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Principios Activos Son componentes esenciales de las plantas que nos sirven parteesencial de los fármacos y es por eso que...
Principales Alcaloides en el Comercio                   ALCALOIDES                          PROCEDENCIA                   ...
Fracción Alcaloidea de la Jatrophamacrantha M. Arg. Huanarpo Macho   La fracción alcaloidea es un compuesto orgánico extra...
ACTIVIDAD TOXICOLÓGICAUno de los aspectos importantes para la evaluación de la actividad toxicológicaes la relación entre ...
DOSIS LETAL DL50  La DL50 se utiliza para encontrar umbrales de toxicidad para determinadassustancias; en el desarrollo de...
Análisis Probit Mediante Tabla FinneyEl análisis Probit requiere de la Tabla correspondiente a Finney paraConvertir el % d...
ARTEMIA SALINA (Brine Shrimps)La artemia salina es un pequeñísimo camarón que vive en las aguas salobrese hipersalinas de ...
ARTEMIA SALINA (Brine Shrimps)CLASIFICACIÓN SISTEMÁTICA   La clasificación sistemática de la artemia hasta el nivel de gén...
ARTEMIA SALINA (Brine Shrimps)Una vez puestos en agua de mar, los quistes bicóncavos se hidratan tomandoforma esférica y e...
ARTEMIA SALINA (Brine Shrimps)                     (   El primer estado larvario (también llamado estado I) mide entre 400...
ARTEMIA SALINA (Brine Shrimps)La larva continúa su crecimiento apareciendo diferenciaciones a lo largo de las15 mudas. Así...
IMPORTANCIA DE LA ARTEMIA SALINA         EN LAS INVESTIGACIONESActualmente, la Artemia salina se utiliza como especie de b...
DESARROLLO EXPERIMENTAL              Toxicidad frente artemia salinaDESCAPSULAMIENTO DE QUISTES DE ARTEMIA SALINA Hidrata...
PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES         A EVALUAR   Las fracciones de alcaloides obtenidas denominadas ECl2(Estafracción pro...
BIOENSAYOLuego de incubar los huevos de artemia salina por 24 horas, secolectaron las artemias con una pipeta Pasteur, a c...
BIOENSAYOLuego de la incubación se examinaron los tubos de ensayo, haciendo elrespectivo conteo de la cantidad de artemias...
RESULTADOSDOSIS LETAL (DL50) DE LA FRACCIÓN ECl2    Dosis   Log (Dosis)   Porcentaje de    Probit    (ppm)                ...
Grafico Porcentaje de Mortalidad (%) VS              Log (Dosis)
Grafico de Log (Dosis) VS Probit
CÁLCULO DE LA DOSIS LETAL DL50      PARA LA FRACCIÓN ECl2CALCULO EXPERIMENTAL:M = 0.50 – 0.4071M = 0.0929 Log DL50 = Log (...
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Grafico Porcentaje de Mortalidad (%) VS              Log (Dosis)
Grafico de Log (Dosis) VS Probit
CÁLCULO DE LA DOSIS LETAL DL50      PARA LA FRACCIÓN EEATCALCULO EXPERIMENTAL :M = 0.50 – 0.3407M = 0.1593Log DL50 = Log (...
CONCLUSIONES   En el transcurso del presente estudio de investigación el ensayo de    letalidad en Artemia Salina es muy ...
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS   Finney, D. J., Ed. (1952). Probit Analysis. Cambridge, England,    Cambridge University Pres...
Investigando por un sueño, la Ciencia.!!!
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Renée Condori apaza. Actividad toxicologica de la Fracción Alcaloidea de los Tallos de la Jatropha macrantha M. Arg. (Huanarpo macho) en Artemia Salina (Brine Shrimps).

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La actividad toxicológica es la relación entre la concentración de un compuesto químico a la cual se expone un organismo y el consecuente efecto nocivo que le produce. Esta relación, conocida como relación dosis-respuesta, constituye entonces la base para la evaluación del peligro y el riesgo generado por las sustancias químicas en el medio donde se encuentren las muestras biológicas.

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Renée Condori apaza. Actividad toxicologica de la Fracción Alcaloidea de los Tallos de la Jatropha macrantha M. Arg. (Huanarpo macho) en Artemia Salina (Brine Shrimps).

  1. 1. Universidad Nacional San Agustín de ArequipaACTIVIDAD TOXICOLOGICA DE LA FRACCION ALCALOIDEADE LOS TALLOS DE LA Jatropha macrantha M. Arg.(Huanarpo macho) EN ARTEMIA SALINA (Brine Shrimps). RENEE M. CONDORI APAZA EVELYN K. PAREDES PAREDES
  2. 2. ANTECEDENTES GENERALESJUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA DEL TRABAJO DE INVESTIGACIÓN La Jatropha macrantha M.Arg. (huanarpo macho) es una planta silvestre con sustancias químicas de gran utilidad en medicina, siendo usada por los pobladores de las zonas rurales como energizante, sin tener conocimiento que probablemente puedan causar algunos efectos secundarios en su salud; por ello el estudio científico del vegetal nos sirve para conocer el grado toxicológico de la fracción alcaloidea de esta planta, por lo que la evaluación de la actividad toxicológica de la fracción alcaloidea se hace imprescindible, para poder tener un criterio científico sobre el uso de esta planta tan difundida entre nuestra población.
  3. 3. OBJETIVOSOBJETIVO GENERAL Estudiar actividad toxicológica de la fracción alcaloidea de los tallos de la Jatropha macrantha M. Arg. (Huanarpo macho) en artemia salina (Brine Shrimps)OBJETIVOS ESPECIFICOS. Incubar y obtener la artemia salina (larvas marinas) en el estadio adecuado para realizar nuestras pruebas de toxicidad. Evaluar la actividad toxicológica de las fracciones alcaloideas obtenidas mediante el método del DL5o en Artemia salina.
  4. 4. Jatropha macrantha M. Arg. Huanarpo Macho Esta especie pertenece a la familia Euphorbiaceae,comprende alrededor de 290 géneros y más de 750especies, casi cosmopolitas, particularmente rica entrópicos, pero extendiéndose a las regiones templadasde ambos hemisferios. En el Perú comprende 57géneros, 305 especies de las cuales 88 son endémicas.Las especies endémicas más comunes son: Jatrophacurcas L. y la Jatropha macrantha M. Arg. Es un arbusto monoico algo suculento, hojas alternaspartidas palmadas trilobadas, presenta inflorescenciareunidas en el ápice de las ramas, flores hermafroditasactinomorfas, cáliz y corola presentes, sépalospentámeros con estambres, numerosos filamentoslibres, ovario súpero trilocular, fruto capsular divididoen tres monocarpos. Arbusto latescente endémico, conflores rojas.
  5. 5. Principios Activos Son componentes esenciales de las plantas que nos sirven parteesencial de los fármacos y es por eso que no todos loscomponentes químicos elaborados por la planta, poseen igualinterés para la fitoquímica .Los denominados “principios activos”son frecuentemente alcaloides o heterósidos; ambos merecen,por ello, especial atención. Otros grupos, como los glúcidos,grasas y proteínas, tienen importancia dietética y muchos, comolos almidones y las gomas, se emplean en técnica farmacéutica,aunque carecen de señalada acción farmacológica. Otrassustancias como el oxalato cálcico, sílice, lignina y materialescolorantes, pueden ser materias coadyuvantes en laidentificación de drogas y en la detección de adulteraciones.
  6. 6. Principales Alcaloides en el Comercio ALCALOIDES PROCEDENCIA ACCIÓN FISIOLÓGICA SALES OFICIALES1. Aconitina Aconitum napellus Diurético, sudorífico, antineurálgico, anestésico local.2. Apomorfina Deshidratación de la morfina Cardiodepresor, emético, expectorante sedativo, hipnótico. Clorhidrato3. Arecolina Areca catechu Catártico, sialagogo, miótico, antihelmíntico. Bromhidrato4. Atropina Beleño, belladona, plantas del género Datura y otras Antiespasmódico, estimulante, anhidrótico, antisialagogo, Sulfato solanáceas. analgésico, midriático.5. Berberina Agracejo Antiperiódico, estomáquico, tónico.6. Brucina Nuez vómica Como la estricnina pero más débil. Sulfato7. Cinconidina Quina Tónico, antiperiódico, como la quinina, pero más débil. Sulfato8. Cinconina Quina Tónico, antiperiódico, como la quinina, pero más débil. Sulfato9. Cocaína Hojas de coca y de otras especies del género Erythroxylon Estimulante, anestésico local, sedante, antisialagogo, Clorhidrato midriático, anodino, anhidrótico, antiprurítico.10. Codeína Metilación de la morfina. Analgésico, hipnótico, sedante. Fosfato, sulfato.11. Colquicina Colchicum autumnale Antigotoso, antirreumático, antineurálgico, analgésico.12. Efedrina Efedra Vasoconstrictor, para el tratamiento de la fiebre del heno, Clorhidrato, sulfato asma, insuficiencia circulatoria, envenenamiento con narcóticos.13. Emetina Ipecacuana Emético, expectorante, antipirético, amebicida (específico en Clorhidrato la disentería amibiana).14. Ergonovina Oxitócico, hemostático uterino. Maleato15. Ergotamina Cornezuelo Oxitócico, hemostático uterino, antineurálgico en la jaqueca. Tartrato16. Escopolamina Género Datura y otras solanáceas Midriático, hipnótico, sedante. Bromhidrato17. Esparteína Spartium scoparius, Anagyris foétida Estimulante cardiaco, diurético.18. Estricnina Nuez vómica Tónico, estimulante, eximotor. Nitrato, fosfato, sulfato19. Fisostigmina Physostigma venenosum Sedante, antineurálgico, diaforético, depresor purgante, Salicilato miótico, sialagogo, antitetánico.20. Hidrastina Hydrastis canadensis Antiséptico, astringente, hemostático, tónico, alterante, emenagogo, sedante cardiaco.21. Hiosciamina Beleño, belladona, plantas del género Datura y otras Hipnótico, sedante cerebral, midriático Bromhidrato, sulfato solanáceas22. Lobelina Lobelia Expectorante, emético, estimulante respiratorio23. Morfina Opio ( 15%) Narcótico, sedante, hipnótico, analgésico. Clorhidrato, sulfato24. Nicotina Tabaco Irritante local, paralizante, parasiticida25. Pilocarpina Jaborandi Diurético, sialagogo, galactogogo, galactagogo, miótico, Clorhidrato, nitrato diaforético.26. Quinidina Quina Inhibidor de la fibrilación auricular, antiperiódico, tónico, Sulfato, gluconato antiséptico.27. Quinina Quina Tónico, emenagogo, antiperiódico, antiséptico, antipirético. Sulfato, bisulfato, clorhidrato, diclorhidrato, fosfato28. Yohimbina Yohimbe Afrodisiaco, anestésico local, midriático.
  7. 7. Fracción Alcaloidea de la Jatrophamacrantha M. Arg. Huanarpo Macho La fracción alcaloidea es un compuesto orgánico extraidomediante procesos químicos de una planta de origen natural(generalmente vegetal), nitrogenado, derivados generalmente deaminoácidos, mas o menos básicos, de distribución restringida,con propiedades farmacológicas importantes a dosis bajas y queresponden a reacciones comunes de precipitación.
  8. 8. ACTIVIDAD TOXICOLÓGICAUno de los aspectos importantes para la evaluación de la actividad toxicológicaes la relación entre la concentración de un compuesto químico a la cual seexpone un organismo y el consecuente efecto nocivo que le produce. Estarelación, conocida como relación dosis-respuesta, constituye entonces la basepara la evaluación del peligro y el riesgo generado por las sustancias químicasen el medio donde se encuentren las muestras biológicas. La actividad biológica es la capacidad que tiene el material de interactuarquímicamente con los tejidos del organismo, es una expresión que describe losefectos beneficiosos o nocivos de una droga o extracto en organismos vivos. Tanto las investigaciones biológicas básicas como las investigacionesaplicadas, han determinado muchos adelantos importantes de la cienciamédica. Por eso resulta indispensable seguir realizando investigaciones enambas clases con el fin de descubrir las causas, mecanismos, prevención ytratamiento de enfermedades que aun no son bien conocidas por el hombre, asícomo para probar la eficacia e inocuidad de muchos de los principios activosutilizados en medicina humana y veterinaria, y en general para avanzar en elconocimiento biológico.
  9. 9. DOSIS LETAL DL50 La DL50 se utiliza para encontrar umbrales de toxicidad para determinadassustancias; en el desarrollo de pesticidas se utiliza para determinar loslímites de resistencia de insectos, por ejemplo, ante ciertos biocidas. En lainvestigación fitoquímica valiéndose del principio de la farmacología essimplemente la toxicología a bajas concentraciones o toxicología es lafarmacología a concentraciones altas, se puede correlacionar la bioactividadcon el valor de la DL50 y al mismo tiempo su grado de toxicidad. La determinación de la DL50 requiere de la estadística cuantal, para lo cual esnecesario transformar los valores de respuesta obtenidos en unidades Anglit,Logit o Probit y las dosis suministradas en unidades logarítmicas conocidascomo dosis metamétricas. Existen algunos programas especializados querealizan este tipo de cálculos automáticamente, pero su confiabilidaddepende de la persona o institución que los haya desarrollado. El periodo de tiempo durante el cual se expone el estimulo debe serespecificado, por ejemplo, 24 horas, esto con el fin de comparar y estimar lapotencia relativa del estimulo. Como organismo de prueba se puede utilizarArtemia salina.
  10. 10. Análisis Probit Mediante Tabla FinneyEl análisis Probit requiere de la Tabla correspondiente a Finney paraConvertir el % de mortalidad a Probits .
  11. 11. ARTEMIA SALINA (Brine Shrimps)La artemia salina es un pequeñísimo camarón que vive en las aguas salobrese hipersalinas de todo el mundo. Este pequeño crustáceo pertenece a lasubclase de los anostráceos su nombre científico es Brine Shrimps yconforma el plancton de las aguas continentales salobres. Son unos pequeños seres (alrededor de dos centímetros de longitud comomáximo) que no paran quietos en ningún momento, moviendo su colafrenéticamente, y realizando multitud de tareas mientras los observamos.En su estado adulto alcanza un tamaño de 8 - 13 mm. de longitud.
  12. 12. ARTEMIA SALINA (Brine Shrimps)CLASIFICACIÓN SISTEMÁTICA La clasificación sistemática de la artemia hasta el nivel de género es dado por Flossner (1972):Clase: CrustaceaSubclase: BranquiopodaOrden: AnostracaFamilia: ArtemiidaeGénero: ArtemiaMORFOLOGÍA Y CICLO DE VIDA Los lagos salados y estanques de las salinas con poblaciones de Artemia se encuentran distribuidos por todo el mundo. En ciertos momentos del año, grandes cantidades de minúsculas partículas marrones (de 200 a 300 micras de diámetro) aparecen flotando en la superficie del lago y son arrojadas sobre las orillas por la acción de las olas y el viento. Este polvo aparentemente inerte está formado por quistes secos inactivos en estado de criptobiosis (“durmientes”) manteniéndose así tanto tiempo como permanezcan secos.
  13. 13. ARTEMIA SALINA (Brine Shrimps)Una vez puestos en agua de mar, los quistes bicóncavos se hidratan tomandoforma esférica y el embrión recobra su metabolismo reversible interrumpido.Tras unas 24 horas la membrana externa de los quistes se rompe (“breaking”)y aparece el embrión rodeado de la membrana de aclosión. Durante las horassiguientes, el embrión abandona completamente la cáscara del quiste:colgando entretanto de la cáscara vacía a la cual permanece todavía unido(estado de “umbrella”). Dentro de la membrana de eclosión se completa eldesarrollo del nauplio, sus apéndices comienzan a moverse y en un breveperiodo de tiempo la membrana de eclosión se rasga (= “hatching”)emergiendo el nauplio que nada libremente.
  14. 14. ARTEMIA SALINA (Brine Shrimps) ( El primer estado larvario (también llamado estado I) mide entre 400 y 500micras de longitud, tiene un color pardo anaranjado (por acumulación dereservas vitelinas) y posee tres pares de apéndices: el primer par de antenas(también llamadas anténulas y que tienen una función sensorial) el segundo parde antenas (con función locomotora y filtradora) y las mandíbulas (con unafunción de toma de alimento). Un único ocelo de color rojo también llamado ojonauplial se encuentra situado en la cabeza entre el primer par de antenas. Lacara ventral del animal se encuentra cubierta por un amplio labro que intervieneen la toma de alimento (transfiriendo las partículas desde las setas filtradorashasta la boca). El estado larvario I no se alimenta ya que su aparato digestivono es todavía funcional (permaneciendo aún cerrados la boca y el ano). Tras aproximadamente 24 horas, el animal muda al segundo estado larvario(también llamado estado II). Pequeñas partículas alimenticias (tales comocélulas de microalgas, bacterias, detritus) con un tamaño que varía entre 1 y 40micras son filtradas por el segundo par de antenas, siendo entonces ingeridaspor un aparato digestivo ya funcional.
  15. 15. ARTEMIA SALINA (Brine Shrimps)La larva continúa su crecimiento apareciendo diferenciaciones a lo largo de las15 mudas. Así van apareciendo unos apéndices lobulares pares en la regióntorácica que se diferenciarán posteriormente en toracópodos, se desarrollanojos complejos laterales a ambos lados del ojo nauplial. Desde el estado X enadelante, se producen importantes cambios tanto morfológicos comofuncionales por ejemplo: las antenas pierden su función locomotriz y setransforman en elementos de diferenciación sexual. Los futuros machosdesarrollan unos apéndices curvados y prensiles mientras que las antenas delas hembras degeneran en apéndices sensoriales. Los adultos de Artemiamiden hasta 10 mm de longitud en las poblaciones bisexuales y hasta 20 mmen las poblaciones partenogeneticas.
  16. 16. IMPORTANCIA DE LA ARTEMIA SALINA EN LAS INVESTIGACIONESActualmente, la Artemia salina se utiliza como especie de bioensayo para una variedad deobjetivos tales como: Investigación de la fuente de toxicidad en mezclas de sustancias químicas y muestras ambientales, tamizaje de toxicidad aguada de sustancias químicas, detección de toxinas naturales en comestibles y farmacéuticos, estudios de modelos de acción toxica de sustancias, y estudios de la transferencia trófica de contaminantes. El potencial de Artemia para investigación y aplicaciones en toxicología acuática se ha explorado desde 1975 en el laboratorio de Investigación Biológica en Toxicología Acuática de la Universidad Estatal de Ghent, Bélgica. En 1981 se desarrollo el primer ensayo estandarizado de ecotoxicología marina: el ensayo ARC (Agencia de Residuos de Cataluya), que es un ensayo de 24 horas para determinar la concentración letal media (CL50 o DL50) en nauplios de instares II y III. La confiabilidad y precisión de este ensayo fue investigado durante un extenso ejercicio de calibración involucrando a 80 laboratorios americanos y europeos, dando resultados muy satisfactorios. La experiencia obtenida desde entonces ha abierto el camino para mejorar uno de los ensayos de tamizaje más sencillos, más reproducible y rentable en toxicología acuática
  17. 17. DESARROLLO EXPERIMENTAL Toxicidad frente artemia salinaDESCAPSULAMIENTO DE QUISTES DE ARTEMIA SALINA Hidratar el huevo de artemia y tenerlo por una hora con aireación. Lavar los quistes con HCl 1 N (4 – 7 min). Regresar los huevos al papel filtro y lavarlos con agua de la llave hasta que pierdan el olor a cloro (unos 5 minutos). Pasar los huevos a la incubadora con agua de mar y esperar la eclosión en 24 horas, teniendo en cuenta las siguientes especificaciones: T = 26 a 28 ºC. Salinidad = 325 gr/l. o 1.022 Tiempo de 24 a horas. Oxigenación casi a saturación
  18. 18. PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES A EVALUAR Las fracciones de alcaloides obtenidas denominadas ECl2(Estafracción proviene de extracción clorofórmica) y EEAT (Esta fracciónproviene del extracto de acetato de etilo de alcaloides totales) por losmétodos descritos anteriormente libres de los diferentes solventesque los extrajeron (estado sólido) se disolvieron en dimetilsulfóxido(DMSO ≤ 0.2 %), para formar una solución patrón de 15000 ppm en elcaso de la fracción ECl2 y una solución patrón de 10000 ppm en elcaso de la fracción EEAT, a partir de las cuales se prepararon lasdiluciones para obtener diferentes concentraciones.
  19. 19. BIOENSAYOLuego de incubar los huevos de artemia salina por 24 horas, secolectaron las artemias con una pipeta Pasteur, a cada tubo deensayo se agregó 10 de estos organismos, cada tubo contenía 5 mlsolución salina, las diluciones preparadas y levadura que se usocomo alimento adicional para las artemias. Se incluyeron gruposcontrol y blanco en cada evaluación (solución salina y soluciónsalina + DMSO), dichos tubos se incubaron en el equipo de cultivopara artemia salina con oxigenación. La evaluación se inicio en formaparalela. Los experimentos se establecieron bajo un diseñocompletamente aleatorio, con cuatro repeticiones incluyendo losgrupos control y blanco. La evaluación de mortalidad de artemiasalina se registró a las 24 horas después de la aplicación de lostratamientos.
  20. 20. BIOENSAYOLuego de la incubación se examinaron los tubos de ensayo, haciendo elrespectivo conteo de la cantidad de artemias salinas muertas (nomóviles).Se procedió de la misma manera en las dos muestras seleccionadas aevaluar (ECl2 y EEAT). El cálculo de la concentración de la fracción osustancia que provocó la muerte del 50% de las artemias se determinó através del análisis Probit.
  21. 21. RESULTADOSDOSIS LETAL (DL50) DE LA FRACCIÓN ECl2 Dosis Log (Dosis) Porcentaje de Probit (ppm) Mortalidad (%) 46.88 1.67 9.20 3.67 93.75 1.97 23.64 4.28 187.5 2.27 40.71 4.76 375 2.57 59.56 5.24 750 2.87 78.99 5.80 1500 3.17 95.60 6.70
  22. 22. Grafico Porcentaje de Mortalidad (%) VS Log (Dosis)
  23. 23. Grafico de Log (Dosis) VS Probit
  24. 24. CÁLCULO DE LA DOSIS LETAL DL50 PARA LA FRACCIÓN ECl2CALCULO EXPERIMENTAL:M = 0.50 – 0.4071M = 0.0929 Log DL50 = Log (187.5) + (0.0929 Log 2) Log DL50 = 2.273 + 0.0279 Log DL50 = 2.3009 DL50 = 199.94 ppmCALCULO SEGÚN FINNEY: y = 1.922x + 0.4217Donde: y = 5 5 = 1.9229x + 0.4217 1.9229x = 5 – 0.4217 x = 5 – 0.4217 / 1.9229 x = 2.38 Como x = Log dosis Log dosis = 2.38 Dosis = 239.88 ppm
  25. 25. DOSIS LETAL (DL50) DE LA FRACCIÓN EEAT Dosis Log (Dosis) Porcentaje de Probit (ppm) Mortalidad (%) 31.25 1.49 6.86 3.50 62.5 1.80 17.22 4.05 125 2.09 34.07 4.58 250 2.40 53.91 5.09 500 2.70 75.76 5.68 1000 3.00 91.33 6.35
  26. 26. Grafico Porcentaje de Mortalidad (%) VS Log (Dosis)
  27. 27. Grafico de Log (Dosis) VS Probit
  28. 28. CÁLCULO DE LA DOSIS LETAL DL50 PARA LA FRACCIÓN EEATCALCULO EXPERIMENTAL :M = 0.50 – 0.3407M = 0.1593Log DL50 = Log (125) + (0.1593 Log 2) Log DL50 = 2.0969 + 0.0479 Log DL50 = 2.1448 DL50 = 139.57 ppmCALCULO SEGÚN FINNEY : y = 0.561x + 2.91Donde: y = 5 5 = 0.561x + 2.91 0.561x = 5 – 2.91 x = 5 – 2.91 / 0.561 x = 2.09 Como x = Log dosis Log dosis = 2.09 Dosis = 123.02 ppm
  29. 29. CONCLUSIONES En el transcurso del presente estudio de investigación el ensayo de letalidad en Artemia Salina es muy usualmente utilizado para evaluar la bioactividad de extractos de plantas y muy en especial en especies de plantas de medicina tradicional, por tanto mediante la DL50 se logro obtener la dosis letal de las fracciones alcaloideas siguientes; con respecto a la primera fracción alcaloidea EEAT = 123.02 ppm y la segunda fracción alcaloidea ECl2 = 239.88 ppm. En el ensayo de letalidad por medio de las artemias salinas en el estadio de nauplio que es el más adecuado para este análisis podemos decir que el posible mecanismo por el cual actúan los extractos de la fracción alcaloidea es a traves de la bomba sodio y potasio ya que está presente en toda célula viva.
  30. 30. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS Finney, D. J., Ed. (1952). Probit Analysis. Cambridge, England, Cambridge University Press. Finney, D. J. and W. L. Stevens (1948). "A table for the calculation of working probits and weights in probit analysis." Biométrica 35(1-2). Greenberg, B. G. (1980). "Chester I. Bliss, 1899-1979." International Statistical Review / Revue Internationale de Statistique 8(1). Bordwell F.G. (1988). Equilibrium acidities in dimethyl sulfoxide solution. The Survival of Artemia Salina (Brine Shrimp) in various media, P. C. Croghan-Department of Zoology, University of Cambridge (Received 10 July 1957). Boone, E. & Baas Becking, L. G. M. (1931). Salt effects on eggs and nauplii of Artemia talina L.J. gen. Pkytiol. Jacobi, E. F. & Baas Becking, L. G. M. (1933). Salt antagonism and effect of concentration innauphi of Artemia salina L. Tijdschr. ned. Dierk..
  31. 31. Investigando por un sueño, la Ciencia.!!!

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