Determinación de coliformes totales y fecales

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Determinación de coliformes totales y fecales

  1. 1. Determinación de coliformes totales y fecales<br />Introducción: Contaminación fecal por coliformes que habitan en el intestino humano y otros animales de sangre caliente. Baja capacidad de los coliformes para sobrevivir en H2O.<br />Objetivo: Aplicar los métodos de la norma oficial mexicana (NMX-AA-42-1987) para determinar la presencia de coliformes totales y fecales en muestras de agua.<br />Organismos coliformes: Bacterias tipo Escherichia Coli capaces de crecer en medio aeróbico. Se desarrollan en temperaturas de 35° C a 37°C (+/- 1°C), Fermentan la lactosa, produciendo gas y ácido láctico.<br />Coliformes Fecales: Poseen las mismas propiedades que los coliformes, pero son termotolerantes y pueden fermentar la lactosa a 44°C.<br />Escherichia Coli: Coliforme termotolerante, que produce indol en presencia de tiptófano.<br />PRACTICA (notas que yo tome en clase)<br />*Importante: que toda la práctica se realice en un ambiente estéril, lo que quiere decir que es necesario realizarlo en el laboratorio y con dos mecheros prendidos.<br />Pasos a seguir <br />1-Preparar tubos: Tomar 9 tubos de ensaye y dentro de cada uno colocar un tubo Durham.<br />2-Preparar caldo lactosado:(para coliformes totales)<br />a) sacar la cuenta de cuanta solución ocuparemos<br />b) pesar el polvito y echarlo en el matraz para luego revolver en el.<br />c) medir el agua destilada o en este caso el agua de garrafón y echarla en el matraz.<br />d) agitar hasta que quede todo disuelto.<br />e) echar solución a los tubos: echar la solución de caldo lactosado en los tubos de ensaye que tienen los tubos Durham adentro hasta que los cubra a aproximadamente 1cm arriba de los tubos Durham y sacar el aire que quede dentro de estos.<br />d) esterilizar por 15 minutos<br />3-sembrar<br />a) tomar los 9 tubos anteriores y a 3 tubos de ensaye con una pipeta agregar 0.1ml de la muestra de agua a cada uno<br />b) a otros 3 con otra pipeta agregarles 1 ml de la muestra de agua c/u<br />c) a los últimos 3 agregar 10 ml<br />4-Incubar por 24-48 hrs a 36° C<br />5- checar positivos viendo la producción de gas( burbujitas en tubos Durham), los que tienen gas son los positivos.<br />6- resembrar en EC (para coliformes fecales) repetir el paso 1y 2 pero esta vez no serán 9 tubos, ahora serán los que hayan salido positivos y además en vez de ser caldo lactosado ahora será EC.<br />7-poner muestra de agua<br />a) tomar los tubos con EC y ponerles una aza a cada uno<br />8- Reincubar a 44°C de 24- 48 horas.<br />9-checar positivos viendo la producción de gas<br />10-utilizar la tabla para saber los coliformes.<br />Diagrama de Flujo:<br />1) acomodar los tubos<br />5444490272415<br />2) preparar caldo lactosado (para coliformes totales) <br />Echar caldo lactosado y sacar burbujasAgitar 4225290210820 <br />esterilizar<br />3) sembrar<br />4) incubar<br />24-48hrs2348865306705 <br />5) checar burbujas<br />296164081915 <br />6) resembrar positivos en EC (para coliformes fecales)<br />Echar EC y sacar burbujas<br />7) poner muestra de agua<br />8) reincubar<br />9) checar positivos<br />10) usar la tabla para saber los positivos<br />

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