11. Araçlar ve Metodlar
11
● Radioautografi
● Canlı Doku ve Hücrelerin
İncelenmesi
● In Vitro
● Saf Hücre Kültürleri
● Hücre Fonksiyonu
DR. OKTAY ARDA
12. Ölçü Üniteleri
12
● Micrometre
● μm
● 0.001 mm
● 0.000 001 m ( 10-6 m )
● Nanometre
● nm
● 0.001 μm
● 0.000 000 001 m ( 10-9 m )
DR. OKTAY ARDA
13. Dokunun Hazırlanması
13
● İnce Doku Örnekleri
● Işık Geçirgenliği
● İnce
● Saydam
● Kesit
DR. OKTAY ARDA
14. Dokunun Hazırlanması
14
● Çok İnce Örnek
● Kesit Alma Yok
● Doku Tabakaları
● Saydam Membranlar
● Işığı Geçiren
● Mezanterler
● Kurbağa Larva Kuyruğu
● Hamster in Yanak Poşu Duvarı
DR. OKTAY ARDA
15. Dokunun Hazırlanması
15
● Çok İnce Örnek
● İncelenebilinir
● Uzun Sürede
● Değişen Ortamlarda
● Fizyolojik
● Deneysel
DR. OKTAY ARDA
18. Tespit
18
● Dokuyu Koruyabilmek İçin Kullanılan
Kimyasal Maddeler
● Kimyasal Yöntem
● ? (Henüz Çok İyi Anlaşılamamıştır)
● Komplike
DR. OKTAY ARDA
19. Rutin IM İçin En İyi Tespit Eriyiği
19
● İzotonik Solüsyon da Tamponlanmış 4%
Formol aldehit
DR. OKTAY ARDA
20. De-kalsifiye Edilmemiş
20
Kemik ve Diş
İçin En İyi Tespit Eriyiği
● 70% ALKOL
DR. OKTAY ARDA
21. Popüler Fiksatifler
21
● Formol aldehit
● Glutar aldehit
● Proteinlerle Reaksiyona Girer (Amine
Grupları ile (Nh2))
● Proteinler Arasıda Çapraz Bağlar
Kurabilir
DR. OKTAY ARDA
22. 22
Fiksatifler ve Yüksek Rözülüsyon
● Çift Fiksasyon Yöntemi (EM) Ultrasütrüktürü
Koruyabilmek İçin
● Tamponlanmış Glutaraldehit
● Tamponlanmış Osmium Tetroxit
● Lipid ve Proteinleri Korur
● Lipid ve Proteinleri Boyar
DR. OKTAY ARDA
23. Dehidratasyon (Suyun Giderilmesi)
23
● Gömmek İçin Gerekli
● Suyun Giderilmesi
● Yükselen Serilerde Etanol ve Su
● 70% 100%
DR. OKTAY ARDA
24. Impregnasyon (Şeffaflaştırma)
24
● Etanol ün Yerini Alma
● Gömme Ortamı İle Karışabilme
● Xylene, Parafine Gömme
● Doku, Işığı Geçirir Hale Gelir
(Şeffaflaşır)
DR. OKTAY ARDA
25. Gömme
25
● Kesit Alma İçin Gerekli
● İnce Kesitlerin Alınabilmesi
● Yumuşak Dokunun Sert Hale
Getirilmesi
● Gömme Ortamları
● Parafin (IM Rutin)
● Plastik Rezinler (IM & EM)
● Büzüşmeyi Engeller
● Boşlukları Doldurur
DR. OKTAY ARDA
28. Dondurma Mikrotomları
28
● Lipidlerin Kaybolması
● Xylene
● Lipid Kaybını
Engelleme
● Doku Düşük Isılarda
Sertlaştirilir
● Gerekli Sertlik Elde
Edilir
● Kesit Alınır
DR. OKTAY ARDA
29. Dondurma Mikrotomları
29
● Kısa Sürede Kesit Alınabilir
● Gömme İşlemi Yoktur
● Parçaların Süratle
İncelenebilmesi Sağlanır
● Cerrrahi Müdahaleler
Sırasında Teşhise Gitme
DR. OKTAY ARDA
30. Dondurma Mikrotomları
30
● Histokimyasal Çalışmalarda
● Çok Hassas Enzimler
● Küçük Moleküller
● Pek Çok Enzim Dondurma İle
Etkisiz Hale Gelmez
DR. OKTAY ARDA
31. Dokunun Hazırlanması
31
Kalıcı Hazırlık
● Mikroskop Altında İnceleme
DR. OKTAY ARDA
35. 35
Hematoxylin ve Eosin (H&E)
● En sık Kullanılan
Boyalar
● Hematoxylin Maviye
Boyar
● Nüveyi
● Sitoplazmanın RNA -
zengin Kısımlarını
● Eosin Pembe - Kırmızı
● Sitoplazma Kırmızı
● Kollajen Pembe
DR. OKTAY ARDA
43. IM Optik Kısımları
43
● Kondansatör
● Işığı Toplar Ve Odaklar
● Koni Şeklinde Bir Işık
Kaynağını Meydana Getirir
● İncelenecek Parçayı Aydınlatır
DR. OKTAY ARDA
44. IM Optik Kısımları
44
● Objektif
● Büyütür
● Işığın İzini
Odaklar
DR. OKTAY ARDA
45. IM Optik Kısımları
45
● Oküler
● İmajı Dahada Büyütür
● İmajı Odaklar
● İzleyicinin Retinasına
● Fotoğraf Plakasına
DR. OKTAY ARDA
46. Rezülüsyon
46
● Birbirinden ayrı olarak algılanabilen İki Partikül
Arasıdaki En Küçük Mesafe
DR. OKTAY ARDA
47. 47
Mikroskobun Çözüm Gücü
● Elde Edilebilen Kritik Faktörler
● Temiz
● Detaylı
● Mikroskop Tan Elde Edilebilen
DR. OKTAY ARDA
48. 48
IM Maksimum Çözüm Gücü
● ~0.1 μm
● Büyütmelerde İyi Görünüm Verir
● X 1000-1500
● Rözülüsyon
● =< 0.1 μm
DR. OKTAY ARDA
49. Büyütme ve Rözülüsyon
49
● Cözüm Gücü Sınırlıdır
● Işığın Dalgaboyu ile
DR. OKTAY ARDA
50. 50
Lütfen Hangi !
● Biliniz
● Mikroskobu Kullanacağınızı
● Hangi Mikrotekniği
DR. OKTAY ARDA
51. Observasyon ve Enterperatasyon
51
● Gross Anatomi
● 3 Boyutlu Yapılar
● Histoloji
● Parçadan Alınan Kesitler
● 2 Boyutlu
● Seri Kesitlerden Nihayi
Sonuca Gidilebilme
DR. OKTAY ARDA
