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  • 1. Universidad Técnica Particular de Loja
    Evaluación de la actividad genotóxica del extracto metanólico de Gynosis verrucosa mediante el ensayo Micronúcleos con bloqueo de Citocinesis en la línea celular Astrocitoma cerebral (D-384).
    Diana J. Herrera Torres
    Director:
    Dr. Natalia Bailón M.
  • 2. DEFINICIÓN
    El cáncer se caracteriza por un crecimiento incontrolado y la propagación de células anormales
    La carcinogénesis, requiere varios año, involucra mutaciones y varias causas
    La muerte por cáncer en 2007 fueron 7.6 millones
    Macdonald F. et al ,2004
  • 3. INCIDENCIA
    pulmón, próstata, colon y recto .
    Pulmón, mama, colon y recto
    Mujeres: mama y cérvix (cuello uterino).
    Hombres: próstata y estómago.
    En 1997 al 2002
    Hombres: Estómago, próstata, S. hematopoyético
    Mujeres: cérvix invasor, mama, piel, estomago
  • 4. AgentesAnticancerígenos
    Desde décadas atrás se han utilizado los principios de origen vegetal, y se viene realizando el aislamiento y caracterización de numerosos principios activos de los cuales se han desarrollado nuevos fármacos.
    Estos provienen de plantas comúnmente de uso clínico.
    Cuatro clases
    1. Alcaloides de la Vinca
    3. Taxanos
    Taxusbrevifolia
    4.Camptotecinas
    Catharanthusroseus
    2.Epipodofilotoxinas
    Podophyllumpeltatum
    Camptotecinacuminata
  • 5. PRODUCTOS DE ORIGEN VEGETAL
    En la provincia de Loja y Zamora Chinchipe, elaboran remedios caseros con familias: Asteraceae, Lamiaceae, Solanaceae, Fabaceae, Onagraceae y Apiaceae, por sus propiedades curativas.
    Gynoxis verrucosa, propiedades curativas: presión sanguínea baja, depresión psicológica, problemas visuales, respiratorios y como sedante para cólicos.
    Del extracto de G. verrucosa se han aislados lactonas sesquiterpénicas: dehidroleucodina 1,10-epoxy-2-hidroxikauniolida; al igual que compuestos derivados del ácido bisabolánico.
    El extracto de G. verrucosa efecto citostático a <10ug/ml.
    IC50 = 22,06 ± 10,7ug/ml
  • 6. Micronúcleos con bloqueo de citocinesis (CBMN)
    El análisis de MN es usado como una prueba de genotóxicidad y para biomonitoreo de exposición a genotóxicos y sus efectos en humanos.
    Los MN se forman por ruptura directa del ADN
    Posibles destinos a la exposición citotóxicos o agentes genotóxicos
    Posible medir la frecuencia del rotura de cromosomas (MN), la pérdida del cromosoma (MN), la reorganización del cromosoma, cromosomas dicéntricos (NPB), amplificación de genes (NBUDs), la necrosis y apoptosis.
  • 7. Objetivo General
    Evaluar la actividad genotóxica del extracto metanólico de Gynoxis verrucosa mediante el ensayo CBMN en la línea celular Astrocitoma cerebral (D384).
  • 8. ObjetivosEspecíficos
    • Establecer el efecto citostático mediante Índice de División Nuclear en la línea celular Astrocitoma cerebral (D384).
    • 9. Establecer el efecto genotóxico mediante la evaluación de Micronúcleos en la línea celular Astrocitoma cerebral (D384).
  • 24 Horas
    24 Horas
    Tratamiento
    Siembra
    Cultivar células D-384
    24 Horas
    24 Horas
    24 Horas
    Tinción
    Cosecha
    Evaluación
    MATERIALES Y METODOS
  • 10. MATERIALES Y METODOS
  • 11. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
    Se utilizó la cinética de proliferación celular (CPC), para lo cual se evaluó la proporción de células mono (M), bi (B), o polinucleadas (P).
  • 12. El índice mitótico se basa en el grado de proliferación celular como respuesta a la presencia de un agente externo y se define como el porcentaje de células que contiene cromosomas condensados en una etapa del ciclo celular, la mitosis
  • 13. INDICE DE DIVISION NUCLEAR
    Figura 3.2.Índice de división nuclear calculado para línea celular D-384 tratadas con G. verrucosa. MMC como C. positivo y DMSO como C. negativo. Cada barra representa la media ± EE de tres experimentos independientes por duplicado. Usamos T. de DUNETT. *** P<0.00001; **P< 0.00002; *P<0.00003
  • 14. El extracto G. verrucosa, tiene un efecto citostático a partir 10ug/ml de células CHO-K1.
    Antineoplásicos como el Carboplatino (5 ug/ml).
    En el tamoxifeno,utilizado en 2 líneas celulares [MCF-7, MDA-MB468]
    Podemos establecer que el efecto citotóxico o cistostático puede variar dependiendo de la naturaleza del estudio.
  • 15. FRECUENCIA DE MICRONUCLEOS
    Figura 3.3. Efecto genotóxico, en las células D384, expuestos a diferentes concentraciones de G. verrucosa. Se empleó como control positivo MMC 1 μM. Los resultados son de tres experimentos independientes que se realizaron por duplicado. Usamos T. de DUNETT. *P> 0,00001.
  • 16. Se conoce el incremento de la frecuencia de MN se observa a partir de 1ug/ml en linfocitos humanos CBN
    Puede incrementar el daño al ADN a partir de 0.01 ug/ml, medido mediante el ensayo cometa.
  • 17. Conclusiones
    • Las concentraciones que se probo con el extracto metanólico de Gynoxis verrucosa no tiene un efecto citostático en la línea celular de Astrocitoma cerebral D-384 evaluadas mediante el índice de división nuclear.
    • 18. El extracto metanólico de Gynoxis verrucosa produce un daño significativo a las concentraciones probadas de 10, 20, 25ug/ml en la línea celular de Astrocitoma cerebral D-384 evaluadas mediante el conteo de células binucleadas.
  • GRACIAS
  • 19. Macdonald F. et al ,2004