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Centro de estudios tecnológicos del mar n1
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Centro de estudios tecnológicos del mar n1

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  • 1. Centro de estudios tecnológicos del mar No.11 Determinación de coliformestotales y fecales por el método del número más probable Materia: Análisis bilógicos del agua Maestro: José Luis Peña Majarrez Alumna: Sonia del Carmen Camarena Navarro Especialidad: Laboratorista Ambiental Grupo: 3ro A
  • 2. Introducción: En esta práctica determinaremos los organismos coliformes que son un grupo deespecies de bacterias que tienen una gran iimportancia relevante como indicadores de contaminación del agua y los alimentos. Las bacterias de este género se encuentran principalmente en el intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, es decir, homeotermos, pero también ampliamente distribuidas en la naturaleza, especialmente en suelos, semillas y vegetales, estas son Bacterias tipo Escherichia coli capaces de crecer en medio aeróbico. Se desarrollan en temperaturas de 35° C a 37°C (+/- 1°C), Fermentan la lactosa, produciendo gas y ácido láctico. También determinaremos los coliformes fecales que poseen las mismas propiedades que los coliformes, pero son termotolerantes y pueden fermentar la lactosa a 44°C. Objetivo: El objetivo de esta práctica es determinar por el método del numero más probable descrito en la norma oficial mexicana 112-SSA1-1994 las abundancias de coliformes totales y fecales en el agua del arroyo del cañón de Doña Petra, de Maneadero, delinvernadero del CETMAR, del mar del Sauzal, de Pedregal-Playitas y de las peceras de los nemos y acumios de acuicultura del CETMAR. Método:*Importante: que toda la práctica se realice en un ambiente estéril, lo que quiere decir que es necesario realizarlo en el laboratorio y con dos mecheros prendidos. 1-Preparar tubos: Tomar 9 tubos de ensaye y dentro de cada uno colocar un tubo Durham. 2-Preparar caldo lactosado:(para coliformes totales) a) sacar la cuenta de cuanta solución ocuparemos b) pesar 6.5 gramos del medio de cultivo en la balanza granataria y colocarlo en el matráz para luego disolver.c) En un matráz de 500 ml aforar con agua destilada (en este caso el agua de garrafón) d) Agitar hasta que quede todo disuelto.e) Agregar la solución de caldo lactosado a los tubos de cada serie que tienen los tubos Durham adentro, hasta que los cubra a aproximadamente 1cm arriba de los tubos Durham y sacar el aire que quede dentro de estos. d) esterilizar por 15 minutos, a 121°C y 15 libras de presión 3-sembrara) tomar los 9 tubos anteriores y a 3 tubos de ensaye con una pipeta agregar 0.1ml de la muestra de agua a cada uno b) a otros 3 con otra pipeta agregarles 1 ml de la muestra de agua c/u
  • 3. c) a los últimos 3 agregar 10 ml 4-Incubar por 24-48 hrs a 36° C5- checar positivos viendo la producción de gas (burbujitas en tubos Durham), los que tienen gas son los positivos. 6- resembrar en EC (para coliformes fecales) repetir el paso 1y 2 pero esta vez noserán 9 tubos, ahora serán los que hayan salido positivos y además en vez de ser caldo lactosado ahora será en medio EC del cual serán 18.5gramos en 500 ml de agua destilada 7-poner muestra de agua a) tomar los tubos con EC y ponerles una aza a cada uno 8- Reincubar a 44°C de 24- 48 horas. 9-checar positivos viendo la producción de gas 10-Calcular el número más probable de coliformes totales y fecales Calcularlo utilizando la tabla #6 que se muestra en el diagrama de flujo. Diagrama de Flujo: 1) acomodar los tubos 2) preparar caldo lactosado (para coliformes totales) 6.5gr 500ml Agitar esterilizar Echar caldo lactosado y sacar burbujas
  • 4. 3) sembrar 4) incubar 24-48hrs5) checar burbujas
  • 5. 6) resembrar positivos en EC (para coliformes fecales) 500ml 18.5 gramos Echar EC y sacar burbujas 7) poner muestra de agua
  • 6. 8) reincubar9) checar positivos
  • 7. 10) Calcular
  • 8. Resultados En la siguiente tabla se muestran los resultados de los tubos que dieron positivo en cada medio de cultivo y el cálculo de el numero más probable de coliformes totales y fecales según la tabla anterior de la NOM 112-SSA1-1994. Caldo lactosado Medio EC Muestra 10ml 1ml 0.1ml NMP 10ml 1ml 0.1 NMP de agua coliformes coliformes totales fecales Acuicultura 3 3 2 1,100 3 3 0 240 (Acumios) Maneadero 3 3 3 >/= 2,400 3 3 3 >/=4800 Acuicultura 3 3 3 >/= 2,400 3 3 3 >/=4800 (nemos)Pedregal-playitas 3 3 3 >/= 2,400 3 2 1 30-440 Cañón de Doña 3 3 3 >/= 2,400 1 2 3 No Petra determinado Invernadero 3 3 3 >/= 2,400 3 3 3 >4800 Sauzal(mar) 3 3 0 240 3 0 0 23 DiscusiónEl agua más contaminada es la de el invernadero, esto probablemente sea porque se desarrollan en altas temperaturas, tal y como está el invernadero. La menos contaminada es la del Sauzal y probablemente sea porque está más fría , limpia yprincipalmente por el efecto bactericida que es la muerte de bacterias por sustancias que sueltan los organismos para defenderse de estos. El numero más probable de coliformes fecales en el cañón de Doña Petra no está determinado, sin embargo investigue y ha habido varias enfermedades gastrointestinales en los habitantes de esta zona lo cual probablemente sea por coliformes fecales. Conclusión El agua más contaminada es la que se encuentra en el invernadero con el NMP >4800 de coliformes fecales y la menos contaminada fue la del mar del Sauzal por lo cual te puedes meter a nadar agusto sin que te pase nada malo. Bibliografía -http://es.wikipedia.org/wiki/Coliforme el día 17/ octubre -Apuntes en clase 13/septiembre- 14/octubre -http://es.wikipedia.org/wiki/Bactericida - 20/octubre -http://www.elvigia.net/noticia/solicitan-no-tocar-arroyo-en-ca-n -1/noviembre

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