Diagnóstico viral
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    Diagnóstico viral Diagnóstico viral Presentation Transcript

    • Diagnóstico viral
    • Pasos útiles para el diagnóstico viral  Toma y procesamiento de una muestra clínica adecuada.  Información epidemiológica, identificación correcta y edad del paciente  Fecha de obtención de la muestra.  Averiguar si el paciente ha recibido vacunas virales o terapéutica antiviral en una fecha reciente.
    • MUESTRA CULTIVO CELULAR EXAMEN DIRECTO RESPIRATORIAS Si Inmunotinción (IF) Secreciones nasofaríngeas Si Virus sinicial respiratorio Secreciones endocraneales si Adenovirus, parainfluenza, influenza Lavaje bronquioalveolar Si sarampión Biopsia del pulmón Si Hisopado faríngeo Único método disponible GASTROINTESTINALES Solo diarrea Microscopia electrónica Heces No ayuda Rotavirus, Adenovirus, coronavirus, virus similares al Norwalk, astrovirus, calicivirus, inmunoensayo enzimático y aglutinación con latex solo para rotavirus Enfermedad sistémica (otros síntomas además de diarrea) Método de elección Heces (preferentemente) Hisopado rectal (menos adecuado) CUTÁNEAS inmunotinción Vesiculas HSV Pústulas VZV Biopsia Vaccina OCULARES Inmunotinción Lágrimas HSV Tejido VZV Adenovirus SANGUÍNEAS Uso experimental de hibridación in situ de ácidos nucleicos para CMV, EBV y detección de antígeno para HIV Anticoagulada con citrato Único método para la mayor parte de los virus GENITOURINARIAS Experimental de hibridación de ácidos nucleicos in situ para CMV Orina Si Secreción cervical vaginal / uretral Si DEL SISTEMA NEVIOSO CENTRAL LCR si Detección experimental de antígenos para HSV hibridación de cDNA/RNA para enterovirus TEJIDO ENCEFÁLICO Indispensable: la inoculación de animales puede ser esencial para virus coxsackie A, MLC y algunos arbovirus Inmunotinción para HSV o rabia Muestras sugeridas para el diagnóstico viral
    • Condiciones de las muestras  Obtenerlas en un estadio temprano de la enfermedad (dentro de las primeras 72hs).  Las muestras deben obtenerse de forma aséptica si se va a intentar el aislamiento del virus. El volumen de la muestra debe ser suficiente como para permitir la realización de los ensayos apropiados y la conservación.
    • Obtención de muestras  Hisopados: Conjuntivales, Genitales, Rectales, Mucosa oral, Lesiones cutáneas  Sangre  Aspirado nasofaríngeo  Lavado bronquioalveolar  Expectoración  Orina  Líquido cefalorraquídeo  Materia fecal  Biopsias
    • Medios de transporte de los virus  Transportar en un medio que les provea estabilidad. Esto se obtiene agregando proteínas (albúmina de bovino o gelatina). Con el agregado de antibióticos y anti fúngicos se logra prevenir el sobre desarrollo de la flora bacteriana y fúngica residente del huésped  las muestras deben transportarse a 4ºC, en recipientes estériles adecuados y con tapa hermética.  Para enviar virus de alta transmisibilidad (virus de la Hepatitis B o VIH) deberá colocarse el recipiente que contiene la muestra dentro de un contenedor de preferencia metálico con tapa de rosca y rotularse como peligro biológico.
    • Principales técnicas  Métodos directos: Características clasificación virus Aislamiento viral cultivos celulares Tiene una sensibilidad y una especificidad muy alta Cultivos 1arios, líneas celulares diploides, líneas celulares continuas, hemadsorción, hemaglutinación VRS, Adenovirus, MRC5, CMV, VRS, Echo virus, Influenza Aislamiento de CMV en líneas celulares continuas a partir de muestras de sangre entera.
    • características clasificación virus Técnicas inmunológicas Detección de antígenos - anticuerpos Inmunofluorescencia directa: identificación rápida del virus directamente sobre la muestra Test de aglutinación: detección de antígenos virales en muestras clínicas Radioinmunoensayo Enzimoinmunoanalisi s CMV, VRS, Influenza Ay B, Parainfluenza 1, 2, 3, Adenovirus, HSV tipo 1 y 2 Antígeno de Rotavirus en heces, antígeno de Adenovirus Antígeno de sup. hepatitisB
    • Características Clasificación Virus Investigación de ácidos nucleicos virales Tecnicas de biología molecular • Sondas de ac. Nucleico • sonda sintética * • Amplificación de ácidos nucleicos virales mediante una reacción en cadena de la polimerasa Citomegalovirus, Papilomavirus, Epstein Barr
    • Características: Virus Microscopia electrónica Observa morfología de viriones en muestras clínicas Rotavirus, Adenovirus, Coronavirus y Calicivirus
    • Métodos indirectos  Son aquellos que reconocen la respuesta inmune (humoral o celular) por parte del huésped: • Detección de anticuerpos específicos antivirales por técnicas inmunológicas (EIA, IFI,WB, etc.). • Producción de anticuerpos in vitro. o Este método se emplea para el diagnóstico de enfermedades como: Rubéola, Citomegalovirus, Hepatitis a virus A, VIH
    • Inmunofluorescencia indirecta Determina anticuerpos virales en el suero del paciente Enzimoinmunoanalisis indirecto Método versátil, económico, sensible y de lectura objetiva Test de aglutinación Detecta anticuerpos antivirales Western Blot Útiles para el diagnóstico de HIV Producción de anticuerpos in vitro Aplicada para el diagnostico de la infección perinatal
    • Elección de la prueba de diagnóstico: parámetros sensibilidad Proporción de personas con la infección que reaccionan positivamente en la prueba diagnóstica realizada especifidad proporción de personas sin la infección o enfermedad que reaccionan como negativos. Valor predictivo probabilidad de tener la enfermedad dado el resultado del test