Renée Condori Apaza.Estudio fitoquimico y extracción de fracción alcaloidea Jatropa m.

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El estudio fitoquimico y extracción de la fracción alcaloidea de la Jatropa M. (Huanarpo macho), se realizo con la finalidad de demostrar la presencia de Alcaloides (Familia de la codeina) porque la …

El estudio fitoquimico y extracción de la fracción alcaloidea de la Jatropa M. (Huanarpo macho), se realizo con la finalidad de demostrar la presencia de Alcaloides (Familia de la codeina) porque la población lo consume como un medicamento tradicional.

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  • 1. Universidad Nacional San Agustín de ArequipaESTUDIO FITOQUIMICO Y EXTRACCION DE LAFRACCION ALCALOIDEA DE LOS TALLOS DE LA Jatropha macrantha M. Arg. (Huanarpo macho) EVELYN K. PAREDES PAREDES RENEE M. CONDORI APAZA 1
  • 2. ANTECEDENTES GENERALESJUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA DEL TRABAJO DE INVESTIGACIÓN La especie Jatropha macrantha, planta silvestre que pertenece a la flora de losAndes del Perú y crece en lugares pedregosos y secos, se le atribuye propiedadesenergizantes, estimulantes, reconstituyentes, a las raíces de la planta como a latintura de las ramas, se sabe que son de origen natural y de distribución restringida. Contiene sustancias químicas de gran utilidad en medicina, siendo usada por lospobladores de las zonas rurales como energizante, sin que ellos tenganconocimiento que probablemente puedan causar algunos efectos negativos en susalud; por ello el estudio científico del vegetal que sirve para conocer susconstituyentes químicos, identificarlos y así de manera científica recomendar orechazar su uso. Existen en general pocos estudios sobre la especie Jatropha macrantha M.Arg.(huanarpo macho), siendo preciso resaltar los estudios previos que se han realizadoy que han permitido determinar la alta presencia de proantocianidinas B-3,catequinas y derivados catequínicos en los tallos de la Jatropha macrantha M. Arg.,mas no se tiene información precisa sobre la presencia de alcaloides y del gradotoxicológico de alguna de sus fracciones de esta planta, por lo que la evaluación dela actividad toxicológica de la fracción alcaloidea se hace imprescindible, para podertener un criterio científico sobre el uso de esta planta tan difundida entre nuestrapoblación. 2
  • 3. OBJETIVOSOBJETIVO GENERAL Estudiar fitoquímicamente y extraer la fracción alcaloidea de los tallos de la Jatropha macrantha M. Arg. (Huanarpo macho).OBJETIVOS ESPECIFICOS. Caracterizar taxonómicamente la muestra vegetal. Recolectar y seleccionar la planta para su respectivo tratamiento preliminar. Preparar el extracto metanólico de los tallos de la Jatropha macrantha M. Arg. Identificar los grupos funcionales y metabolitos secundarios presentes en el extracto metanólico de los tallos de la Jatropha macrantha M. Arg. mediante reacciones cualitativas generales y la marcha fitoquímica preliminar. Extraer la fracciones alcaloideas del extracto metanólico de los tallos de la Jatropha macrantha M. Arg. por los métodos de maceración y soxhlet. Identificar los alcaloides extraídos mediante el uso de reacciones específicas para alcaloides. 3
  • 4. LOS VEGETALES Se llama vegetal a los organismos estudiados por los botánicos, masconocidos como plantas. Los vegetales producen una vasta y ampliacantidad de compuestos orgánicos, que participan directamente en elcrecimiento y desarrollo de las plantas estas se delimitan en grupostaxonómicos del reino vegetal. Las moléculas orgánicas denominadas “Metabolitos Secundarios” en laactualidad son objeto de estudio por parte de los países desarrollados yempresas transnacionales en los diferentes campos científicos eindustriales, gracias al creciente interés de estos países y organizacionesen registrar y patentar los nuevos productos naturales y sus derivados. ElPerú tiene una enorme biodiversidad debido a las condiciones favorablesde su geografía, por lo que cada esfuerzo en investigar los productosnaturales contribuye a proteger nuestro patrimonio natura. En general podemos mencionar a los alcaloides, flavonoides, glicósidos,fitoesteroles, terpenos, aceites esenciales, carotenoides, todos estoscompuestos que al ser extraídos de su matriz tienen una utilidad potencial,ya sea como aditivos de alimentos, fármacos y plaguicidas de origennatural, estos últimos de gran aceptación en los mercados de estassustancias por ser de probada eficacia y prácticamente inocuos al medioambiente . 4
  • 5. Los fármacos se pueden originar a partir de sustancias:• Vegetales• Animales• MineralesDROGA : Toda sustancia simple o compuesta, natural o sintética que puede emplearse en la elaboración de medicamentos, medios de diagnóstico, productos dietéticos, higiénicos, cosméticos u otra forma que pueda modificar la salud de los seres vivos.MEDICAMENTO : Toda droga o preparación efectuada con drogas que por su forma farmacéutica y dosis puede destinarse a la curación, al alivio, a la prevención o al diagnóstico de las enfermedades de los seres vivos.REMEDIO : Todo aquello que sirve para prevenir, aliviar o curar enfermedades. Abarca todos los recursos para ese fin. Ej. Droga, medicamento, hipnosis, masajes, ultrasonidos, etc. 5
  • 6. Jatropha macrantha M. Arg. Huanarpo MachoCLASIFICACIÓN TAXONÓMICA Reino Vegetal División Magnoliophita Clase Magnoliopsida Subclase Rosidae Orden Euphorbiales Familia Euphorbiaceae Género (Euphorbia) Jatropha Especie Jatropha macrantha Nombre Científico Jatropha macrantha Muell. Arg. Sinonimia Huanarpo macho, barbasco, huanarpo de canta, palo de grado, urco huanarpo. 6
  • 7. Jatropha macrantha M. Arg. Huanarpo Macho HÁBITAT ECOLÓGICO Arbusto endémico que crece frecuentemente en los lugares pedregosos de la zona baja de la Sierra: laderas ubicadas entre los 1080 y 1350 m.s.n.m., en los departamentos de Arequipa, Cajamarca, Lambayeque, La Libertad, Ancash, Lima y Huanuco. 7Fuente : Bióloga Fátima Cáceres Huamaní.
  • 8. Jatropha macrantha M. Arg. Huanarpo Macho Especie pertenece a la familia Euphorbiaceae, comprende alrededor de 290 géneros y más de 750 especies, casi cosmopolitas, particularmente rica en trópicos, pero extendiéndose a las regiones templadas de ambos hemisferios. En el Perú comprende 57 géneros, 305 especies de las cuales 88 son endémicas. Las especies endémicas más comunes son: Jatropha curcas L., y la Jatropha macrantha M. Arg.USOS Y PROPIEDADES ETNOBOTÁNICAS Dentro de la gran variedad de plantas que se usan por la población en la curación de sus dolencias, la Jatropha macrantha M. Arg. (huanarpo macho) cumple una acción reconstituyente, energizante, estimulante del sistema nervioso central, antibronquial, antidiabético, béquico y antiasmático que fueron conocidas desde la época de los Incas. También se tiene que tanto las raíces como la tintura de los tallos tienen acción afrodisíaca. Teniendo eficacia mejor que el viagra para combatir la disfunción eréctil y los problemas de reproducción sexual en personas mayores de edad. Los antiguos peruanos, tras secarlo a la sombra, trituraban el fruto o lo hacían hervir. Luego lo tomaban como estimulante sexual o vigorizante para las largas marchas de los soldados o en los duros trabajos en la construcción de edificios 8
  • 9. Jatropha macrantha M. Arg. Huanarpo MachoANTECEDENTES CIENTÍFICOS Estudios en algunas plantas del género Jatropha como es el caso de la Jatropha – Gossipifolia Linn reporta que tiene gran cantidad de alcaloides, aislando cuatro tipos, dos como imidazoles y los otros como alcaloides piperidínicos. Con respecto a los trabajos de investigación de la Jatropha macrantha M. Arg. se reporta que estudios hechos en Japón tanto en la Jatropha macrantha M. Arg. (huanarpo macho), como el Lepidium meyenii Walp (maca) tienen efectos muy significativos sobre la testosterona y progesterona evaluados estos en ratas y en embriones de los mismos. También se tiene que estudios en el extracto metanólico de los tallos de esta planta en Italia demostraron que contenía catequiza 7-o-β-glupiranoso y proantocianidinas B-3 junto con otros polímeros catequínicos, sus estructuras fueron establecidas por el NMR y ESI/MS experimentalmente; además se realizo análisis cualitativos y cuantitativos de la función fenólica. 9
  • 10. BIOSÍNTESIS DE PRODUCTOS NATURALES Todos los organismos necesitan transformar e interconvertir una gran variedad de compuestos orgánicos para poder vivir, crecer y reproducirse. Ellos necesitan proporcionarse energía en la forma de ATP, y una variedad de bloques de construcción para armar sus propios tejidos. Relación entre Metabolitos Primarios y Secundarios 10
  • 11. REACCIONES COMUNES EN LA BIOSÍNTESIS DE ALCALOIDES Los aminoácidos como precursores de los alcaloides, sufren una serie de transformaciones típicas que se resumen en: Formación de bases de Schiff (genera enlaces C=N) La formación de enlaces C-N es frecuentemente llevada a cabo por reacciones de condensación entre aminas o aldehídos o cetonas. Una típica adición nucleofílica se sigue por eliminación de agua para dar una imina o base de Schiff. Condensación Mannich (genera enlaces C-C-N), es una condensación entre un carbanión (orto o para de grupo fenólico), un aldehido o cetona y una amina primaria o secundaria. La reacción de Mannich es frecuente en la biosíntesis de alcaloides. Las aminas secundarias reaccionarán con el grupo carbonilo para dar un ión iminio (base de Schiff cuaternaria), y así el paso de protonación adicional no es necesario. 11
  • 12. MÉTODOS DE EXTRACCIÓNMACERACIÓN Es un método de extracción sólido-líquido, el producto sólido (materia prima) posee una serie de compuestos solubles en el líquido extractante que son los que se pretende extraer. La extracción se realiza a temperatura ambiente de entre 15º y 20 ºC.DIGESTIÓN Consiste en someter la materia prima a la acción prolongada de un líquido, en vasija cerrada, a temperatura comprendida entre 32ºC y el punto de ebullición del solvente usado. El modo de calentar el líquido varía según las circunstancias y puede hacerse a fuego lento, en baño de arena o en baño maría.EXTRACCIÓN SOXHLET Se fundamenta en una extracción continua, en la cual el material sólido se encuentra en contacto con el solvente, reflujando varias veces. 12
  • 13. ALCALOIDESSon sustancias orgánicas nitrogenadas con propiedades básicas y acciónfisiológica enérgica que tienen la peculiaridad de presentar un conjunto dereacciones químicas.La diversidad estructural y la variedad en la actividad biológica, hacen de losalcaloides como también de los antibióticos, uno de los grupos másimportantes entre las sustancias naturales de interés terapéutico .Presentan notables propiedades fisiológicas y toxicológicas, que se ejercenfundamentalmente sobre el sistema nervioso central, con predominio enalguno de sus niveles. Por estas razones pueden ser usados como fármacos.El uso prolongado de alguno de estos de estos compuestos produce en elhombre dependencia, que constituyen verdaderas toxicomanías, condependencia física y psíquica y un aumento de la tolerancia. 13
  • 14. QUÍMICA DE LOS ALCALOIDESEl alcaloide es un compuesto orgánico de origen natural (normalmente vegetal),nitrogenado, más o menos básico, de distribución restringida y dotado, a bajas dosis, demarcadas propiedades farmacológicas. No son alcaloides los aminoácidos, las betalaínas,los péptidos, los amino azúcares, las vitaminas nitrogenadas, las porfirinas, algunas basescomo la tiamina ampliamente distribuida en los seres vivos y los alkil aminas de bajo pesomolecular. Algunos autores hacen una diferenciación entre alcaloides verdaderos,protoalcaloides, pseudoalcaloides y alcaloides imperfectos. AcetilCoA MalonilCoA Proteinas N2 Aminoácidos Mevalonato Policétidos Aminoácidos Aminoácidos modificados -CO2 -CO2 NH 3 Alcaloides imperfectos No cíclicas Isoprenoides Policetidos Aminas Protoalcaloides aminados aminados Cíclicas Pseudo alcaloides Alcaloides verdaderos Aspectos biogenéticos para la clasificación de los alcaloides 14
  • 15. Estructura de los Alcaloides H H2C C CH2 NR R N CH3 CH2 R N H2C CH CH2 AMINAS ALIFATICAS NH2 PIRIDINICOS TOPANICOS AMINAS AROMATICAS N N FENANTRENICOSQUINOLINICOS ISOQUINOLINICOS N N N N N N H H NINDOLICOS IMIDAZOLICOS PURINICOS 15 CICLOPENTANOPERHIDROFENANTRENO
  • 16. CLASIFICACION DE ALCALOIDES Piperidínicos-piridínicos: NICOTINA, arecolina (Areca cateccu), se utiliza contra cestodes. Tropánicos: cocaína, escopolamina, atropina. Anticolinérgicos obtenidos de Atropa belladona. Quinolínicos: derivados de la cinchona Cinchona succirubra, árbol del Perú, sulfato y gluconato de quinidina, se emplean en tratamiento de arritmias cardíacas; y quinina, usada en el tratamiento del Paludismo. Isoquinolínicos: derivados del opio. Los más importantes son la papaverina (relajante muscular) , la emetina (antihelmíntico), tubocurarina (relajante muscular). FENANTRENICOS BENCILISOQUINOLINICOS Alcaloides del Opio N CH3 OPIO: “latex desecado de las cápsulas de Papaver somniferum” PAPAVERINA Composición química: USO: antiespasmódico O  Sales, almidón, colorantes, OR2 OR2 gomas, resinas, azúcares. MORFINA H H  alcaloides CODEINA CH3 H CH3 CH3 TEBAINA 16
  • 17.  Indol: Estricnina (estimulante del sistema nervioso central) y fisostigmina (inhibidor reversible de la CHE) son los más destacados. Reserpina (Rauwolfia serpentina), se utiliza como hipotensor. Y los derivados de Catharanthus roseus, sulfato de vinblastina y sulfato de vincristina utilizados en tratamientos del cancer. Imidazolínicos: Pilocarpina, que se obtiene a partir de Pilocarpus jaborandi, P. microphyllus y P. pinatifolius, acción agonista colinérgica muscarínica, se utiliza en tratamiento de glaucoma, miosis. Esteroideos: obtenidos del Veratrum viride, se utiliza como insecticida. Aminados: Efedrina, simpaticomimético. Purínicos: se destacan las xantinas ( cafeína y teofilina) estimulantes del SNC y efecto diurético. N MeO N H O O OMe OMe OMe OMe Estricnina Coffea arabica Cafeína 17
  • 18. Pruebas Generales de los Alcaloides1) Reactivos de Alcaloides Precipitantes: A) Mayer’s reagent. B) wagner’sreagent. C) Hagar’s reagent D) Gold chloricle E) Dragendoeff’sreagent.2) Reactivos de Alcaloides coloreados: (La deshidratación en bruto o la oxidacion de los alcaloides) A) Marquis reagent. B) MandalinR. C)Froehed’sr D) Erdmann’s R.3) Pruebas especiales para los Alcaloides: Es usado para identificar y confirmar la presencia de alcaloides. Reactivo de Tiocianato de Cobalto 18
  • 19. Coloraciones con el Reactivo de Marquis SUSTANCIA COLOR TIEMPO (S) NOTAS MDMA o MDA * Purpura a negro 0-5 Puede ser un purpura bien oscuro Amphetamine o Anaranjado a 0-5 Puede ser un café Methamphetamine café intenso 2C-B Anaranjado a 5-10 El color cambia desde el verde estado inicial DXM Gris a negro 15-30 inicialmente no cambia; toma mucho tiempo en tener un color más negro que el de MDMA Donde: MDMA: Methylenedioxymethamphetamine. MDA: Methylenedioxyamphetamine. 2C-B: 2,5-dimethoxy-4-bromophenethylamine. DXM: Dextromethorphan 19
  • 20. Coloraciones específicas con el Reactivo de Marquis SUSTANCIAS COLORACIÓN 2C-B - 4-bromo-2,5- Verde- Amarillento dimethoxyphenethylamine 2,5-Dimethoxy-4-bromoamphetamine Verde oliva - Amarillento (DOB) Aspirina Rojo oscuro Codeína * Púrpura oscuro d-Amphetamine HCl Naranja oscuro rojizo – Café oscuro rojizo d-Methamphetamine HCl Naranja oscuro rojizo – Café oscuro rojizo. Diacetylmorphine HCl (Heroin) * Rojo oscuro a purpura Exedrine Rojo oscuro Methylenedioxyamphetamine HCl (MDA) Negro Methylenedioxy-N-ethylamphetamine HCl Negro (MDEA) Methylenedioxymethamphetamine HCl Negro (MDMA) Mescaline HCl Anaranjado intenso Methadone HCl Rosado amarillento claro Morphine monohydrate * Purpura rojizo muy intenso Opio Marrón rojizo a gris oscuro 20
  • 21. DISEÑO EXPERIMENTAL 21
  • 22. Toma de Muestra Jatropha macrantha M. Arg. Huanarpo Macho 22
  • 23. EXTRACCIÓN DISCONTINUA CON EQUIPO SOXHLET Y REFLUJO 23
  • 24. EXTRACCIÓN POR MACERACIÓN 24
  • 25. EXTRACCIÓN DE ALCALOIDES TOTALES POR MACERACIÓN 25
  • 26. MÉTODO DE EXTRACCIÓN DE ALCALOIDES SELECTIVO DE LOS TRES TIPOS DE EXTRACCIÓN METANÓLICA 26
  • 27. RESULTADOS CARACTERISTICAS ORGANOLEPTICAS Color: Material Fresco Verde Material Seco Café claro Olor Inodoro Estado Físico SólidoANÁLISIS DE HUMEDAD (MUESTRA FRESCA Determinación Resultado (%) 1 79.96 2 81.29 3 81.64 Ŷ 80.96 δ +/-0.886 CV 1.09 27
  • 28. ANALISIS CUALITATIVO PRELIMINAR DEL EXTRACTO HIDROALCOHOLICO Compuesto Reactivo de Identificación Reactivo de Color Resultado Identificado pp. col.Aminas en general Ninhidrina X Azul violáceo +++Aldehídos y 2,4 Dinitrofenilhidrazina X Amarillo ó +Cetonas AnaranjadoEsteres Hidroxilamina X Rojo tinto ó + violáceoFenoles FeCl3 X Rojo vino, verde +++ (V) intenso ó azul. pp. = Precipitación. col.= Coloración.Hidrocarburos Permanganato de Potasio X Café. +++ R = Coloración roja.Insaturados V = Coloración verde intenso. Leyenda: + = Ligera presencia.Hidrocarburos H2SO4 X Rojo, verde azul ó ++(R) ++ = Presencia media.Aromáticos púrpura. +++ = Presencia abundante. - = Negativo. 28
  • 29. MARCHA FITOQUÍMICA PRELIMINAR Compuesto Reactivo de Reactivo de Color Extracto Metanólico Identificado Identificación pp. col. A BTaninos y/o FeCl3 X Rojo vino, verde +++(V) +++(V)Compuestos intenso ó azul.FenólicosSaponinas Formación de X Blanquecino - - espumaFlavonoides Shinoda X Amarillo, ++ + pp. = Precipitación. anaranjado, carmelita ó rojo. col.= Coloración. N = Coloración negra inmediata.Azúcares Reductores Fehling X Rojo ó ladrillo. +++ +++ V = Coloración verde intensa. Leyenda: + = Ligera presencia.Esteroides y/o Lieberman - X Verde oscuro a +++(N) +++(N) ++ = Presencia media.triterpenos Burchard negro. +++ = Presencia abundante.Resinas Agua X Blanco a crema. +++ +++ - = Negativo.Coumarinas/Lactonas Baljet X X Rojo + +Quinonas Borntrager X Rosado a rojo. - -Alcaloides Dragendorff X Anaranjado +++ ++ 29
  • 30. REACCIONES GENERALES PARA ALCALOIDES EN EXTRACTO CRUDO DE ALCALOIDES Reactivo de Reactivo de Color Resultado Identificación pp. col.Dragendorff X Naranja +++ pp. = Precipitación. col.= Coloración.Wagner X Marrón +++ B = Coloración blanca. Leyenda: + = Ligera presencia.Mayer X Blanco a crema +++(B) ++ = Presencia media. +++ = Presencia abundante. - = Negativo.Scheibler X Blanco +++Urk X Violeta - 30
  • 31. SÓLIDOS EXTRAÍDOS POR EL MÉTODO DE EXTRACTO DE ALCALOIDES SELECTIVO Solvente Extracto A B AT Éter + + +++ Cloroformo +++ +++ ++ Acetato de Etilo ++ +++ ++ CH3Cl:MeOH (3:2) + + + Leyenda: + = Ligera cantidad de sólidos extraídos. ++ = Presencia media de sólidos extraídos. +++= Mayor presencia de sólidos extraídos. 31
  • 32. REACCIONES GENERALES Y ESPECÍFICAS PARA ALCALOIDES REACTIVOS MUESTRA TIOCIANATO DE KELLER DMB ERLICH OTTO MARQUIS COBALTO EEA ++(va) – – – – +++(p) EE1 +++ – – – – +++(p) EClB + +++ – – – +++(p) ECl2 + – – – – +++(p) EAC +++ ++ – – – +(p) EA3 ++ – – – – ++(p) EClMeD + + – – – +(p) EClMe4 + – – – – +(p) EEAT + – – – – +++(p) va = Verde azulado. Leyenda: + = Ligera presencia. p = Púrpura negrusco. ++ = Presencia media. +++ = Presencia abundante. - = Negativo. 32
  • 33. PUNTO DE FUSIÓN Y SOLUBILIDADDe los extractos selectivos obtenidos: ECl2, EClB, EAC y EEAT. Extracto Punto de Fusión (ºC) ECl2 70 – 74 EClB 71 – 74 EAC 68 – 72 EEAT 60 – 62 Solventes Fracción Acetato de Agua CH3Cl Éter Hexano Acetona Metanol Etilo F C ECl2 S S LS LS S S I LS EClB S S LS LS S S I LS EEAT S S LS LS S S I LS CH3Cl = Cloroformo. 3 F = Agua Fría. C = Agua Caliente. Leyenda: S = Soluble. I = Insoluble. LS = Ligeramente soluble. 33
  • 34. CONCLUSIONES La muestra vegetal es conocida en nuestra medicina popular como Huanarpo macho, que por estudio taxonómico se logro caracterizar a la misma siendo de la clase Magnoliopsida, a la familia de los Euphorbiaceae, al género Jatropha (Euphorbia), especie de la Jatropha macrantha y nombre científico Jatropha macrantha Muell. Arg. Por marcha fitoquímica preliminar del extracto metanólico de los tallos de Jatropha macrantha M. Arg. (Huanarpo macho) que permitió demostrar la presencia de taninos y/o compuestos fenólicos, flavonoides, esteroides y/o triterpenos, resinas, coumarinas/lactonas y principalmente alcaloides. Según las reacciones específicas para alcaloides realizadas en todas las fracciones alcaloideas dio un resultado positivo y abundante con el Reactivo de Marquis el cual dio como respuesta una coloración específica (púrpura negrusco) lo cual permite dar como resultado tentativo la presencia de alcaloides derivados del grupo de las opiáceas fenantrenicas – Alcaloides derivados de la fenilalanina y tirosina (codeína, morfina, MDMA o MDA). Teniendo en cuenta las diferencias de extracción iníciales entre los extractos metanólicos por los métodos soxhlet - reflujo, maceración y por la técnica de extracción de alcaloides totales, no hubo diferencia significativa entre los resultados de análisis de los métodos soxhlet - reflujo y maceración. Pero si hubo diferencia de los mismos con respecto a la técnica de extracción de alcaloides totales. 34
  • 35. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS1. Lock de Ugaz, O. (1988). Investigación Fitoquímica. Pontificia Universidad Católica del Perú. Fondo Editorial.2. Bruneton J. (2001). Farmacognosia. Fitoquímica. Plantas Medicinales. Segunda Edición. Editorial Acribia S.A. Zaragoza (España).3. Dr. Domínguez, X.A. (1979). Métodos de Investigación Fitoquímica. Editorial Limusa. México.4. Montenegro, G. (2002). Aplicabilidad de la Etnobotánica en programas de biodiversidad amenazadas: el caso de Chile. VIII Congreso Latinoamericano y II Congreso Colombiano de Botánica. Cartagena de Indias.5. Mostacero León J., Mejia Coico F., Gamarra Torres, O. (2002) Taxonomía de las Fanerógamas Útiles del Perú. Volumen I. Auspiciado por CONCYTEC. Trujillo-Perú.6. Cordell, G.A. (1975). Introduction to Alkaloids a Biogenetic Approach. England.7. Kesternich, M. V. (2003). Curso Internacional de Productos Naturales. Unidad de Post – Grado de la Facultad de Ciencias Naturales y Formales. Universidad Nacional de San Agustín.8. Agapito, T. y SPNG, I. (2004). Fitomedicina 1100 Plantas Medicinales. Tomo I-II. Editorial Isabel. Lima-Perú.9. Negrete, R. (1997). La vegetación en el Altiplano, Ciencia y Conciencia en los Andes. Actas del II Simposio Internacional de Estudios Altiplánicos. Santiago.10. Oshima M., et all. (2003). Effects of Lepidium meyenii Walp and Jatropha macrantha on blood levels of estradiol-17 beta, progesterone, testosterone and the rate of embryo implantation in mice. Journal of Veterinary Medical Science. Japan.11. Benavides A., et all. (2005). Catechin derivates in Jatropha macrantha stems: Characterisation and LC/ESI/MS/MS quali-quantitative analysis. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. Italy.12. Miranda M. M. (1996). Métodos de Análisis de Drogas y Extractos. Universidad de la Habana – Instituto de Farmacia y Alimentos. Cuba. 35
  • 36. “Las hierbas están en la tierra como una señal del propósito con el que se han de utilizar”. (PARACELSO 1443 – 1541) 36