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Centro de estudios tecnológicos del mar n1
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Centro de estudios tecnológicos del mar n1

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Practica-Determinacion de coliformes totales y fecales por el NMP

Practica-Determinacion de coliformes totales y fecales por el NMP

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  • 1. Centro de estudios tecnológicos del mar No.11<br />Determinación de coliformes<br />totales y fecales por el método del número más probable<br />1205865277495<br />Materia: Análisis bilógicos del agua<br />Maestro: José Luis Peña Majarrez<br />Alumna: Sonia del Carmen Camarena Navarro<br />Especialidad: Laboratorista Ambiental<br />Grupo: 3ro A<br />Introducción:<br />En esta práctica determinaremos los organismos coliformes que son un grupo de especies de bacterias que tienen una gran iimportancia relevante como indicadores de contaminación del agua y los alimentos. Las bacterias de este género se encuentran principalmente en el intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, es decir, homeotermos, pero también ampliamente distribuidas en la naturaleza, especialmente en suelos, semillas y vegetales, estas son Bacterias tipo Escherichia Coli capaces de crecer en medio aeróbico. Se desarrollan en temperaturas de 35° C a 37°C (+/- 1°C), Fermentan la lactosa, produciendo gas y ácido láctico. También determinaremos los los coliformes fecales que poseen las mismas propiedades que los coliformes, pero son termotolerantes y pueden fermentar la lactosa a 44°C.<br />Objetivo:<br />El objetivo de esta práctica es determinar por el método del numero más probable que viene en la norma oficial mexicana 112-SSA1-1994 las abundancias de coliformes totales y fecales en las muestras de agua que tomamos, en el caso de mi equipo tomamos una muestra de agua del arroyo del cañón de doña petra, y en el de otros equipos tomaron de Maneadero, del invernadero, etc.<br />Método:<br />*Importante: que toda la práctica se realice en un ambiente estéril, lo que quiere decir que es necesario realizarlo en el laboratorio y con dos mecheros prendidos.<br />1-Preparar tubos: Tomar 9 tubos de ensaye y dentro de cada uno colocar un tubo Durham.<br />2-Preparar caldo lactosado:(para coliformes totales)<br />a) sacar la cuenta de cuanta solución ocuparemos<br />b) pesar ‎6.5 del polvito en la balanza granataria y echarlo en el matraz para luego revolver en el.<br />c) medir el agua destilada o en este caso el agua de garrafón que serán 500 ml y echarla en el matraz.<br />d) agitar hasta que quede todo disuelto.<br />e) echar solución a los tubos: echar la solución de caldo lactosado en los tubos de ensaye que tienen los tubos Durham adentro hasta que los cubra a aproximadamente 1cm arriba de los tubos Durham y sacar el aire que quede dentro de estos.<br />d) esterilizar por 15 minutos<br />3-sembrar<br />a) tomar los 9 tubos anteriores y a 3 tubos de ensaye con una pipeta agregar 0.1ml de la muestra de agua a cada uno<br />b) a otros 3 con otra pipeta agregarles 1 ml de la muestra de agua c/u<br />c) a los últimos 3 agregar 10 ml<br />4-Incubar por 24-48 hrs a 36° C<br />5- checar positivos viendo la producción de gas (burbujitas en tubos Durham), los que tienen gas son los positivos.<br />6- resembrar en EC (para coliformes fecales) repetir el paso 1y 2 pero esta vez no serán 9 tubos, ahora serán los que hayan salido positivos y además en vez de ser caldo lactosado ahora será en medio EC del cual serán 18.5gramos en 500 ml de agua destilada<br />7-poner muestra de agua<br />a) tomar los tubos con EC y ponerles una aza a cada uno<br />8- Reincubar a 44°C de 24- 48 horas.<br />9-checar positivos viendo la producción de gas<br />10-Calcular el número más probable de coliformes totales y fecales Calcularlo utilizando la tabla #6 que se muestra en el diagrama de flujo.<br />Diagrama de Flujo:<br />1) acomodar los tubos<br />5520690953770<br />2) preparar caldo lactosado (para coliformes totales)<br />500ml‎6.5gresterilizarEchar caldo lactosado y sacar burbujas4330065430530Agitar<br />3) sembrar<br />4) incubar<br />24-48hrs2348865306705<br />5) checar burbujas<br />4225290353060<br />6) resembrar positivos en EC (para coliformes fecales)<br />500ml<br />Echar EC y sacar burbujas18.5 gramos<br />7) poner muestra de agua<br />8) reincubar<br />9) checar positivos<br />10) Calcular<br />Resultados<br />Medio ECCaldo lactosadoEn la siguiente tabla se muestran los resultados de los tubos que dieron positivo en cada medio de cultivo y el cálculo de el numero más probable de coliformes totales y fecales según la tabla anterior de la NOM 112-SSA1-1994.<br />Muestrade agua10ml1ml0.1mlNMP coliformes totales10ml1ml0.1NMP coliformes fecalesAcuicultura(Acumios)3321,100330240Maneadero333>/= 2,400333>/=4800Acuicultura(nemos)333>/= 2,400333>/=4800Pedregal-playitas333>/= 2,40032130-440Cañón de Doña Petra333>/= 2,400123No determinadoInvernadero333>/= 2,400333>4800Sauzal(mar)33024030023<br />Discusión<br />El agua más contaminada es la de el invernadero, esto probablemente sea porque se desarrollan en altas temperaturas, tal y como está el invernadero. La menos contaminada es la del sauzal y probablemente sea porque está más fría y limpia. El numero más probable de coliformes fecales en el cañón de Doña petra no está determinado, sin embargo investigue y ha habido varias enfermedades gastrointestinales en los habitantes de esta zona lo cual probablemente sea por coliformes fecales.<br />Conclusión<br />El agua más contaminada es la que se encuentra en el invernadero con el NMP >4800 de coliformes fecales y la menos contaminada fue la del mar del Sauzal por lo cual te puedes meter a nadar agusto sin que te pase nada malo.<br />Bibliografía<br />-http://es.wikipedia.org/wiki/Coliforme el día 17 de octubre<br />-Apuntes en clase 13/septiembre- 14/octubre<br />

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