Extraccion de caseina de la leche p3
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Extraccion de caseina de la leche p3

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  • 1. Extraccion de Caseina de la leche, hidrolisis y analisis de aminoacidos por cromatografía 1. Objetivo de la pratica: Extracion de la caseína de la leche descremada y análisis de sus aminoácidos. 2. Estructura,propiedades y usos de la caseína: Las caseínas es un conjunto heterogéneo de proteínas por lo que es difícil fijar una definición. Sin embargo, todas las proteínas englobadas en lo que se denomina caseína tienen una característica común: precipitan cuando se acidifica la leche a pH 4,6. Por ello, a la caseína también se le suele denominar proteína insoluble de la leche. Por otra parte, y aunque las proteínas que se denominan caseínas son específicas de cada especie, se clasifican en los siguientes grandes grupos de acuerdo con su movilidad electroforética: αs1-caseína, αs2-caseína, β-caseína y κ- caseína (véase la Figura 1). Figura 1 Figura 2
  • 2. Parte ExperimentalA. Extracción de la caseína3. Diagrama de proceso Extracción de la caseína Leche pura vida V=100ml 1. Preparación de la Muestra i) Calentar a 40 °C y añadir gota a gota acido Acético al 10% y agitar mientras se añade. ii) Dejar reposar para observar la precipitación de la caseína. iii) Filtración al vacío Solvente Orgánico iv) Secado a 40°C por 30min Caseína impura 2. Extracción Solido-Liquido i) Añadir 15ml de n-hexano y agitar por 10min, repetir el procedimiento 2 veces Solución de ii) Filtración al vacío n-hexano Caseína desengrasada húmeda 3.secado de la caseína i. Secar la caseina al aire durante uno o dos días y luego pesarla. Caseina W=32 g
  • 3. 4. Resultados experimentales i. Precipitación de la caseína y punto isoeléctrico Características(marca, densidad) de la materia prima. Observaciones experimentales y comentarios. Se obtuvo un precipitado en forma de gránulos de color blanco. El punto isoeléctrico de la caseína es de pH=4,6. Tabla1:características de la leche usada Marca de la leche Densidad(g/ml) Pura vida UHT 1,03 ii. Peso y características del producto obtenido Se obtuvo un precipitado en forma de granulos de color blanco. Donde el peso obtenido fue de :Wf=32g iii. Rendimiento del proceso A la caseína se le denomina como proteína insoluble de la leche, entonces el peso que se obtendrá sera el peso únicamente de la caseina. Se trabajo con un volumen de 400ml ,usando la densidad de la leche que es 1,03 g/ml entonces el peso de caseina iniciales: Wi=100*1,03=103g Como el peso final es :Wf=32g Hallando el rendimiento: %R=WF/WI*100%=32/103*100%=32%B. Hidrolisis de la caseína5. Observaciones experimentales Variables en el uso carbón activo(cantidad,temperatura y tiempo de disolución). Tabla2:variables en el uso de carbón activado Cantidad(g) Temperatura Tiempo(min) 0.5 Reflujo 10
  • 4. 6. Ecuacion de la Hidrolisis.Mecanismo de la reacción La ecuación de la hidrolisis es la siguiente:7. Test de Biuret Proponga la ecuación de la reacción que se produce. Caseina + NaOH + CuSO4 ------> + Na2SO4 Complejo de color azulC. Análisis cromatografico de aminoácidos8. Resultados experimentales i. Características de la placa,eluente,revelador,Rf y patrones usados. Placa: La placa es papel filtro que esta hecho de celulosa el cual posee propiedades adsorbentes.Esto significa que unas sustancias son adsorbidas más que otras y, por consiguiente, la liberación de las sustancias de las manchas variará de una sustancia a otra. Esto contribuye de nuevo a la separación. Mientras que se va realizando el cromatograma, las sustancias mas fuertemente adsorvidas se van quedando atrás, mientras que las adsorvidas con menos fuerza avanzan hacia el frente. Eluente: el eluente usado fue una solución de n-butanol, ac.acetico y agua en la proproporción 5,1 y 2 respectivamente. Revelador: el revelador fue el calor de la estufa. Patrones usados: los patrones usados fueron: Metanol Cisterina Quercetina
  • 5. Rutina Listina Sergerina ii. Ilustracion de las placas cromatograficas desarrolladas. Figura 3 Donde: P1,P2,P3 Y P4 son los patrones usados. M es la muestra. 9. Revelado con Ninhidrina(de aminoácidos presentes) i. Ecuación de la reacción, tome como ejemplo uno de los aminoácidos. ii. Mecanismo de la reacción.CuestionarioP1. Procedimiento alternativo de Extraccion de la caseína. Trabajobibliográfico i. Cite otro texto de química organica experimental, diferente a Pavia et al.-1978 o Rendina-1974, en el cual se presenta la “ extracion de la caseína” y adjunte la fotocopia respectiva(como anexo).
  • 6. ii. Proponga el diagrama del proceso respectivo(en paralelo con el realizado en su Pract. Lab,Sec. A3)iii. Señale las diferencias mas importantes entre ambos procedimientos.P2.Enzima y Hormonas: i. Enzimas.definicion y ejemplos(2). Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas, siempre que sean termodinámicamente posibles: Una enzima hace que una reacción química que es energéticamente posible pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinéticamente favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. En estas reacciones, las enzimas actúan sobre unas moléculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en moléculas diferentes denominadas productos. Casi todos los procesos en las células necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimáticas. A continuación se indican 2 enzimas: Miosina: Al hidrolizar la ATP genera la contracción muscular. Amilasas: Es capaz de degradar moléculas grandes (almidón o proteínas, respectivamente) en otras más pequeñas, de forma que puedan ser absorbidas en el intestino. ii. Hormonas. Definición y ejemplo(2) Las hormonas son sustancias secretadas por células especializadas, localizadas en glándulas de secreción interna o glándulas endocrinas (carentes de conductos), o también por células epiteliales e intersticiales con el fin de afectar la función de otras células. También hay hormonas que actúan sobre la misma célula que las sintetizas (autocrinas). Hay algunas hormonas animales y hormonas vegetales como las auxinas, ácido abscísico, citoquinina, giberelina y el etileno. A continuación se indican 2 hormonas:
  • 7. Dopamina: Aumento del ritmo cardíaco y de la presión arterial inhibe la liberación de prolactina y hormona liberadora de tirotropina. Péptido natriurético auricular: Regula el balance de agua y electrolitos, reduce la presión sanguínea.P3. Precipitacion de proteínas i. Punto isoeléctrico. Definición. Relación con la solubilidad. Cual es el punto isoeléctrico de la caseína? El punto isoeléctrico es el pH al que una sustancia anfótera tiene carga neta cero. El concepto es particularmente interesante en los aminoácidos y también en las proteínas. A este valor de pH la solubilidad de la sustancia es casi nula. Para calcularlo se deben utilizar los pKa. Está relacionado con la solubilidad debido que al alcanzar el punto isoeléctrico comienza la precipitación. El punto isoeléctrico de la caseína es de pH=4,6. ii. Cuál es la propiedad más importante a tener presente durante la precipitación de una proteína (p.ej. caseína) y ejemplo La propiedad mas importantes es la medida del pH, debido que si no se llega a un pH adecuado la precipitación nunca ocurrirá. Para el caso de la caseina se necesita un pH=4,6 para que comienze la precipitación.iii. ¿Porque es importante llegar al punto isoeléctrico en la precipitación de la caseína? Se debe de llegar al punto isoeléctrico para poder disolver el fosfato de calcio ,asi al tener disuelto todo el fosfato comenzara la precipitación de la caseina.
  • 8. P4. Desnaturalización de proteínas. Definición y proceso. La desnaturalización es un cambio estructural de las proteínas o ácidos nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su óptimo funcionamiento y a veces también cambian sus propiedades físico-químicas. Los agentes que provocan la desnaturalización de una proteína se llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes físicos (calor) y químicos (detergentes, disolventes orgánicos, pH, fuerza iónica). Como en algunos casos el fenómeno de la desnaturalización es reversible, es posible precipitar proteínas de manera selectiva mediante cambios en: La polaridad del disolvente. La fuerza iónica. El pH. La temperatura.Bibliografía:[1].http://www.fao.org/docrep/010/ah833s/AH833S17.htm[2].http://es.wikipedia.org/wiki/Punto_isoeléctrico[3].http://www.demochem.de/D-Biuret-e.htm