UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
FACULTAD DE INGENIERÍA
E.A.P. INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
Actividades Bioquímicas de los Micr...
Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 2

I.

INTRODUCCIÓN:
La identificación de un aislamien...
Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 3

III.

MATERIALES:
Para la práctica de laboratorio c...
Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 4
5.2 Fermentación de la glucosa:
• Rotular e incubara...
Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 5

V.

RESULTADOS:
6.1 Hidrolisis del almidón:

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Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 6

6.3 Licuefacción de Gelatina e Hidrólisis de Urea:
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Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 7
amilasas que hidrolizan esos polímeros hasta oligosa...
Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 8

VII.

CONCLUSIÓN:
La liberación de amonio (compuest...
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  1. 1. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA E.A.P. INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General CURSO: Laboratorio deMicrobiología. DOCENTE: Blgo. Mblgo. Carlos Azañero Díaz GRUPO: “C” ALUMNA: Aburto Rodríguez Ruddy 2012
  2. 2. Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 2 I. INTRODUCCIÓN: La identificación de un aislamiento bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones de características y diferentes criterios en la evaluación de similitudes. Los ensayos bioquímicos tradicionalmente utilizados, llamadas pruebas bioquímicas convencionales, generalmente determinan la actividad de una vía metabólica (conjunto de reacciones químicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no. Existen diferentes sistemas que facilitan la realización de tales ensayos, porque proponen el mejor conjunto de pruebas bioquímicas para la identificación de un grupo bacteriano, porque simplifican la interpretación de un resultado utilizando un valor numérico, porque proveen los reactivos prontos para su uso o porque son totalmente automatizables. Las pruebas o ensayos bioquímicos, son pruebas simples que se han desarrollado para demostrar en forma clara una determinada característica bioquímica como presencia o ausencia de una determinada actividad enzimática, grupo de enzimas o determinada vía metabólica, crecimiento a una determinada temperatura, crecimiento en presencia de inhibidores, etc. No significan de ninguna manera un estudio profundo del metabolismo bacteriano. II. OBJETIVO: Demostrar e interpretar la acción degradativa de un microorganismo sobre un determinado sustrato contenido en un medio de cultivo específico.
  3. 3. Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 3 III. MATERIALES: Para la práctica de laboratorio con respecto al Metabolismo General utilizamos los siguientes materiales: Material biológico: Cultivo puros bacterianos de: 1. Bacillus subtilis 2. Escherichia coli 3. Proteus vulgaris 4. Pseudomonas fluorescentes 5. Saccharomyces cerevisiae Placas Petri con agar almidón Tubos de ensayo con caldo glucosa rojo fenol incluida una campana de Durham Tubos de ensayo con agar gelatina Tubos de ensayo con caldo de urea Placas Petri con agra tributirina Material del laboratorio: Asa bacteriológica calibrada Asa bacteriológica en punta Mechero de alcohol IV. METODOLOGÍA: DEGRADACIÓN DEL ALMIDÓN 5.1 Hidrolisis del almidón: • Rotular e incubara 37ºC por 10 horas. • Se divide la placa petri en tres sectores. Con el asa de siembra en punta coger el cultivo puro bacteriano 1. • Colocar en el centro de la placa un punto del cultivo, así también para el 2 y 3.
  4. 4. Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 4 5.2 Fermentación de la glucosa: • Rotular e incubara 37ºC por 10 horas. Observar los tubos en cuanto al cambio de color y formación de gases. • Sembrar por suspensión el cultivo bacteriano 1 en un tubo con caldo de glucosa. • Sembrar de la misma forma anteriormente descrita al tubo 2 y 4. DEGRADACIÓN DE SUSTANCIAS NITROGENADAS 5.3Licuefacción de la gelatina: • Despues de la incubación colocar ambos tubos a refrigeración por 2horas. •Sembrar por picadura profunda en tubos con agar gelatina los cultivos puros bactrianos 2 y 3. • Rotular e incubara 37ºC por 10 horas. 5.4 Hidrólisis de la urea: • Observar la formación o no de un color rojo cereza •Sembrar por estria en superficie en tubos con agar uera inclinando los tubos 2, 3 y 4. • Rotular e incubara 37ºC por 10 horas. DEGRADACIÓN DE SUSTANCIAS LIPIDICAS 5.5 Hidrólisis de los lípidos: •Se divide la placa en tres sectores. Con el • Rotular e incubara 37ºC por 10 horas.
  5. 5. Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 5 V. RESULTADOS: 6.1 Hidrolisis del almidón: 1 3 2 6.2 Fermentación delaglucosa: Microorganismos Bacillus subtilis Escherichia coli Proteus vulgaris Glucosa Acido no Acido/gas si si 6.2 Fermentación de glucosa: Tubo 1: viró a color naranja Tubo 2: viró a color amarillo oscuro Tubo 3: viró a color amarillo
  6. 6. Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 6 6.3 Licuefacción de Gelatina e Hidrólisis de Urea: Microorganismos Escherichia coli Proteus vulgaris Pseudomonas fluorescentes Gelatina Negativo --- Ureasa Negativo Positivo Positivo Negativo 6.3 Licuación de la gelatina: Tubo 2: viró a color blanco Tubo 4: viró a color verde lechoso 6.4 Hidrólisis de la urea: Tubo 2: viró a color naranja Tubo 3: viró a color rojo Tubo 4: viró a color naranja intenso 6.4 Hidrólisis de la Tributirina: 2 . Cultivo 2: Escherichia coli 4 5 Crecimiento del cultivo . Cultivo 4: Psudomonas fluorescentes Comió todo lo alrrededor suyo. que se encontró . Cultivo 5: Staphylococcus aureus VI. DISCUSIÓN: Crecimiento del cultivo Según Alfred Jörgensen - Fermentación Industrial: Los polisacáridos, como el almidón son demasiado largos para ser transportados al interior de la célula. Los microorganismos excretan
  7. 7. Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 7 amilasas que hidrolizan esos polímeros hasta oligosacáridos o monosacáridos que pueden usarse como sustratos para crecer. Las colonias de bacterias que atacaron el almidón estánrodeadas por una zona incolora que fue el resultado obtenido en el laboratorio. Ambos resultados están relacionados. En la hidrolisis de almidón, se inocularon con la placa con Agar y almidón al microorganismo, estos fueron (1) Escherichia coli, (2) Bacillus subtilis y (3) Proteus vulgaris; la observación fue que el (2) Bacillus subtilis fue resistente al colorante y pudo hidrolizar al almidón formándose un halo transparente alrededor del almidón. La solución de lugol se le agrega para observar la reacción de los microorganismos y la capacidad que estos microorganismos tienen para producir una enzima que hidrolice al almidón. http://es.scribd_doc/actividad_microbiana.com La urea es un compuesto orgánico nitrogenado que se transforma por algunos microorganismos del suelo, los cuales producen la enzima ureasa. Como resultado de esta actividad microbiana el nitrógeno es liberado al suelo en forma inorgánica. Cuando esta reacción ocurre en medio de cultivo se alcaliniza y el indicador permite percibir visualmente el cambio en acidez del medio. En la prueba de la hidrolisis de urea utilizamos tres cultivos puros (2)Escherichia coli, (3)Proteus vulgarisy(4)Pseudomonas fluorescentescon urea y rojo fenol como indicador. La liberación de amonio eleva el pH, intenso color rojo lo cual sólo se observó en la muestra (3). La urea (H2N – CO – NH2) se escinde en 2NH3 + CO2 http://es.scribd_doc/actividad_microbiana.com La gelatina es una proteína que se obtiene por hidrólisis parcial del colágeno y proporciona un sustrato útil para determinar la acción de las enzimas proteolíticas de los microorganismos.La hidrólisis de la proteína es importante porque se obtienen aminoácidos y producen amoníaco, fosfatos útiles para el suelo. En la licuación de gelatina, se inocularon dos tubos de microorganismos, (2)Escherichiacoli y (4)Pseudomonas fluorescentes, el tubo que contenía la siembra de E. Coli no hidrolizó, el gel se mantuvo gelificado. El que contenía la siembra dePseudomonas fluorescentes, si hidrolizó, dio positivo, la licuefacción se dio a la perfección. Proteína + H2O  polipéptidos + H2O  aminoácidos
  8. 8. Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 8 VII. CONCLUSIÓN: La liberación de amonio (compuesto de la urea), eleva el pH, intenso color rojo rosado. El agar nutriente al cual se ha añadido almidón como única fuente de carbohidratos, formando una especie de nutriente para microorganismo. Muchas bacterias liberan exoenzimas que hidrolizan la gelatina, si uno de estos organismos se inocula en un tubo de gelatina nutritiva, la gelatina cercana a las bacterias serán hidrolificadas y pasarán del estado coloidal al estado cristaloide (aminoácido). La fermentación se refiere a la degradación anaeróbica del carbohidrato y que almacena gran cantidad de energía, esta capacidad desprende a las enzimas de microorganismos. VIII. CUESTIONARIO: 1. Mencione cual es la razón de añadir indicadores ácido base a algunos medios de cultivo. Ejemplos: El ácido reacciona con la glucosa a mayor concentración de glucosa en un medio de cultivo se verán con mayor facilidad los resultados. El Escherichia colitiene la capacidad para crecer en un medio simple definido pues su capacidad para crecer en un medio simple definido significa que es capaz de sintetizar todos los componentes celulares a partir de una única fuente de carbono, en este caso la glucosa. Ejemplo:  Medio definido para Escherichia coli (glucosa 4-10gr)  Medio definido para Leuconostoc mesenteroides (glucosa 25 gr)  Medio de cultivos para (glucosa 15 gr) Escherichia coli y L. mesenteroides
  9. 9. Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 9 2. Mencione las diferencias formas de siembra realizadas en cada uno de los procedimientos y en que se diferencian Tecnica de siembra Tecnica por puntura Tecnica por suspensión Técnica por picadura profunda: Técnica estria masiva IX. Descripción Fue utilizada para realizar:  Hidrolisis de almidón; la cual fue coloreada al final.  Hidrólisis de la tributirina, en esta se observó su crecimiento microbiano. Fue utilizada para realizar:  Fermentación de la glucosa; la cual solo se observó la variación de color. Fue utilizada para realizar:  Licuación de la gelatina; donde se introdujo una asada con el cultivo hasta el fondo del tubo de ensayo. Fue utilizada para realizar:  Hidrólisis de la urea; la cual se realizó una estria en la superficie del calvo urea. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS: Broock–Biología de los Microorganismos, 10 décima edición, página 162, capitulo 6 -Crecimiento Microbiano.
  10. 10. Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General 10 Broock, Biología de los Microorganismos, 8 Ed, Prentice-Hall, 1999 Wolin, m. tratado de microbiología, 20ed, editorial interamericana, México (1973) p.p. 901 http://www.doschivos.com/display.asp?id=45&f=13547 http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/morfologiayestructurabact eriana.pdf http://imb.usal.es/practicas2/p2/practicas2.pdf

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