Estudio GenotóXico De La Argentatina B, 1.1

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  • Graf. 1: Según la OMS el cáncer se ha convertido en la segunda causa de muerte a nivel mundial ocupando el 23 % del total de defunciones luego de las Enf. Cardiovasculares, es por ello que se hace importante el estudio de esta enfermedad que afecta indistintamente a todos los pueblos Graf 2: en esta grafica se puede observar la incidencia de los diferentes tipos de cancer como se distribuye de manera heterogenea a nivel mundial
  • En lo que respecta a nuestro país se ha demostrado que el tipo de cáncer mas común en las mujeres es el Cáncer de Mama con el 34.5% y en los hombres es el cáncer de Próstata con un 44.9%; adentrandonos mas cercanamente en nuestra provincia se han registrado 3566 casos de los cuales 1615 se han registrado en la ciudad de loja
  • Graf. 1: los principales factores externos que contribuyen al desarrollo del cáncer son: el cigarrillo, la mala alimentación, las bebidas alcohólicas, y la contaminación, entre otros . Graf. 2: En el proceso de carcinogenesis se definen varias etapas: Iniciación se da cuando un factor externo ya sea físico o químico produce un cambio genético a la cell, en la promoción esta cell se divide, luego en la etapa de transformación por acción de un agente genotóxico se produce una célula cancerosa y finalmente esta la etapa de progresión que es en si el desarrollo de un tumor maligno o cáncer.
  • Hoy en día contamos con algunos tipos de tratamientos contra el cáncer entre los que podemos nombrar están: los procesos quirurgicos, la radiación y la mas utilizada la quimioterapia la cual se puede definir como un procedimiento terapéutico farmacológico, que consiste en la utilización de fármacos denominados antineoplásicos, para el tratamiento paliativo del cáncer.
  • El Partenium argentatum es un arbusto nativo del desierto de Desierto de Chihuahua México y sudoeste de EE.UU, pertenece a la familia de las Asteraceas, dentro del proceso de industralización de esta especie se obtiene un residuo resinoso el cual es rico en compuestos triterpenicos denominados Argentatinas A, B y C.
  • Dentro de nuestro proyecto escogimos trabajar con la Argentatina B, ya que esta en estudios realizados previamente por Parra y colaboradores se obtuvo que esta es una molécula citotóxica en líneas celulares cancerosas humanas, es citostática en linfocitos humanos, es inhibidor no competitivo del receptor del estradiol y es no genotoxico en linfocitos humanos determinado en el ensayo de micronucleos con bloqueo de citocinesis
  • Esta técnica consiste en embeber las células individuales en agarosas, para posteriormente ser lisadas y sometidas a electroforesis y así observar la migración del ADN
  • Esta técnica nos permite observar diferentes tipos de daños como son: rotura de simple y doble cadena, entrecruzamientos, daño oxidativo, crosslinkins y reparación de daño
  • Aquí voy a decir brevemente el protocolo de cometa que yo use
  • en la grafica de viabilidad del EMS observamos que las dosis probadas son subtoxicas ya que la viabilidad es superior al 70%, así mismo se observo una diferencia significativa entre las consentraciones de 0.075 y 0.1 Um con respecto al control
  • En la grafica de la viabilidad de Argentatina B se observa que la viabilidad es superior al 70% observándose una diferencia significativa entre todas las concentraciones con respecto al control
  • En lo que respecta el análisis del cometa se observo la migración del ADN (tamaño de cola), en la grafica se observa una respuesta dosis – dependiente ya que a medida que se aumentan las concentraciones se aumenta el daño
  • Se observa una respuesta dosis dependiente ya que a medida que las concentraciones se incrementan el daño aumenta y a la vez se puede ver una diferencia significativa entre todas las dosis probadas con respecto al control
  • Los triterpenos naturales mas estudiados son: el ac. Ursólico y el ac. Aleanólico los cuales han demostrado tener propiedades como antiinflamatorio, antiviral, anti- tumoral, citostático, hipoglicémico, antihistaminico, hepatoprotector, diurético, anti-ulcera, inmunomodelador e inmunoestimulador y sedante
  • Estudio GenotóXico De La Argentatina B, 1.1

    1. 1. Autora: María Isabel Ramírez Orellana UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA La Universidad Católica de Loja Escuela de Bioquímica y Farmacia Directora de Tesis: Dra. Natalia Bailón M.
    2. 2. Asociación Argentina del Cáncer, 2002
    3. 3. Provincia de Loja Garrido, 2003
    4. 4. Villalva, 2004
    5. 5. <ul><li>Procesos Quirúrgicos </li></ul><ul><li>Radiación </li></ul><ul><li>Quimioterapia Sistémica </li></ul>ANTINEOPLASICOS
    6. 6. <ul><li>Compuestos de origen natural particularmente drogas y extractos han resultado ser de gran utilidad para desarrollar numerosos fármacos. </li></ul><ul><li>Los más estudiados son: </li></ul><ul><ul><li>Alcaloides de la vinca </li></ul></ul><ul><ul><li>Epipodofilotoxinas </li></ul></ul><ul><ul><li>Taxanos </li></ul></ul><ul><ul><li>Camptotecinas. (Laza et al. 2003; Balunas, Kinghorn 2005) </li></ul></ul><ul><ul><li>Actualmente = Triterpenos (ácido ursólico y oleanólico) </li></ul></ul>
    7. 7. Familia : Asteraceae Subfamilia: Asteroideae Genero: Parthenium Especies: Parthenium argentatum Desecho resinoso Argentatina A , B y C Parra, 2006
    8. 8. <ul><li>Citotóxico (K562, MCF-7, HCT-15, PC3,U251) </li></ul><ul><li>Citostática </li></ul><ul><li>Inhibidor del receptor del estradiol </li></ul><ul><li>No genotóxico (CBMn) </li></ul>Parra, 2006
    9. 9. <ul><li>Es una técnica sensible y rápida para el análisis de daño directo al DNA, en células individuales </li></ul>
    10. 10. Daño oxidativo E ntrecruzamientos Rotura de simple y doble cadena
    11. 11. <ul><li>GENERAL: </li></ul><ul><li>Evaluar el efecto genotóxico in vitro de la Argentatina B en cultivo de linfocitos humanos de sangre periférica </li></ul><ul><li>   </li></ul><ul><li>ESPECIFICOS: </li></ul><ul><li>Establecer las dosis subtóxicas a probar en el ensayo genotóxico. </li></ul><ul><li>  </li></ul><ul><li>Evaluar el efecto genotóxico de la Argentatina B en función al tamaño de cola de linfocitos humanos tratados in vitro mediante el Ensayo Cometa </li></ul>
    12. 12. Siembra Obtención – muestra Incubamos 48 h Tratamiento Ag B (5, 15, 25uM) EMS 0.1uM, DMSO 0.5% Preparación de Placas Electroforesis Neutralización Tinción (BrEt) Análisis Incubamos 24 h Materiales y Métodos Viabilidad
    13. 13. <ul><li>Viabilidad EMS </li></ul>Grafica No. 3.1 Porcentaje de viabilidad de linfocitos humanos tratados con Etilmetanosulfonato (0.05, 0.075 y 0.1 uM) Cada barra representa la media de tres experimentos por duplicado de tres donadores diferentes. ( ● p < 0.0001)
    14. 14. Grafica No. 3.2 Porcentaje de viabilidad de linfocitos humanos tratados con Argentatina B (5, 15 y 25 uM) y EMS a 0.1 uM Cada barra representa la media de tres experimentos por duplicado de tres donadores diferentes. ( ♦ p < 0.0001; ● p < 0.002)
    15. 15. Grafico No. 3.3 . Efecto de la actividad genotóxica del Etilmetanosulfonato, usando como referencia el largo de cola en linfocitos humanos ( ● p < 0.0001)
    16. 16. Largo de Cola con Argentatina B Grafica No. 3.5 Efecto genotóxico de diferentes dosis de Argentatina B en Linfocitos humanos. Cada barra representa la media de tres experimentos por duplicado de tres donadores diferentes. ( ● p < 0.0001)
    17. 17. <ul><li>Las concentraciones usadas de Argentatina B (5, 15 y 25uM) no afecta la viabilidad de los linfocitos humanos, ya que presento un supervivencia mayor al 70%. </li></ul><ul><li>  </li></ul><ul><li>Se observo un efecto genotóxico dosis dependiente de la Argentatina B, ya que a medida que se aumentan las concentraciones de la misma se aumenta la migración del ADN (tamaño de Cola) en los linfocitos. </li></ul>
    18. 18. <ul><li>GRACIAS </li></ul>
    19. 19. <ul><li>ácido ursólico y el ácido oleanólico </li></ul>Uncaria tomentosa (Uña de Gato)

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