0
PPARg KD i 3T3-L1 celler
Problem <ul><li>3T3-L1’erne døde under virusbehandlingen og den efterfølgende puromycin selektion </li></ul><ul><li>Mulige...
Setup
Setup <ul><li>GFP-konstrukter </li></ul><ul><ul><li>Tom pSico vektor </li></ul></ul><ul><ul><li>PPARg KD vektor </li></ul>...
 4/3    1/1,5   1/5 Crude transduktionseffektivitet (PPARg dag 2) Oprenset transduktionseffektivitet (PPARg dag 2) Transdu...
Crude transduktionseffektivitet (Lacz dag 6)  4/3    1/1,5   1/5 <ul><ul><li>1/2,5  1/5    1/10 </li></ul></ul>Oprenset tr...
Transduktionseffektivitet  4/3    1/1,5   1/5 <ul><ul><li>1/2,5  1/5    1/10 </li></ul></ul>Crude transduktionseffektivite...
Transduktionseffektivitet Oprenset transduktionseffektivitet (pSico dag 6)  4/3    1/1,5   1/5 <ul><ul><li>1/2,5  1/5    1...
Transduktionseffektivitet Crude transduktionseffektivitet (pSico dag 4)  4/3    1/1,5   1/5 <ul><ul><li>1/2,5  1/5    1/10...
Differentieringsgrad  4/3    1/1,5   1/5 <ul><ul><li>1/2,5    1/5    1/10 </li></ul></ul>Differentieringsgrad for oprenset...
<ul><li>Konklusion:  </li></ul><ul><ul><li>Begge af de mest koncentrerede brønde har dårlig differntiering. Der må altså i...
Tom virus <ul><ul><li>1/2,5    1/5    1/10 </li></ul></ul>Differentieringsgrad for crude pSico (dag 6) <ul><ul><li>1/2,5  ...
Tom virus  4/3    1/1,5   1/5 Differentieringsgrad for oprenset pSico (dag 6)  4/3    1/1,5   1/5 Kontrol: oprenset LacZ (...
<ul><li>Konklusion </li></ul><ul><ul><li>Det ser ud til at indkoopereringen og udtrykket af fremmet genomisk materiale hæm...
Puromycin-kassetten  4/3    1/1,5   1/5 <ul><ul><li>1/2,5    1/5    1/10 </li></ul></ul>Differentieringsgrad for oprenset ...
CEBP KD <ul><ul><li>1/2,5    1/5    1/10 </li></ul></ul>Differentieringsgrad for crude CEBPb (dag 6) <ul><ul><li>1/2,5    ...
CEBP KD  4/3    1/1,5   1/5 Differentieringsgrad for oprenset CEBPb (dag 6)  4/3    1/1,5   1/5 Kontrol: oprenset LacZ (da...
<ul><li>Konklusion: CEBPb KD nedsætter 3T3-L1’s evne til at differentiere. </li></ul><ul><li>Da cellerne i brøndene med hø...
CEBPb’s differentiering
PPARg Knock Down Crude virus (dag 2) Oprenset virus (dag 2) 1:5   1:1,5  4:3  1:5   1:10
C/EBPb Knock Down Crude virus (dag 2) Oprenset virus (dag 2) 1:5   1:1,5  4:3  1:5   1:10
Upcoming SlideShare
Loading in...5
×

PPARg KD i 3T3-L1 celler

142

Published on

0 Comments
1 Like
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

No Downloads
Views
Total Views
142
On Slideshare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
0
Actions
Shares
0
Downloads
3
Comments
0
Likes
1
Embeds 0
No embeds

No notes for slide

Transcript of "PPARg KD i 3T3-L1 celler"

  1. 1. PPARg KD i 3T3-L1 celler
  2. 2. Problem <ul><li>3T3-L1’erne døde under virusbehandlingen og den efterfølgende puromycin selektion </li></ul><ul><li>Mulige grunde </li></ul><ul><ul><li>For høj virus-titter </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>Undersøges med forskellige konc af henholdsvis crude virus-medie og oprenset virus. </li></ul></ul></ul><ul><ul><li>Puromycin sensitivitet </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>Kassetten: Undersøges ved ikke at selektere </li></ul></ul></ul><ul><ul><li>Skadelige 293-T medierester </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>Undersøges ved oprensning. </li></ul></ul></ul>
  3. 3. Setup
  4. 4. Setup <ul><li>GFP-konstrukter </li></ul><ul><ul><li>Tom pSico vektor </li></ul></ul><ul><ul><li>PPARg KD vektor </li></ul></ul><ul><ul><li>C/EBPb KD vektor </li></ul></ul><ul><ul><li>LacZ kontrol </li></ul></ul><ul><li>Puromycin-konstrukt </li></ul><ul><ul><li>Scramble(alt kontrol) </li></ul></ul><ul><li>Crude koncentrationer </li></ul><ul><ul><li>1/2,5 , 1/5 , 1/10 </li></ul></ul><ul><li>Ækvivalente konc af oprenset virus </li></ul><ul><ul><li>1/5 , 1/1,5 , 4/3 </li></ul></ul><ul><li>Høst af RNA til kontrol af KD </li></ul><ul><ul><li>PPARg dag 2 </li></ul></ul><ul><ul><li>C/EBPb dag 2 </li></ul></ul><ul><ul><li>LacZ dag 2 </li></ul></ul>
  5. 5. 4/3 1/1,5 1/5 Crude transduktionseffektivitet (PPARg dag 2) Oprenset transduktionseffektivitet (PPARg dag 2) Transduktionseffektivitet <ul><ul><li>1/2,5 1/5 1/10 </li></ul></ul>
  6. 6. Crude transduktionseffektivitet (Lacz dag 6) 4/3 1/1,5 1/5 <ul><ul><li>1/2,5 1/5 1/10 </li></ul></ul>Oprenset transduktionseffektivitet (pSico dag 6) Transduktionseffektivitet
  7. 7. Transduktionseffektivitet 4/3 1/1,5 1/5 <ul><ul><li>1/2,5 1/5 1/10 </li></ul></ul>Crude transduktionseffektivitet (pSico dag 4) Oprenset transduktionseffektivitet (pSico dag 4)
  8. 8. Transduktionseffektivitet Oprenset transduktionseffektivitet (pSico dag 6) 4/3 1/1,5 1/5 <ul><ul><li>1/2,5 1/5 1/10 </li></ul></ul>Crude transduktionseffektivitet (pSico dag 6)
  9. 9. Transduktionseffektivitet Crude transduktionseffektivitet (pSico dag 4) 4/3 1/1,5 1/5 <ul><ul><li>1/2,5 1/5 1/10 </li></ul></ul>Oprenset transduktionseffektivitet (pSico dag 6)
  10. 10. Differentieringsgrad 4/3 1/1,5 1/5 <ul><ul><li>1/2,5 1/5 1/10 </li></ul></ul>Differentieringsgrad for oprenset LacZ (dag 6) Differentieringsgrad for crude LacZ (dag 6)
  11. 11. <ul><li>Konklusion: </li></ul><ul><ul><li>Begge af de mest koncentrerede brønde har dårlig differntiering. Der må altså ikke bruges for meget virus. </li></ul></ul><ul><ul><li>1/1,5 af den oprensede giver dog heller ikke en god differentiering. </li></ul></ul>
  12. 12. Tom virus <ul><ul><li>1/2,5 1/5 1/10 </li></ul></ul>Differentieringsgrad for crude pSico (dag 6) <ul><ul><li>1/2,5 1/5 1/10 </li></ul></ul>Differentieringsgrad for crude LacZ (dag 6)
  13. 13. Tom virus 4/3 1/1,5 1/5 Differentieringsgrad for oprenset pSico (dag 6) 4/3 1/1,5 1/5 Kontrol: oprenset LacZ (dag 6)
  14. 14. <ul><li>Konklusion </li></ul><ul><ul><li>Det ser ud til at indkoopereringen og udtrykket af fremmet genomisk materiale hæmmer </li></ul></ul>
  15. 15. Puromycin-kassetten 4/3 1/1,5 1/5 <ul><ul><li>1/2,5 1/5 1/10 </li></ul></ul>Differentieringsgrad for oprenset Scramble (dag 6) Differentieringsgrad for crude Sramble (dag 6)
  16. 16. CEBP KD <ul><ul><li>1/2,5 1/5 1/10 </li></ul></ul>Differentieringsgrad for crude CEBPb (dag 6) <ul><ul><li>1/2,5 1/5 1/10 </li></ul></ul>Differentieringsgrad for crude LacZ (dag 6)
  17. 17. CEBP KD 4/3 1/1,5 1/5 Differentieringsgrad for oprenset CEBPb (dag 6) 4/3 1/1,5 1/5 Kontrol: oprenset LacZ (dag 6)
  18. 18. <ul><li>Konklusion: CEBPb KD nedsætter 3T3-L1’s evne til at differentiere. </li></ul><ul><li>Da cellerne i brøndene med høje koncentrationer, enten var døde eller havde det meget skidt, må ma konkludere at den oprensede virus i konc 1/1,5, giver det bedste KD. </li></ul>
  19. 19. CEBPb’s differentiering
  20. 20. PPARg Knock Down Crude virus (dag 2) Oprenset virus (dag 2) 1:5 1:1,5 4:3 1:5 1:10
  21. 21. C/EBPb Knock Down Crude virus (dag 2) Oprenset virus (dag 2) 1:5 1:1,5 4:3 1:5 1:10
  1. A particular slide catching your eye?

    Clipping is a handy way to collect important slides you want to go back to later.

×