Ppt medios de cultivo

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Ppt medios de cultivo

  1. 1. LECCIÓN 5. CULTIVO Y CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS1. Los requerimientos nutritivos de los microorganismos2. Medios de cultivo: composición y preparación3. Aislamiento de cultivos puros de microorganismos4. Mantenimiento y conservación de microorganismos5. Cultivos tipo y colecciones de cultivo6. Definición del crecimiento7. Curva de crecimiento8. Métodos para medir el crecimiento microbiano9. Crecimiento continuo10. Factores que influyen en el crecimiento microbiano
  2. 2. LECCIÓN 5. CULTIVO Y CRECIMIENTO DEMICROORGANISMOS1. Los requerimientos nutritivos de los microorganismos1.1 Macronutrientes1.2 Oligoelementos1.3 Factores de crecimiento
  3. 3. Monómeros Macromoléculas EstructurascelularesMonosacáridosAminoácidosÁcidos grasosBases nitrogenadasPolisacáridosProteínasLípidosÁcidos nucleicosPared celularGlicocàlixMembranaRibosomasFlageloPelos y fimbriasEnzimasMembranasCromosomaRibosomasPlásmidosLa nutrición microbiana consiste en aportar a las células los ingredientesquímicos que necesitan para la síntesis de monómeros, que son los componentesde las macromoléculas, que a su vez construyen las estructuras celulares.
  4. 4. Nutrición microbianaElemento más abundante en las macromoléculas.Constituye el 50% del peso seco de las células.Muchos procariotas son heterótrofos. Necesitan algún tipo decompuesto orgánico como fuente de carbono para hacer nuevomaterial celular.Los aminoácidos, los ácidos grasos, los ácidos orgánicos, losazúcares, las bases nitrogenadas, los compuestos aromáticos yun sinfín de compuestos orgánicos de otro tipo pueden serutilizados por las bacterias.Algunos procariotas son autótrofos, capaces de construirtodas sus estructuras orgánicas a partir del CO2con la energíaobtenida de la luz o de compuestos inorgánicos.Cmacronutrientes
  5. 5. Nutrición microbianaEn una bacteria típica, alrededor del 12% de su peso secoes N.Forma parte de las proteínas, ácidos nucleicos y otrosconstituyentes celulares.En la naturaleza, se encuentra en forma orgánica e inorgánica.Pero la mayor parte del N natural se encuentra en formainorgánica ( NH3, NO3-o N2).La mayoría de las bacterias son capaces de utilizar NH3 comoúnica fuente de N, y otras muchas pueden utilizar NO3-.El N2 puede ser usado como fuente de nitrógeno por algunasbacterias, las bacterias fijadoras de nitrógeno.Nmacronutrientes
  6. 6. Nutrición microbianamacronutrientesEl P se presenta en la naturaleza en forma de fosfatos orgánicos einorgánicos.La célula necesita P para la síntesis de ácidos nucleicos yfosfolípidos.El S es un componente de los aminoácidos cis y met y seencuentra en algunas vitaminas, como tiamina, biotina, ácidolipoico y Coenzima A.La mayoría del S celular procede de fuentes inorgánicas, ya seansulfatos o sulfuros.El K es necesario para todos los organismos. Es cofactor demuchas enzimas.El Mg funciona como estabilizador de los ribosomas, lasmembranas celulares y los ácidos nucleicos. También se necesitapara la actividad de muchas enzimas.El Ca ayuda a estabilizar la pared celular bacteriana y tiene unafunción importante en la termorresistencia de las endoesporas.El Na es requerido por algunos microorganismos (halófilos),PSKMgCaNa
  7. 7. El Fe es fundamental en la respiración celular.Forma parte de los citocromos y de proteínas que contienen Fe y S implicadosen el transporte de electrones.En condiciones anaeróbicas, el Fe se encuentra en el estado de oxidación +2 (Fe+2) y essoluble.En condiciones aeróbicas suele estar en el estado de oxidación +3 ( Fe+3) y forma variosminerales insolubles.Para obtener el Fe de tales minerales, las células producen agentes quelantes llamadossideróforos que solubilizan el Fe y lo introducen en la célula.Es necesario en mayores cantidades que otros metales y no se considera un elemento traza.Nutrición microbianaFe
  8. 8. Nutrición microbianaMicronutrientes (elementos traza)Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Se, W, V, ZnSe requieren en muy pequeñas cantidades.Son tan importantes para el funcionamiento celular como los macronutrientes.Muchos son metales que actúan como cofactores de enzimas.A menudo no es necesario añadirlos a los medios de cultivo.Si el agua utilizada para elaborar el medio es ultrapura se añade al medio unapequeña cantidad de una solución de metales traza.
  9. 9. Nutrición microbianaLos factores de crecimiento son compuestos orgánicos que se necesitan enmuy pequeñas cantidades y sólo por algunas células.Los factores de crecimiento son vitaminas, aminoácidos, purinas ypirimidinas.La mayoría de los microorganismos son capaces de sintetizar estos compuestos,pero en algunos casos es necesario añadirlos al medio.Las vitaminas son los factores de crecimiento que se necesitan con mayorfrecuencia, funcionan formando parte de coenzimas.Las principales vitaminas requeridas por los microorganismos son:tiamina (vitamina B1)biotina,piridoxina (vitamina B6) ycovalamina (vitamina B12)Factores de crecimiento
  10. 10. LECCIÓN 5. CULTIVO Y CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS2. Medios de cultivo: composición y preparación2. 1. Medios de cultivo químicamente definidos2. 2. Medios complejos (no definidos)2.3. Tipos de medios de cultivo
  11. 11. Medio definido para Escherichia coliK2HPO4 7 gKH2PO4 2 g(NH4)2SO4 1 gMgSO4 0,1 gCaCl2 0,02 gGlucosa 4-10 gElementos traza 2-10 µg(Fe, Co, Mn, Zn,Cu, Ni, Mo)Agua destilada 1000 mlpH7El medio de cultivo químicamente definido se prepara añadiendo cantidades precisasde compuestos orgánicos e inorgánicos puros a un volumen conocido de agua destilada.Se conoce su composición exacta.
  12. 12. Medio definido para Leuconostoc mesenteroides- K2HPO4 0,6 g- KH2PO4 0,6 g- NH4Cl 3 g- MgSO4 0,1 g- CaCl2 0,02 g- Glucosa 25 g- Acetáto sódico 20 g- Aminoácidos (ala, arg, asn asp,cis, glu, gln, gly, his, iso,leu, lis, met, phe, pro, ser, thr, trp, tyr, val).100-200 µg de cada uno- Purinas y pirimidinas (adenina, guanina, uracilo, xantina).10 mg de cada una-Vitaminas (biotina, folato, ácido nicotínico, piridoxal,piridoxamina, piridoxina, riboflavina, tiamina, pantotenato,ácido p-aminobenzoico)0,01-1 mg de cada unaElementos traza 2-10 µg(Fe, Co, Mn, Zn,Cu, Ni, Mo)Agua destilada 1000 mlpH7
  13. 13. Medio complejopara Escherichia coliy Leuconostoc mesenteroidesGlucosa 15 gExtracto de levadura 5 gPeptona 5 gKH2PO4 2 gAgua destilada 1000 mlpH7Para elaborar el medio complejo se utilizan hidrolizados de proteínas y otrassustancias muy nutritivas pero no definidas químicamente que se pesan y se añaden a unvolumen conocido de agua.No se conoce la composición exacta del medio complejo.
  14. 14. Tipos de medios de cultivoMedios sólidos y líquidosLos medios sólidos se preparan como los medios líquidos y se les añade agar (1.5%) como agente gelificante.El agar es un polímero sulfatado compuesto por D-galactosa, 3,6-anhidro-L-galactosa y ácido glucurónico.El agar se funde a 80-90ºC y se puede enfriar hasta una temperatura de 40 a 42 ºC sin endurecerse.La mayoría de los microorganismos no pueden degradarlo.El agar se funde durante el proceso de esterilización, el medio fundido se vierte sobre placas Petri y se deja solidificarantes de su uso.Los medios sólidos inmovilizan a las células, permitiéndolas crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias.Medios generalesLos medios generales mantienen el crecimiento de muchos microorganismos. Ej., el caldo y agar nutritivoMedios enriquecidosMedios generales a los que se añaden nutrientes especiales para mantener el crecimiento de microorganismosheterótrofos exigentes. Ej., el agar sangreMedios selectivosFavorecen el crecimiento de microorganismos particulares. Ej.,agar Levine (eosina-azul de metileno) y AgarMacConkey se emplean para detectar enterobacterias. Contienen colorantes y sales biliares que inhiben elcrecimiento de las bacterias Gram positivas.Otros medios selectivos contienen nutrientes que pueden utilizar algunas bacterias de forma específica. Ej., el agarcelulosa se usa para aislar bacterias que digieren la celulosa.Medios diferencialesMedios que diferencian entre grupos distintos de bacterias e incluso permiten una identificación tentativa de losmicroorganismos según sus características biológicas.El agar MacConkey es tanto selectivo como diferencial. Como contiene lactosa y colorante rojo neutro, las coloniasfermentadoras de lactosa (Escherichia coli) aparecen de color rosa o rojo y se distinguen fácilmente de las colonias nofermentadoras.
  15. 15. LECCIÓN 5. CULTIVO Y CRECIMIENTO DEMICROORGANISMOS3. Aislamiento de cultivos puros de microorganismos3.1 Transferencia aséptica3.2 Siembra en placa por extensión; en estrías; y enprofundidad3.3 Morfología y crecimiento de las colonias
  16. 16. Transferencia asépticaa.Se calienta el asa de siembra hasta incandescencia y se deja enfriarb. El tubo se destapac. Se pasa el extremo del tubo por la llamad. Se extrae la muestra con el asa esterilizadae. Se vuelve a flamear la boca del tubo y la muestra se deposita en un medio estérilf. Se vuelve a tapar el tubo y se calienta el asa de nuevo al finalConsiste en una serie de procedimientos que evitan la contaminación durante lamanipulación de los cultivos y de los medios de cultivo estériles.Es uno de los primeros métodos que tiene que dominar un microbiólogo.
  17. 17. 1. Dilución y siembra porextensión en superficieObtención de cultivos puros3. Dilución y siembraen profundidadCrecimiento de colonias confluentesal comienzo de la siembra por estría2. Siembra en estríasSe realiza una siembrapor estría en una placa deagar con medio estéril.Después de una estría inicailSe hacen estrías en ánguloColonias aisladasal finalde la siembra porestríaSe esteriliza el asay luego se toma unamuestra del tubo
  18. 18. Morfología y crecimiento de las coloniasLas colonias son masas visibles de células que se forman por división de una o varias células.El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite al microbiólogo identificar las bacterias porque lasespecies forman a menudo colonias con una forma y aspecto característico.El tamaño, forma, textura y color de una colonia es propio de cada organismo.La morfología de la colonia de una bacteria puede variar según el medio en que crezca la bacteria.
  19. 19. Colonias de bacteriasSerratia marcescensCultivada en AgarMaConkeyPseudomonas aeruginosaCultivada enAgar Tripticasa-sojaShigella flexneriCultivada enAgar MacConkeyColonias de Bacillus subtilis que han crecido enmedios con pocos nutrientes

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