Julio, 2009

 Que el participante conozca la importancia y
técnica de laboratorio para realizar la prueba
de coliformes y/o enterococos en agua salada
para cuestiones de salud pública.

 TECNICA # 1
COLIFORMES FECALES Y TOTALES
 Prueba presuntiva.
 Prueba confirmativa.
 TECNICA # 2
ENTEROCOCOS FECALES
 Prueba presuntiva.
 Prueba confirmativa.

 Cólera.
 Fiebre tifoídea.
 Hepatitis.
 Poliomielitis
 Gastroenteritis.

 Condiciones, material y equipo necesario.
1. Trabajar en medio esteril:
Campana de flujo laminar ó Mechero bunsen

2. Tubos con medio 3. Pipetas graduadas
de cultivo y pipetas pasteur
esterilizado y estériles
verificado (sin
burbuja)
4. Guantes
estériles, cofia,
cubrebocas y bata
de laboratorio.

COLIFORMES  PARTE 1 Prueba presuntiva
Consta de: 3 PASOS
FECALES
 PARTE 2 Prueba confirmativa
Consta de : 4 PASOS
COLIFORMES  Prueba confirmativa
TOTALES Consta de: 4 PASOS

 PARTE 1 (Prueba presuntiva)
PASO 1
Agitar
muestra
INICIO
Inoculación
Caldo Lauril Triptosa de la muestra
Caldo de Caldo de concentración
concentración SENCILLA
DOBLE
En cada dilución,
En cada dilución, utlizar una pipeta
homogeneizar muestra estéril diferente
24 movimientos por 7
segundos

Leer tubos, contar los
Incubar 48 hrs / 35 ºC tubos con turbidez y
fermentación de la
PASO 2 lactosa
PASO 3
FIN

 PARTE 2 Prueba confirmativa PASO 2
INICIO
PASO 1
Colocar en
Control de calidad
gradilla tubos Caldo Cepa positiva: E. coli
conteniendo EC
Cepa negativa: E.
Caldo EC aerogenes
(misma tomar una asada
cantidad que
los positivos en
p.p)
PASO 3
FIN PASO 4
Leer tubos
Esta prueba de positivos y
Coliformes utilizar tablas
fecales dura 3 de NMP para
días en total el resultado Incubar 24 hrs / 44.5 ºC

Prueba confirmativa de Coliformes totales
INICIO PASO 2
PASO 1
Caldo
V.B
Colocar en
gradilla tubos
conteniendo Control de calidad
Caldo Verde Cepa positiva: E.
Brillante (misma aerogenes
cantidad que los Cepa negativa: St.
positivos en p.p) aureus
tomar una asada
PASO 4 PASO 3
Leer tubos
positivos y
FIN consultar
tablas de
Esta prueba de NMP para
Coliformes el
totales dura 4 resultado
Incubar 48 hrs / 35 ºC
días en total

LOS VALORES OBTENIDOS DE
COLIFORMES FECALES Y/O TOTALES
DEBEN SER INTERPRETADO POR
PERSONAL CALIFICADO

Índice del NMP y límite confiable de 95% para varias combinaciones de resultados positivos
y negativos.

 PARTE 1 (Prueba presuntiva)
Enterococos Consta de: 3 PASOS
Fecales
 PARTE 2 (prueba confirmativa)
Consta de : 6 PASOS

 Infección urinaria
 Meningitis
 Endocarditis
 Bacteremia

 PARTE 1 Prueba presuntiva
PASO 2
INICIO
PASO 1
Medio de Misma técnica
cultivo: Azida de inoculación
Dextrosa que Coliformes
Incubar 48 hrs / 35 ºC
PASO 3
FIN Leer con presencia
de turbidez (tubos
positivos)

PARTE 2 Prueba confirmativa
PASO 2
INICIO
PASO 1
Control de calidad
Cepa positiva: A. viridans
Cepa negativa: E. faecium
tomar una asada y sembrar
en placas con agar PSE Incubar placas en
posición invertida
24 hrs / 35 ºC
Tubos positivos
sembrar en placas
conteniendo Agar de
Enterococos selectivo
PSE
PASO 3
presencia de colonias cafés
negruzcas con halo color café
confirma la presencia de
enterococos

ETAPA 5
ETAPA 4 ETAPA 6
Transferir 2
colonias de cada Presencia de turbidez,
placa en caldo prueba positiva y
infusión cerebro calcular NMP en base a
corazón + NaCl al los tubos positivos en
6.5% p.p
Incubar
24 hrs / 45 ºC
FIN
Esta prueba de
Enterococos fecales
dura 4 días en total

1. Cuando tenemos 3 o menos series de tubos positivos (CASO 1):
Nos vamos a la tabla y ahí nos indica que son 150 NMP/ml
2. Cuando tenemos más de 3 series positivas (CASO 2) se utiliza la siguiente
fórmula