Aula3  Replicacao
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Aula3  Replicacao Aula3 Replicacao Presentation Transcript

  • Replicação do DNA O mecanismo de replicação está baseado no pareamento das bases da dupla hélice do DNA. A estrutura do DNA contém a informação necessária para perpetuar sua sequência de bases
  • A replicação do DNA é semi-conservativa Experimento realizado por Meselson & Stahl em 1958 Cultivo em meio 14 NH 4 Cl Cultivo em meio 15 NH 4 Cl Purificação do DNA seguida de centrifugação em gradiente de CsCl
  • A replicação é bidirecional
  • A replicação do cromossomo circular
  • O genoma bacteriano circular constitue um único replicon
    • A velocidade da forquillha de replicação bacteriana é 50000pb/min
    • Um única origem de replicação em E.coli (OriC, 245 pb)
  • Origem de Replicação em bactérias: Somente origens completamente metiladas podem iniciar a replicação
  • O genoma eucariótico constitue vários replicons
    • A velocidade da forquillha de replicação eucariótica é 2000pb/min
    • Os replicons eucarióticos tem 40-100 kb e são iniciados em tempos diferentes
    • Fase S demora ~ 6hrs em uma célula somática
  • Fita contínua (líder) Fita descontínua
  • Polimerases de DNA: As enzimas que sintetizam DNA
    • A síntese de DNA ocorre pela adição de nucleotídeos a extremidade 3´OH da cadeia em crescimento. O precursor da síntese é o desoxiribonucleosídeo 5´trifosfato
    • Sentido da síntese sempre é 5’  3’
    • A replicação é um processo extremamente fiel. As DNA-polimerases tem atividade revisora
  • Pareamento de bases correto incorreto
  • Atividade revisora 3’  5’ garante a fidelidade da replicação
  • Modelo da estrutura das DNA-polimerases
  •  
  • Proteínas presentes na origem de Replicação de E.coli DnaA Reconhece a origem e abre a dupla fita em sítios específicos DnaB (helicase) Desenrola o DNA DnaC Auxilia a ligação de DnaB na origem HU Proteína do tipo histona que estimula a iniciação Primase (DnaG) Sintetiza os primers de RNA Single strand binding (SSB) Liga a fita simples de DNA RNA polimerase Facilita a ação da DnaA DNA girase Alivia a tensão torsional gerada pela abertura da dupla-fita Dam Metilase Metila as sequências GATC na OriC
  • A síntese do DNA é semi-descontínua e requer um iniciador (primer) de RNA Fita contínua Fita descontínua Síntese da Fita descontínua Síntese da Fita Contínua
    • Fragmentos de Okasaki ocorrem na fita descontínua
    • A DNA polimerase III é responsável pela síntese da maior parte do DNA
    • A DNA polimerase I remove o primer de RNA e preenche as lacunas
    • A DNA ligase sela as quebras
  • A DNA ligase sela as quebras
  • Proteínas presentes na forquilha de Replicação de E.coli SSB Liga a fita simples de DNA DnaB (helicase) Desenrola o DNA Primase (DnaG) Sintetiza os primers de RNA DNA Polimerase III Sintese da fita nova DNA Polimerase I Preenche as lacunas e excisa os primers DNA Ligase Liga os fragmentos DNA girase Superenrolamento
  • Síntese das fitas contínua e descontínua é independente
  • O complexo de replicação
  •  
  • Duplicação dos cromossomos Separação dos cromossomos e divisão celular