Your SlideShare is downloading. ×
0
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Medios de cultivo
Upcoming SlideShare
Loading in...5
×

Thanks for flagging this SlideShare!

Oops! An error has occurred.

×
Saving this for later? Get the SlideShare app to save on your phone or tablet. Read anywhere, anytime – even offline.
Text the download link to your phone
Standard text messaging rates apply

Medios de cultivo

9,043

Published on

0 Comments
3 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

No Downloads
Views
Total Views
9,043
On Slideshare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
1
Actions
Shares
0
Downloads
0
Comments
0
Likes
3
Embeds 0
No embeds

Report content
Flagged as inappropriate Flag as inappropriate
Flag as inappropriate

Select your reason for flagging this presentation as inappropriate.

Cancel
No notes for slide

Transcript

  • 1. Medios de Cultivo Técnicas de Cultivo Celular
  • 2. Medio definidoDesarrollo de medios Medios naturales extractos de tejidos, fluidos corporales suero, linfa Líneas celulares-medios químicamente definidos Eagles Basal Medium 1955 Eagles minimal Essential Medium MEM 1959 Medios suplementados suero, proteínas, extracto de embrión
  • 3. Medios definidos Medios especializados–tipos de células RPMI1640 limfoblastoides Leibovitz L15 elimina añadir CO2 y NaHCO3
  • 4. Tipos de medio de cultivo Definidos (sin suero): compuesto por elementos cuya composición química y concentración están perfectamente determinados. Medio solo o con agregados de formulaciones especiales. MEM: medio esencial mínimo, 27 factores esenciales para el crecimiento celular. DMEM: medio esencial mínimo modificado. HamF12: MEM + albúmina, transferrina, insulina y piruvato de sodio
  • 5. Tipos de medio de Cultivo No definidos (con suero o hidrolizados proteicos): tienen componentes cuya composición química y concentración no están determinados. Medios de mantenimiento: células con metabolismo basal (MEM + 2% de suero) Medios de crecimiento: activación del ciclo celular (MEM + 10% de suero)
  • 6. Medio definido y suplementado El medio de cultivo estará formado por cuatro elementos : La naturaleza del sustrato o fase en que crecen las células. Las condiciones físico-químicas y fisiológicas del medio. La naturaleza y composición de la fase gaseosa. Las condiciones de incubación, especialmente la humedad y la temperatura
  • 7. Propiedades Fisicoquímicas pH CO2 y Bicarbonato Amortiguadores Oxigeno Osmolaridad Temperatura Viscosidad Tensión superficial
  • 8. Propiedades FisicoquímicaspH Líneas celulares pH 7.4 Líneas fibroblasto pH 7.4 - 7.7 Líneas células transformadas pH 7.0-7.4 Células epidermales pH 5.5
  • 9. Propiedades FisicoquimicaspH Indicador de pH Rojo fenol Color apreciación subjetiva Sistema de estándares Concentración, botella, espacio de aire
  • 10. CO2 y Bicarbonato El bióxido de carbono juega un papel en el medio, debido a que influye en la cantidad de CO2 disuelto, el pH y la cantidad de iones HCO3-
  • 11. CO2 y Bicarbonato CO2 en fase gas se disuelve en el medio establece equilibrio con HCO3- La tensión superficial del CO2 regula la concentración del CO2 disuelta y produce H2CO3 H2O + CO2 <=> H2CO3 <=> H+ + HCO3-
  • 12. CO2 y Bicarbonato Ión bicarbonato HCO3- Aumento en CO2 atmosférico, baja el pH y es neutralizado por aumento en bicarbonato. NaHCO3 Na+ + HCO3-
  • 13. CO2 y Bicarbonato Para establecer un pH determinado se debe tener en cuenta especialmente los niveles de bicarbonato sódico y la tensión de CO2. Cada medio tiene una concentración recomendada de bicarbonato y tensión de CO2 para alcanzar el pH correcto
  • 14. CO2 y Bicarbonato Se emplean amortiguadores en la formulación de muchos medios en la actualidad, lo que permite una estabilidad superior del pH en el medio, así como una mayor capacidad amortiguadora Goods buffers : HEPES, Tricina,.. (Good et al., 1966)).
  • 15. Fase gaseosa Fase líquida Dióxido de ión bicarbonato HEPES carbono atmosférico 4 mM 10 mM 2% 8 mM 20 mM 5% 24 mM 50 mM
  • 16. Amortiguadores Se requieren en: platos abiertos, sobrepoblación de células transformadas Más utilizado ión bicarbonato baja toxicidad bajo costo beneficios nutricionales HEPES amortiguador fuerte a pH 7.2-7.4
  • 17. Oxígeno Células en cultivo principalmente glucólisis Tensión de O2 evita toxicidad Cultivos de órgano, embriones y células adultas requieren 95% en fase gaseosa Cultivos de células dispersas requieren concentraciones más bajas
  • 18. Osmolaridad Cultivos toleran un gran alcance de presión osmótica Osmolaridad 260-320mosmol/Kg. mayoría de las células Adición de HEPES y drogas pueden afectar osmolaridad
  • 19. Temperatura Depende del cuerpo de origen 37oC homeotérmicos, 38.5 pájaros Poiquilotérmicos 15-26 oC Líneas mutantes sensitivas a temperatura Afecta crecimiento, pH y solubilidad de CO2
  • 20. Viscosidad Influenciada por el suero Importante en disociación celular
  • 21. Tensión de superficie Denaturación de proteínas puede aumentar la tensión y ocasionar riesgos de contaminación
  • 22. Composición del medio Todo medio de cultivo está formado por los siguientes elementos : Soluciones salinas equilibradas (BSS) Aminoácidos Vitaminas Otros suplementos orgánicos de bajo peso molecular Hormonas y factores de crecimiento (suero). Inhibidores del crecimiento de los contaminantes (antibióticos y antifúngisidas)
  • 23. Soluciones salinas equilibradas (BSS) Es una mezcla de sales inorgánicas, incluyendo usualmente bicarbonato sódico, y suplementada con glucosa. Se usan para diluir medios más completos, o para incubaciones cortas que requieren un medio isotónico no completo nutricionalmente.
  • 24. Medio Completo Medio definido y suplementos como suero, factores de crecimiento y hormonas Medio definido amino ácido, vitaminas, sales, glucosa, suplementos orgánicos
  • 25. Medio Completo Suero factores de crecimiento proliferación factores de adhesión adhesión celular minerales lípidos hormonas
  • 26. Medios Completo Antibióticos Reducen la contaminación No incluido en la mayoría de los medios Desventajas: resistencias, micoplasma efectos anti-metabólicos

×