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Metodos de Tincion
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Metodos de Tincion

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  • 1. Histología (anatomía microscópica)
    • Objetivo: Mediante el uso de técnicas microscópicas, comprender la micro-anatomía de células, tejidos y órganos , y correlacionar la estructura con su función.
    • Técnicas de microscopía óptica más usadas:
    • Combinación de colorantes basófilos y acidófilos (por ej., Hematoxilina-Eosina, Tricrómico de Mallory)
    • Histoquímica (Fosfatasa ácida, PAS [ácido periódico-Schiff] )
    • Inmuno-histoquímica (uso de Ac contra estructuras específicas, conjugados con moléculas fluorescentes [IFD e IFI] o con enzimas)
    • Microscopía electrónica de transmisión (MET) y de barrido (MEB)
  • 2. Hematoxilina-Eosina: Técnica de coloración
    • Fijación de la muestra con Formalina (solución acuosa tamponada de formaldehído). Detiene el metabolismo y conserva la estructura del tejido (proteínas pero no lípidos  mal fijador de membranas).
    • Lavado y deshidratación (serie de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta el 100%). Extracción del alcohol con Xileno , luego inclusión de la muestra con parafina fundida (miscible en Xileno). Enfriamiento y endureci-miento de la parafina  Taco  cortes de 5-15  de espesor con micrótomo que se montan sobre portaobjetos.
    • Coloración con Hematoxilina: extracción de la parafina con Xileno, re-hidratación del corte con soluciones alcohólicas de concentración decreciente, y tinción con solución acuosa de Hematoxilina .
    • Coloración con Eosina: deshidratación del corte con soluciones alcohólicas de concentración creciente, y tinción con solución alcohólica de Eosina . Lavado con Xileno, agregado de un líquido de montaje no acuoso, y cobertura con un cubre-objetos para lograr un preparado permanente .
  • 3. Hematoxilina-Eosina: Fundamento de la coloración La Eosina es un colorante ácido (predomina densidad de carga negativa ), por lo cual se asocia y colorea a estructuras catiónicas del citoplasma y matriz extracelular, tales como: filamentos citoplasmáticos (como los de células musculares); membranas intracelulares ; y fibras extracelulares (por sus aminoácidos básicos ionizados).
    • La Hematoxilina se asocia con mordientes para actuar como un colorante básico , por lo cual se asocia y colorea estructuras aniónicas (que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados):
    • Heterocromatina y nucléolos
    • RNA ribosomal
    • Matriz extracelular (por los sulfato de los GAG)
  • 4. Ácido periódico-Schiff (PAS): Fundamento El ácido periódico rompe la unión entre carbonos con hidroxilos adyacentes , y forma grupos aldehído . El reactivo de Schiff reacciona con los aldehídos para dar un color rojo púrpura intenso .
    • La reacción de PAS tiñe carbohidratos , y se usa para detectar:
    • Gránulos de glucógeno
    • Moco en diversas células
    • Membrana basal de los epitelios
    • Fibras reticulares del tejido conjuntivo

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