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OBJETIVOS
 Facilitar     el crecimiento y el aislamiento de las bacterias                  presentes en una muestra clínica.   Det...
DEFINICIÓN Sustrato sólido, líquido o semisólido que contienetodos los nutrientes necesarios para el crecimiento ydesarro...
Es importante destacar que la transición exitosa de un microorganismo invivo a un ambiente in vitro va a depender de:   Di...
SÓLIDOS    LÍQUIDOS               SEMISÓLIDOS Clasificación de los mediosde cultivo según consistencia
semisólido
Caldo nutritivoCaldos de enriquecimientoCaldos revitalizadores
Enriquecimiento    Nutritivo                Selectivo y                diferencialClasificación de los mediosde cultivo se...
MEDIOS NUTRITIVOSContienen nutrientes quefavorecen el desarrollo de lamayoría de losmicroorganismos sinrequerimientos espe...
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO
MEDIOS SELECTIVOS  Contienen uno o más agentes que inhiben el  crecimiento de los microorganismos que no se  quieren estud...
MEDIOS DIFERENCIALESContienen un factor o factores que permite que las   colonias de una especie o un tipo bacteriano exhi...
MEDIOS ESPECIALES    MEDIOS    CROMÓGENOS    MEDIOS DE    TRANSPORTE    MEDIOS DE    CONSERVACIÓN
Sustancias cromogénicas:       - Son productos químicos de síntesis que sonincoloros cuando se unen a sustratos naturales ...
Medios para bacterias no exigentes      - agar      - extracto de carne      - peptona      - NACL      - leche descremada...
CONTROL DE CALIDAD El Control de Calidad en la preparación y evaluación delos medios de cultivo es considerado como una e...
▪ Recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés(Productividad)          ▪ Inhibición o suspensión de los ...
CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA CALIDADDE LOS MEDIOS DE CULTIVOS PREPARADOS.Se evalúa utilizando criterios objetivos del med...
PRUEBAS FUNCIONAMIENTO Para evaluar cada lote de medio de cultivo que searecibido en el laboratorio, se emplean cepas pat...
RECONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE                     CULTIVO                  DESHIDRATADO• Cumplir con las instrucciones de pr...
AGAR INFUSION DE CARNE
MEDIO DE LOWENSTEIN JENSEN
AGAR SANGRE
ERRORES EN LA PREPARACIÓN    Apelmazamiento del producto deshidratado DEFECTO   El envase no fue cerrado correctamente d...
Aparición de turbiedad o precipitados: El medio preparado perdió agua por evaporación El medio se calentó en exceso El ...
El gel se obtiene más blando que lo característico para elmedio: No fue garantizada la disolución total del agar durante ...
El crecimiento de los microorganismos es atípico: Quedaron  residuos de sustancias inhibidoras delcrecimiento no deseable...
ES, POR LO TANTO, MUY IMPORTANTEQUE EL TECNÓLOGO MÉDICO SEA QUIEN  SUPERVISE Y CONTROLE TODOS LOS    FACTORES NECESARIOS E...
Microbiología, Prescott´s
Microbiología, Prescott´s
Los métodos de siembra se utilizanpara inocular por distintos métodossobre un medio de cultivo apropiadouna     muestra   ...
I. Siembra con rastrilloII. Siembra con asa de cultivo- Diseminación en superficie- Agotamiento en superficie- Tubos en su...
Figura 12: Siembra con rastrilloManual de microbiología 2011, U. Mayor
Figura 13: Siembra de diseminación ensuperficieManual de microbiología 2011, U Mayor
Figura 14: Siembra semi-cuantitativa deagotamiento en superficie.Manual de microbiología 2011, U Mayor
Figura 15: Siembra de tubo en superficie.Manual de microbiología 2011, U Mayor
Figura 16: Siembra de tubo profundidad.Manual de microbiología 2011, U Mayor
 Pared celular bacteria gram positiva y gram negativa      Gram positiva   Gram negativa
Gram negativa                de Braun
Gram positiva
1 minuto      1 minutoDecolorar                30con alcohol- 15segund    segundoacetona      os          s
DIRECTOSPrimera aproximaciónal posible diagnósticoTécnicas rápidas ybaratasDiagnósticos rápidosy certeros
EXAMEN AL FRESCO  MATERIA GENITALSecreción      Semen,      Orina devaginal y/o   secreción     primer  uretral     prostá...
LEVADURASBACTERIASCLUE CELLSLEUCOCITOSTRICHOMONAS
Medios de cultivo, métodos de siembra
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  1. 1. OBJETIVOS
  2. 2.  Facilitar el crecimiento y el aislamiento de las bacterias presentes en una muestra clínica.  Determinar qué bacterias entre las que se desarrollan tienen más probabilidades de ser las causantes de la infección y cuales son sus posibles contaminantes o colonizadores.  Obtener un desarrollo suficiente de las bacterias de importancia clínica para permitir su identificación y su caracterización. CULTIVO PURO CULTIVO MIXTO CULTIVO CONTAMINADO
  3. 3. DEFINICIÓN Sustrato sólido, líquido o semisólido que contienetodos los nutrientes necesarios para el crecimiento ydesarrollo de los gérmenes. Fuentes de energía, carbono, nitrógeno, fósforo,azufre y varios minerales. pHLuzTemperatura Esterilidad absoluta (salvo excepciones) Recipientes adecuados
  4. 4. Es importante destacar que la transición exitosa de un microorganismo invivo a un ambiente in vitro va a depender de: Disponibilidad de nutrientes esenciales Condiciones ambientales adecuadas pH Temperatura Oxígeno y CO2 Presión Luz
  5. 5. SÓLIDOS LÍQUIDOS SEMISÓLIDOS Clasificación de los mediosde cultivo según consistencia
  6. 6. semisólido
  7. 7. Caldo nutritivoCaldos de enriquecimientoCaldos revitalizadores
  8. 8. Enriquecimiento Nutritivo Selectivo y diferencialClasificación de los mediosde cultivo según utilización
  9. 9. MEDIOS NUTRITIVOSContienen nutrientes quefavorecen el desarrollo de lamayoría de losmicroorganismos sinrequerimientos especiales decultivo. No promueven el crecimiento de ningún agente en particular
  10. 10. MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO
  11. 11. MEDIOS SELECTIVOS Contienen uno o más agentes que inhiben el crecimiento de los microorganismos que no se quieren estudiar Agentes inhibidores: colorantes, sales biliares, alcoholes, ácidos y antibióticos
  12. 12. MEDIOS DIFERENCIALESContienen un factor o factores que permite que las colonias de una especie o un tipo bacteriano exhiban ciertas características metabólicas o decultivo que puedan utilizarse para diferenciarlas de otras bacterias que crecen en el mismo agar
  13. 13. MEDIOS ESPECIALES MEDIOS CROMÓGENOS MEDIOS DE TRANSPORTE MEDIOS DE CONSERVACIÓN
  14. 14. Sustancias cromogénicas: - Son productos químicos de síntesis que sonincoloros cuando se unen a sustratos naturales por enlacesque son hidrolizados por enzimas microbianas específicas. - Cuando la enzima microbiana hidroliza el enlace, selibera el compuesto cromogénico, que adquiere un colorintenso. - Ejemplo: Cromo agar (agentes uropatógenos), sepone en evidencia la actividad enzimática de la B-glucoronidasa o B- galactosidasa de las bacteriasformándose colonias de diferentes colonias según la especie. - Identificación presuntiva, haciendo innecesaria larealización de pruebas bioquímicas.
  15. 15. Medios para bacterias no exigentes - agar - extracto de carne - peptona - NACL - leche descremada (congelar cepas) NORMATIVA ISP, entregar
  16. 16. CONTROL DE CALIDAD El Control de Calidad en la preparación y evaluación delos medios de cultivo es considerado como una esencialy buena práctica de laboratorio, necesaria para mantenerel nivel y la ejecución de cualquier técnica microbiológica.Proceso continuo que se extiende desde las materiasprimas ; a través del productor hasta el producto finalutilizado en los diferentes departamentos de análisis ydiagnóstico microbiológico.
  17. 17. ▪ Recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés(Productividad) ▪ Inhibición o suspensión de los microorganismos no deseados. (Selectividad) Propiedades bioquímicas (diferenciales y diagnósticas) Propiedades físicas (por ejemplo, pH, Volumen) Sea estéril .... etc. El Jefe inmediato responsable del área * Deberá analizar mensualmente los resultados de las pruebasrealizadas por el responsable del departamento de control de calidad * Evaluará el cumplimiento de objetivos a través de los resultados
  18. 18. CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA CALIDADDE LOS MEDIOS DE CULTIVOS PREPARADOS.Se evalúa utilizando criterios objetivos del medio respecto a: La recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés La inhibición o supresión de los microorganismos no deseados tiene que ser cuantitativa Los atributos ( por ejemplo: Propiedades físicas y bioquímicas) Rajadura del plato o envase Variaciones en el volumen del medio Hemólisis Cristales en el medio Presencia de burbujas Presencia de coágulos Cambio de color normal Contaminación Falla en la inhibición de microorganismos saprofitos Esterilidad
  19. 19. PRUEBAS FUNCIONAMIENTO Para evaluar cada lote de medio de cultivo que searecibido en el laboratorio, se emplean cepas patrones(ATCC) de varios géneros y especies de acuerdo almedio de cultivo a analizar. El control del funcionamiento consistirá encomprobar:  capacidad del medio de recuperar un bajo número de los microorganismos más sensibles para los que ha sido preparado.  capacidad de inhibir un alto número de los microorganismos que deben ser inhibidos en caso de los medios selectivos y diferenciar los microorganismos para los que ha sido diseñado en caso de los medios diferenciales.
  20. 20. RECONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO DESHIDRATADO• Cumplir con las instrucciones de preparación del medio de cultivoindicado en la etiqueta del envase• Cumplir con los procedimientos técnicos de fórmulas enviadas por elcliente• Utilizar agua destilada de calidad• Determinar el pH del M de C• Esterilización del medio de cultivo• Procedimiento escrito• Control de esterilidad del Medio de Cultivo
  21. 21. AGAR INFUSION DE CARNE
  22. 22. MEDIO DE LOWENSTEIN JENSEN
  23. 23. AGAR SANGRE
  24. 24. ERRORES EN LA PREPARACIÓN Apelmazamiento del producto deshidratado DEFECTO  El envase no fue cerrado correctamente después de su uso.  El envase permaneció abierto por largo rato. Apelmazamiento del  El producto sobrepasó la fecha de vencimiento. Producto deshidratado El valor de pH no coincide con el indicado • No fue empleada agua destilada • El medio fue sobrecalentado durante su preparación • El Phde pH no coincide El valor no fue determinado correctamente • El el indicado Con medio estaba vencido.
  25. 25. Aparición de turbiedad o precipitados: El medio preparado perdió agua por evaporación El medio se calentó en exceso El medio no se calentó lo suficiente. No fue empleada la cantidad del medio o suplemento recomendada.El color del medio no coincide con el indicado: El medio fue sobrecalentado durante su preparación. El pH no fue ajustado correctamente. El recipiente empleado estaba sucio. Los azúcares contenidos en el medio se caramelizaron
  26. 26. El gel se obtiene más blando que lo característico para elmedio: No fue garantizada la disolución total del agar durante la preparacióndel medio. No fue empleada la cantidad del medio recomendada o se añadió aguaen exceso.El crecimiento de los microorganismos espobre: El medio fue sobrecalentado El valor del pH no fue ajustado correctamente. La adición de suplementos al medio se efectuó a excesiva temperatura. El medio no fue mezclado correctamente.
  27. 27. El crecimiento de los microorganismos es atípico: Quedaron residuos de sustancias inhibidoras delcrecimiento no deseables, en los recipientes donde sepreparó o distribuyó el medio. El medio de cultivo fue preparado de manera incorrecta. El producto sobrepasa la fecha de vencimiento.
  28. 28. ES, POR LO TANTO, MUY IMPORTANTEQUE EL TECNÓLOGO MÉDICO SEA QUIEN SUPERVISE Y CONTROLE TODOS LOS FACTORES NECESARIOS EN LAPREPARACIÓN Y CONSERVACIÓN DE LOSMEDIOS DE CULTIVO, PARA ASÍ LOGRAR AISLAR E IDENTIFICAR CON EXCELENCIA LOS DISTINTOS AGENTES MICROBIANOS.
  29. 29. Microbiología, Prescott´s
  30. 30. Microbiología, Prescott´s
  31. 31. Los métodos de siembra se utilizanpara inocular por distintos métodossobre un medio de cultivo apropiadouna muestra que contengabacterias con el fin de reproducirlaspara aumentar el número deindividuos de la población y formarcolonias en el caso de mediossólidos.
  32. 32. I. Siembra con rastrilloII. Siembra con asa de cultivo- Diseminación en superficie- Agotamiento en superficie- Tubos en superficie- Tubos en profundidad o picadaIII. Siembra con tórula
  33. 33. Figura 12: Siembra con rastrilloManual de microbiología 2011, U. Mayor
  34. 34. Figura 13: Siembra de diseminación ensuperficieManual de microbiología 2011, U Mayor
  35. 35. Figura 14: Siembra semi-cuantitativa deagotamiento en superficie.Manual de microbiología 2011, U Mayor
  36. 36. Figura 15: Siembra de tubo en superficie.Manual de microbiología 2011, U Mayor
  37. 37. Figura 16: Siembra de tubo profundidad.Manual de microbiología 2011, U Mayor
  38. 38.  Pared celular bacteria gram positiva y gram negativa Gram positiva Gram negativa
  39. 39. Gram negativa de Braun
  40. 40. Gram positiva
  41. 41. 1 minuto 1 minutoDecolorar 30con alcohol- 15segund segundoacetona os s
  42. 42. DIRECTOSPrimera aproximaciónal posible diagnósticoTécnicas rápidas ybaratasDiagnósticos rápidosy certeros
  43. 43. EXAMEN AL FRESCO MATERIA GENITALSecreción Semen, Orina devaginal y/o secreción primer uretral prostática chorro
  44. 44. LEVADURASBACTERIASCLUE CELLSLEUCOCITOSTRICHOMONAS
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