el indol. Este puede extraerse con xilol y evidenciarse con el reactivo de Kovacs (pdimetilanimo benzaldehído), que al condensarse con el indol, forma un producto de color fucsia. Para esta prueba se utiliza caldo triptona al 1% peptona derivada de la caseína y cuyo contenido de triptófano es alto. Los carbohidratos inhiben la producción de indol, por cuanto son utilizados antes que las peptonas. Además, la acidificación que provocan puede inhibir el metabolismo bacteriano; por ello, no se incluyen en los medios para análisis de indol.  Medio Ureasa: Es particularmente útil para diferenciar Proteus spp. de otros miembros de la familia Enterobacteriaceae. El rojo de fenol es el indicador de pH y la urea es el sustrato de la enzima ureasa. Aquellas bacterias que poseen la enzima ureasa, pueden utilizar el nitrogeno proveniente de la urea, la hidrolizan, liberando amoníaco y dióxido de carbono. Estos productos metabólicos alcalinizan el medio, haciendo virar el indicador rojo fenol del amarillo al rojo. Su uso, se recomienda para diferenciar Proteus spp. de otros géneros. Microbiología Página 9
  • 10. METABOLISMO DE PROTEINAS CONCLUSIONES Se determinó la acción de las bacterias frente a compuestos poliméricos nitrogenados, como proteínas y urea Se demostró que no todas las bacterias tienen capacidad de degradar ciertos compuestos, como fue en el caso del medio urea, el E.Coli no degrado este medio. Algunas bacterias utilizan la urea como fuente de nitrógeno. La ureasa bacterianacataliza la conversión de urea en dióxido de carbono y amoniaco. Este actúa como fuente de nitrógeno; además, capta protones, transformándose en amonio, que alcaliniza el medio de cultivo. Microbiología Página 10