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Garcinol對大鼠胚胎的大腦皮層神經元與星形膠質細胞中,自由基的生成與一氧化氮的製造之影響
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Garcinol對大鼠胚胎的大腦皮層神經元與星形膠質細胞中,自由基的生成與一氧化氮的製造之影響

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  • Garcinia indica 乃來自印度的一種類似柑橘的果實,主要為增加色香味而添加於咖哩上或作為印度傳統醫療藥用植物 山 竹醇 (Garcinol) 為 polyisoprenylated benzophenone 衍生物 , Garcinia indica 由果皮分離而得 山竹果有超強的「抗氧化能力」。抗氧化能力能夠清除過多的「自由基」。比較看來胡蘿蔔的抗氧化能力是 200 單位,藍莓是 2400 單位,石榴是 3037 單位,山竹則高達 17000 單位。    
  • Garcinol 也能抑制黃嘌呤氧化酶活性與 IC50( 半抑制濃度 ) 和 52UM ,具有競爭抑制 為了更確定 garcinol 對於引起發炎的神經毒 ,能 有保護神經的效果 ,
  • O2- 超氧陰離子 H2o2 過氧化氫
  • ,
  • Garcinol 抑制了 ROS 引起的 DNA 鏈斷裂 A 空白組 : 質體核酸培養 在 37 度 for 30 分鐘 with 濃度 100 mM 過氧化氫 and 50 UM 硫酸亞鐵 實驗組 : 添加山竹醇 Y 鬆弛環狀 DNA% X 為編號  鬆弛環狀 DNA% 越高代表抗氧化能力越差 B圖    cambogin  藤黃果衍生物 作三重複 有效果顏色較重
  • 圖 A 抑制 50% 酵素活性所需要的 garcinol 濃度 我們發現在圖 A garcinol 在 52UM 時 Y 軸在 IC50 ,能抑制 50% 的黃嘌呤氧化酶,證明山竹醇有效的能抑制黃嘌呤氧化酶 圖 B
  • A 細胞有添加及沒添加山竹醇,培養 7 天 ,之後染色 使用山竹醇之後明顯看不見 細胞活性增加 減少影響的毒性
  • Control 控制組 LPS 內毒素 ( 脂多糖 )-> 邊邊無延伸,比較小 LPS 加 Garcinol 外觀比較厚實
  • NITRITE 亞硝酸鹽 第一個是都沒加 第二個只有加 lps 第三個加 LPS 再加 1.25 山竹醇 以此類推
  • 很明顯的可以解識山竹醇 ACTIN 肌動蛋白
  • (D) LPS-stimulated cells were treated with garcinol in a dose-dependent manner (1.25, 2.5, and 5 lM). iNOS protein expression in cell lysate was determined by SDS–PAGE for immunoblotting analysis by anti-iNOS antibody By Western blot analysis, the inhibition of LPS-stimulated iNOS production by garcinol was displayed in a dose-dependent manner (1.25, 2.5, and 5 lM) for 24 h (Fig. 4D) 南方墨點法
  • Transcript

    • 1. 班級 : 二食營四 A 姓名 : 歐舒萍 指導老師 : 吳幸娟 山竹醇 (Garcinol) 對大鼠胚胎的大腦皮層神經元 及 星形膠質細胞中,自由基的生成與一氧化氮的製造之影響 C.-H. Liao et al. / Biochemical and Biophysical Research Communications 329 (2005) 1306–1314 Effects of garcinol on free radical generation and NO production in embryonic rat cortical neurons and astrocytes
    • 2. Garcinia indica
    • 3. 研究目的
      • 證明 Garcinol 的抗氧化能力
      • Garcinol 對大鼠胚胎的大腦皮層神經元的影響
      • 對於 Fenton 誘發的 DNA 斷裂, garcinol 可提供隨濃度而變化的保護作用
    • 4. 實驗方法 ( 一 )
      • 細胞培養
      • 取出生八天的大鼠胚胎腦皮層星狀膠質細胞
      • -> 從中取得大鼠皮層腦細胞胰蛋白酶
      • -> 腦組織打散並過濾
      • -> +10% 胎牛血清
      • -> 細胞數調整 5X10 6 cell/ml 接種於培養盤
      • -> 細胞置於 37 度 5%co2 的細胞培養箱
      • -> 三天後震盪培養皿
      • -> 每平方公分加入 3X10 4 的貼壁細胞
      • -> 48 小時後利用 anti-GFAP 抗體進行免疫染色
      • -> 鑑定星狀膠質細胞。
    • 5. 實驗方法 ( 二 )
      • 黃嘌呤氧化酶活性測定
      • 黃嘌呤氧化酶催化黃嘌呤轉變成尿酸過程,會產生有毒的 O2- 及 H2O2 。
      • 尿酸在波長 295nm 有最大吸光度,若藥物對黃嘌呤氧化酶活性抑制作用越強,則尿酸的吸光度變化速率越低 。
      • 利用 分光光度比色法 來測定尿酸的吸光值變化速率以作為測定黃嘌呤氧化酶活性的指標。
    • 6. 實驗方法 ( 三 )
      • 避免 Fenton 反應引起的 DNA 氧化性損傷
      • garcinol 及衍生物的 抑制 作用 與 Fenton 反應所造成的超螺旋 DNA 鏈斷裂評估
    • 7. 實驗方法 ( 四 )
      • 硝酸鹽檢測
      • 一氧化氮 (NO) 十分活躍不安定,生命週期短,約十秒就會氧化成亞硝酸鹽 和硝酸鹽 。
      • 利用 Griess 法,將上述反應後之上清液取 100 μL ,加入等量的 Griess 試劑 ,混合物利用酵素連結免疫吸附分析儀( Labsystems Multiskan RC )在 550 nm 處測定吸光度
    • 8. 實驗方法 ( 五 )
      • 西方墨點分析法
      • 使用溶解液中含有 10% glycerol , 1.0 % Triton X - 100 , 1.0 mM NaHPO3 ,的細胞總萃取物的製備, 137 mM NaCl , 10 mM NaF 1.0 mM EGTA 1.0 mM EGTA , ,,,, 20 mM Tris–HCl , 100 lM b-glycerophosphate , 1.0% sodium dodecyl sulfate Na3VO4 , 1.0 mM Na3VO4 , and protease inhibitor cocktail
      • 將洋菜膠上的 DNA 吸出而固定於轉移基質上,且讓 DNA 片段仍保留在原有的相對位置上,再以 DNA 作為探針進行雜合分析而找出我們要的。
    • 9. 實驗方法 ( 六 )
      • 免疫細胞化學染色技術 ( Immunochistochemistry )
      • 用免疫學原理,通過特異的抗原、抗體反應標記上可見的顯示物系統來檢查細胞及組織上原位抗原或抗體成分的方法。
    • 10. 圖一 Garcinol 抑制了 ROS 引起的 DNA 鏈斷裂
    • 11. Garcinol 顯著抑制黃嘌呤氧化酶的活性 圖二
    • 12. 圖三 細胞培養 : 山竹醇有增強神經元之效果
    • 13. 圖四 Garcinol 使 LPS 含量下降
    • 14. 圖四 Garcinol 明顯降低亞硝酸鹽含量
    • 15.  
    • 16.  
    • 17. Discussion
      • Garcinol:
      • 具有 清除自由基的能力
      • 減少 DNA 損傷和抑制黃嘌呤氧化酶
      • 增強神經 觸突, 提高 腦部 神經元的存活 率及維持 星 狀 膠質細胞 的完整
      • 減少 LPS 或 IL - 1  。
      • 星 狀 膠質細胞 中,可使 iNOS 的 蛋白質比例下降
      • 抑制黃嘌呤氧化酶的活性和降低過氧化氫的生成
    • 18.
      • Thank you!