Técnicas Inmunológicas Profesor Dr. Francisco Tamayo B Curso de Inmunología

Técnicas de Aglutinación Se basa en los cambios de propiedades que sufren el antígeno y el anticuerpo al formar un complejo. Características: El anticuerpo debe unir por los 2 brazos al antígeno. El antígeno debe tener más de un determinante antigénico igual. Los antígenos deben ser pequeños (partículas).

Se basa en los cambios de propiedades que sufren el antígeno y el anticuerpo al formar un complejo.

Características:

El anticuerpo debe unir por los 2 brazos al antígeno.

El antígeno debe tener más de un determinante antigénico igual.

Los antígenos deben ser pequeños (partículas).

Aglutinación Directa Se utilizan antígenos ya presentes en la superficie de las células, ej. Grupo sanguíneo. Indirecta Se pega químicamente el antígeno a la célula. Se usan hematíes o partículas de látex. Para detectar Treponema pallidum o factor reumatoide. De ser positivo se forman grumos.

Directa

Se utilizan antígenos ya presentes en la superficie de las células, ej. Grupo sanguíneo.

Indirecta

Se pega químicamente el antígeno a la célula.

Se usan hematíes o partículas de látex.

Para detectar Treponema pallidum o factor reumatoide.

De ser positivo se forman grumos.

Aglutinación con anti-inmunoglobulina Se utiliza Ig M contra la Ig G. Test de Coombs: Directo: en la sangre del niño con supuesta Ig G de la madre se añade los Ac. Anti Ig G y se ve si aglutina. Indirecto: a la sangre de la madre (con Ig G) con hematíes Rh (+) se añade anti Ig G y se ve si aglutina.

Se utiliza Ig M contra la Ig G.

Test de Coombs:

Directo: en la sangre del niño con supuesta Ig G de la madre se añade los Ac. Anti Ig G y se ve si aglutina.

Indirecto: a la sangre de la madre (con Ig G) con hematíes Rh (+) se añade anti Ig G y se ve si aglutina.

Hemaglutinación Detecta y cuantifica anticuerpos más bajas que las que son necesarias en las técnicas de electroforesis. Se basa en la capacidad de los anticuerpos para entrelazar los eritrocitos mediante su unión a antígenos presentes en su superficie.

Detecta y cuantifica anticuerpos más bajas que las que son necesarias en las técnicas de electroforesis.

Se basa en la capacidad de los anticuerpos para entrelazar los eritrocitos mediante su unión a antígenos presentes en su superficie.

Técnicas que utilizan el complemento Sirven para medir el complemento. Se observa si el complemento activo forma poros en las membranas de los GR. Se utiliza GR de ovejas, anti GR (Igs) y suero problema. La activación del complemento provocará lisis de los GR. Se observa que cantidad lisa el 50% de GR, es el CM50.

Sirven para medir el complemento.

Se observa si el complemento activo forma poros en las membranas de los GR.

Se utiliza GR de ovejas, anti GR (Igs) y suero problema.

La activación del complemento provocará lisis de los GR.

Se observa que cantidad lisa el 50% de GR, es el CM50.

Técnicas que utilizan el complemento Ү Ү Ү Ү Ү Ү Ө Ө Ө Ө Ө Ө Ү Ү Ү Ү Ү Ү

Fijación del complemento Se basa en la formación de inmunocomplejos que inducen la fijación del complemento a través de la vía clásica. Sirve para cuantificar la cantidad de antígeno o anticuerpo presente. Puede detectar anticuerpos a concentraciones inferiores a 1 μ g/dl.

Se basa en la formación de inmunocomplejos que inducen la fijación del complemento a través de la vía clásica.

Sirve para cuantificar la cantidad de antígeno o anticuerpo presente.

Puede detectar anticuerpos a concentraciones inferiores a 1 μ g/dl.

Fijación del complemento Ү Ү Ү Ү Ү Ү Ө Ө Ө Ө Ө Ө Ag ? Sin antígeno Ү Ү Ү Ү Ү Ү

Fijación del complemento Ү Ү Ү Ү Ү Ү Ө Ө Ө Ү Ү Ү Ү Ү Ү Ө Ө Ө Ag ? Con antígeno Ag

Inmunofluorescencia Detecta autoanticuerpos y anticuerpos frente a antígenos tisulares y celulares. Util para detectar antígenos en células vivas. Las células son teñidas con diferentes anticuerpos fluorescentes.

Detecta autoanticuerpos y anticuerpos frente a antígenos tisulares y celulares.

Util para detectar antígenos en células vivas.

Las células son teñidas con diferentes anticuerpos fluorescentes.

Inmunofluorescencia

Inmunofluorescencia directa Y Y Y Y Y Y Y Y G G G G G M G D G G D G G M Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y

Inmunofluorescencia indirecta Y Y Y Y Y Y Y Y G G G G G M G D G G D G G M Y Y Y Y G G G G 1° anticuerpo monoclonal no marcado 2° anticuerpo policlonal marcado Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y

Radioinmunoanálisis (RIA) Usa anticuerpos marcados radiactivamente y antígenos sin marcar. Se mide la fracción libre que queda.

Usa anticuerpos marcados radiactivamente y antígenos sin marcar.

Se mide la fracción libre que queda.

Radioinmunoanálisis (RIA)

Técnica de ELISA Enzyme Linked Inmunoabsorvent Assay. Detecta antígenos inmovilizados por anticuerpos que producen una reacción que puede ser medido. Utilidad: diagnóstico clínico, detección viral, clasificación de anticuerpos en isotipos, búsqueda de anticuerpos monoclonales.

Enzyme Linked Inmunoabsorvent Assay.

Detecta antígenos inmovilizados por anticuerpos que producen una reacción que puede ser medido.

Utilidad: diagnóstico clínico, detección viral, clasificación de anticuerpos en isotipos, búsqueda de anticuerpos monoclonales.

1° Conjugación del anticuerpo con una enzima

2° Unión del antígeno a los pocillos

3° Formación de inmunocomplejos

4° Revelado de la acción enzimática

Tipos ELISA directo: de 2 capas antígenos en pocillos + anticuerpos marcados ELISA indirecto: emplea 2 anticuerpos antígenos en pocillos + anticuerpos anti Ag + anticuerpos marcados anti Ac ELISA sandwich: anticuerpo en pocillo + ag problema + anticuerpo anti Ag

ELISA directo: de 2 capas

antígenos en pocillos + anticuerpos marcados

ELISA indirecto: emplea 2 anticuerpos

antígenos en pocillos + anticuerpos anti Ag + anticuerpos marcados anti Ac

ELISA sandwich:

anticuerpo en pocillo + ag problema + anticuerpo anti Ag