Dépistage des Anticorps Anti HIV par méthode ELISA

1. S/A
RDépistage des
anticorps anti
HIV
Par méthode ELISA
Par : S / Abdessemed

2. S/A
1. PRINCIPE :
 Enzygnost ®HIV Integral II est un test
immunoenzymatique qui permet la mise en
évidence simultanée de l’antigène VIH p24
et des anticorps anti- VIH spécifiques.
 Les immunoglobulines spécifiques du
VIH présentes dans l’échantillon à tester
réagissent avec les protéines
recombinantes et peptides synthétiques
VIH1, VIH2 fixés dans les cupules de la
plaque de microtitration.

3. S/A
Simultanément, l’antigène VIH p24 présent
dans l’échantillon peut se fixer aux
anticorps anti- HIV p24 monoclonaux
également fixés dans les cupules de la
plaque.
 Après élimination des éléments non liés
de l’échantillon, une deuxième étape permet
de marquer les anticorps spécifiques liés
avec des protéines et peptides synthétiques
VIH1, VIH2 et/ou VIH1 (sous- type O)
conjugués à la biotine (technique sandwich
antigène).

4. S/A
simultanément, l’antigène VIH lié est
marqué par l’anticorps monoclonal anti-
VIH p24 conjugué à la biotine (technique
sandwich anticorps).
 Après élimination des conjugués à la
biotine non liés, et dans une troisième
étape, le conjugué 2 (streptavidine/POD)
réagit avec les conjugués à la biotine
spécifiques, liés à la phase solide.

5. S/A
Après élimination de l’excès de conjugué 2,
l’activité enzymatique liée du conjugué est
mesurée (réaction colorée bleue). La
transformation enzymatique du chromogène
est interrompue par l’addition de solution
d’arrêt POD( réaction colorée
jaune).l’intensité de la coloration est
directement proportionnelle à la
concentration d’anticorps anti- VIH et
d’antigène VIH p24 présente dans
l’échantillon.

6. S/A
4. Validation du test :
 Les critères suivants doivent être remplis pour
valider le test :
Le test est exploitable si :
-0,010≤D.O.HIV Integral II nég ≤0,200.
-0,500≤D.O.HIV Integral II pos ≤2,600.
-D.O.HIV Integral II nég < valeur-seuil (cut-
off)
Chaque densité optique obtenue pour le contrôle
négatif (HIV Integral II Nég) et le
contrôle positif (HIV Integral II Pos) doit
répondre au(x) critère(s) correspondant(s)
 A défaut, le test doit être recommencé.

7. S/A
Exploitation des résultats :
 Se reporter au manuel d’utilisation correspondant.
 L’exploitation des résultats d’un test effectué sur le
BEP® II se fait manuellement.
 Les paragraphes suivants permettent une exploitation
des résultats sans l’aide d’un logiciel.
 Calculer la valeur moyenne des densités optiques
obtenues pour le HIV Integral II Pos. Calculer la
valeur-seuil en multipliant la valeur moyenne du HIV
Integral II Pos par le facteur 0,23 : Valeur-seuil
(cut off)= D.O. (VM) HIV Integral II Pos X 0,23.
 Selon les critères du test, classer les échantillons de
façon suivante :

8. S/A
5. Résultats du test :
DO échantillon<cut off = «négatif».
DO échantillon<cut off = «positif».
Les échantillons positifs, c.-à-d. ceux
dont la densité optique est trouvée
égale ou supérieur à la valeur-seuil,
doivent être retestés en double.

9. S/A
Un échantillon initialement trouvé
positif et dont les deux densités
optiques sont trouvées inférieures à la
valeur-seuil dans le retest doit être
considéré comme négatif selon les
critères du test. Si une seule des deux
valeurs est trouvée égale ou supérieure
à la valeur-seuil lors du retest,
l’échantillon est confirmé positif.

10. S/A
Tous les échantillons confirmés positifs
doivent impérativement être soumis à un
test dit de confirmation (par ex :
immunoblot ou analyse de l’acide nucléique).
Par sécurité, il est recommandé de faire
une deuxième analyse à l’aide d’un
deuxième prélèvement (environ 2 semaines
plus tard).

11. S/A

12. S/A
L’utilisation du test Western
Blot dans la détection de la
séropositivité pour le VIH

13. S/A

14. S/A
Protocole :
1. On utilise des bandelettes portant des
protéinesvirales séparées par
électrophorèse.
2. Une bandelette est mise en contact
avec le sérum d'un individu à
tester.
3. Les anticorps fixés sur la bandelette
sont révélés par une réaction colorée.

15. S/A

16. S/A
Résultats du test
La séropositivité pour le VIH est confirmée
lorsque l'individu testé présente des
anticorps dirigés contre :
- au moins deux glycoprotéines
membranaires différentes (gp160, gp120, ou
gp41) et
- au moins une protéine membranaire ou interne
(p55, p40, p25, ou p18) et
- au moins une enzyme virale (p68, p52 ou
p34).

17. S/A