Histología  (anatomía microscópica) <ul><li>Objetivo:  Mediante el uso de técnicas microscópicas,   comprender la micro-an...
Hematoxilina-Eosina:  Técnica de coloración <ul><li>Fijación de la muestra con Formalina  (solución acuosa tamponada de fo...
Hematoxilina-Eosina:  Fundamento de la coloración La Eosina  es un  colorante ácido  (predomina densidad de  carga negativ...
Ácido periódico-Schiff (PAS):  Fundamento El  ácido periódico  rompe la unión entre carbonos con  hidroxilos adyacentes , ...
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Metodos de Tincion

  1. 1. Histología (anatomía microscópica) <ul><li>Objetivo: Mediante el uso de técnicas microscópicas, comprender la micro-anatomía de células, tejidos y órganos , y correlacionar la estructura con su función. </li></ul><ul><li>Técnicas de microscopía óptica más usadas: </li></ul><ul><li>Combinación de colorantes basófilos y acidófilos (por ej., Hematoxilina-Eosina, Tricrómico de Mallory) </li></ul><ul><li>Histoquímica (Fosfatasa ácida, PAS [ácido periódico-Schiff] ) </li></ul><ul><li>Inmuno-histoquímica (uso de Ac contra estructuras específicas, conjugados con moléculas fluorescentes [IFD e IFI] o con enzimas) </li></ul><ul><li>Microscopía electrónica de transmisión (MET) y de barrido (MEB) </li></ul>
  2. 2. Hematoxilina-Eosina: Técnica de coloración <ul><li>Fijación de la muestra con Formalina (solución acuosa tamponada de formaldehído). Detiene el metabolismo y conserva la estructura del tejido (proteínas pero no lípidos  mal fijador de membranas). </li></ul><ul><li>Lavado y deshidratación (serie de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta el 100%). Extracción del alcohol con Xileno , luego inclusión de la muestra con parafina fundida (miscible en Xileno). Enfriamiento y endureci-miento de la parafina  Taco  cortes de 5-15  de espesor con micrótomo que se montan sobre portaobjetos. </li></ul><ul><li>Coloración con Hematoxilina: extracción de la parafina con Xileno, re-hidratación del corte con soluciones alcohólicas de concentración decreciente, y tinción con solución acuosa de Hematoxilina . </li></ul><ul><li>Coloración con Eosina: deshidratación del corte con soluciones alcohólicas de concentración creciente, y tinción con solución alcohólica de Eosina . Lavado con Xileno, agregado de un líquido de montaje no acuoso, y cobertura con un cubre-objetos para lograr un preparado permanente . </li></ul>
  3. 3. Hematoxilina-Eosina: Fundamento de la coloración La Eosina es un colorante ácido (predomina densidad de carga negativa ), por lo cual se asocia y colorea a estructuras catiónicas del citoplasma y matriz extracelular, tales como: filamentos citoplasmáticos (como los de células musculares); membranas intracelulares ; y fibras extracelulares (por sus aminoácidos básicos ionizados). <ul><li>La Hematoxilina se asocia con mordientes para actuar como un colorante básico , por lo cual se asocia y colorea estructuras aniónicas (que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados): </li></ul><ul><li>Heterocromatina y nucléolos </li></ul><ul><li>RNA ribosomal </li></ul><ul><li>Matriz extracelular (por los sulfato de los GAG) </li></ul>
  4. 4. Ácido periódico-Schiff (PAS): Fundamento El ácido periódico rompe la unión entre carbonos con hidroxilos adyacentes , y forma grupos aldehído . El reactivo de Schiff reacciona con los aldehídos para dar un color rojo púrpura intenso . <ul><li>La reacción de PAS tiñe carbohidratos , y se usa para detectar: </li></ul><ul><li>Gránulos de glucógeno </li></ul><ul><li>Moco en diversas células </li></ul><ul><li>Membrana basal de los epitelios </li></ul><ul><li>Fibras reticulares del tejido conjuntivo </li></ul>
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