• Share
  • Email
  • Embed
  • Like
  • Save
  • Private Content
Kriminallab pyro (ej mord)
 

Kriminallab pyro (ej mord)

on

  • 2,894 views

Kriminallab från Vetenskapenshus

Kriminallab från Vetenskapenshus

Statistics

Views

Total Views
2,894
Views on SlideShare
2,894
Embed Views
0

Actions

Likes
0
Downloads
0
Comments
0

0 Embeds 0

No embeds

Accessibility

Categories

Upload Details

Uploaded via as Microsoft PowerPoint

Usage Rights

© All Rights Reserved

Report content

Flagged as inappropriate Flag as inappropriate
Flag as inappropriate

Select your reason for flagging this presentation as inappropriate.

Cancel
  • Full Name Full Name Comment goes here.
    Are you sure you want to
    Your message goes here
    Processing…
Post Comment
Edit your comment
  • DNA profilering beskrev av en engelsman (genetiker) Alec Jeffrey, 1985  vissa regioner upprepade sig och antalet upprepningar skiljde sig mellan individer
  • DNA från cellkärna, men om kropp mycket förstörd (eller förruttnad)  mtDNA! Man kollar på STR fragment, då identifiering av brottsling baserat på DNA fragment är svårt. Detta har att göra med att DNA ofta är skadat (eller blandat  sexual assault). PCR funkar bättre då fragmenten är små, då DNA är skadat. STR färre mutationer  data mer stabilt och predictable
  • Att använda DNA från cellkärnan kan emellertid vara svårt om förruttnelseprocessen har gått långt. Då måste man utgå från en annan typ av DNA som finns i mitokondrierna ute i cellplasman, mtDNA. I benrester t ex kan detta mtDNA bevaras under mycket lång tid. Metoden är krångligare, och här behövs referensmaterial från flera släktingar för att identifieringen ska bli säker.
  • Bygger på cellens eget replikations system  Effektivt Nobelpris 1993 (Kary B. Mullis) Dubblering av antalet DNA molekyler/cykel Påkoppling av Biotin mha biotinylerade primers
  • Nämn stark bindning mellan BIOTIN och STREPTAVIDIN!!!!!!!

Kriminallab pyro (ej mord) Kriminallab pyro (ej mord) Presentation Transcript

  • Kriminalteknologi med PYROSEKVENSERING
  • Kriminalteknologi
    • Tidigare metoder
    • Analys av: blodgrupp, serumproteiner och enzymer
    • Färska och tillräckligt stora blodspår krävs
    • Endast uteslutning  Ej identifiering
    • DNA-metoder
    • Analys av: de flesta biologiska spår såsom blod,
    • saliv, sperma, hårstrån och hud
    • Ersatt traditionella metoder (from 1994)
    • Gamla och små spår kan användas
    • Mycket specifik  Identifierar
    • Spår från fel person?
  • DNA Deoxyribonucleic Acid
    • DNA – kroppens recept – kodar för gener (ca 22 000 st)
    • Socker, fosfat och fyra baser; A (Adenin) T (Tymin)
    • C (Cytosin) G (Guanin)
    • Baserna binder ( A = T och C ≡ G )  bildar DNA-kod (ex ACTTG)
    • Människans DNA  2 meter (3 000 000 000 baspar) / cell!
  • DNA
    • I varje cellkärna och i mitokondrierna
    • Hälften av kärn-DNAt från varje förälder
    • Alla cellers DNA hos en person är identiska
    • Varierar ej med tiden
    • Unikt hos varje individ
  • STR - Metod DNA  CSI? Hitta och säkerställa spår!
  • STR Short Tandem Repeats
    • Standardmetod  kriminal
    • DNA från minst 100 celler
    • STR-områden = repetitioner om 4 baser (ex AATG AATG AATG) + kön
    • Nonsens-DNA
    • 1/1 000 000 undersöks  10 specifika områden
    • Skillnad i antal upprepningar
    • Dubbel uppsättning (från mamma och pappa)
    AATG Uppsättning från 1 individ
  • 1 chans på 1 miljon att 2 obesläktade personer har samma DNA-profil 1. Kopiering  PCR 2. Separering efter storlek  elekrofores 3. Utläsning  DNA-profil
  • DNA-register
    • Svenska register upprättades 1999
    • Används för att lösa / koppla samman ouppklarade brott
    • Innehåller DNA-profiler (STR)  brottsplatsspår
    •  fällda gärningsmän
    • Endast nonsens-DNA
    • Register med hela befolkningen?
  • Framtid
    • Snabbare analyser
    • Skadat / gammalt DNA
    • Små mängder DNA
    • Automatisering, microchips
    • På-plats-labb
    • Få ut info från DNA: längd, ögon- & hårfärg
    • Internationellt samarbete
    • DNA från mitokondrierna
    • (energistationer i cellen)
    • Ärvs från mamman
    • Tåligare, kortare och mindre variation i baserna
    • I varje cell finns flera mitokondrier  mer mtDNA än kärnDNA i varje cell  färre celler krävs
    • Mord, identifiering av lik, komplement till STR.
    • Små och gamla spår.
    Mitokondrie-DNA (mtDNA)
  • Pyrosekvensering mtDNA analyseras med hjälp av…
    • Utvinning av DNA från biologiskt spår
    • PCR för att öka mängden DNA vi vill sekvensera
    • Förbehandla provet och sätta till sekvenseringsprimers (idag!)
    • Syntetisera DNA med hjälp av Pyrosekvensering (idag!)
    Vid förbehandling av provet separeras de två DNA – strängarna.
  • 1. Extraktion & Rening
    • Nedbrytning
    • SDS bryter ned cellmembran.
    • Proteinas K bryter ned proteiner bundna till DNA.
    • Rening
    • Kolonn binder DNA.
    • Cellrester tvättas bort.
    • Eluering
    • DNA sköljs ur kolonn.
    • Rent DNA i provröret!
  • 2. Polymerase Chain Reaction (PCR)
    • Masskopiering av DNA
    • Syntes av DNA i cykel:
    • Denaturering: Separation av
    • DNA strängar (95°C)
    • Hybridisering: Primer
    • fästs (~50°C)
    • Elongering: Komplementär
    • sträng syntetiseras (70°C)
    • Biotin sätts fast på DNA mha Primer
  • 3. Provberedning  Magneter kopplas till den ena DNA-strängen  DNA-strängarna separeras med NaOH  Sekvenseringsprimers tillsätts A G G C G T T A A C A Strepatividin S S S S S S S S S S S T C C G C A A T T G T T C C G Biotin NaOH A G G C G T T A A C A T C C G C A A T T G T Biotin A G G C G T T A A C A T C C G C A A T T G T Biotin T C C G T C C G T C C G
  • Magnet Vätska PCR skräp DNA fragment utan biotin Nukleotider Enzym NaOH DNA sträng utan biotin Obundna sekvenseringprimers
  • 4. Pyrosekvensering
  •  
  • PP i Potatis Apyros 4 Eldfluga Luciferas 3 Jäst Sulfyrulas 2 Bakterie Polymeras 1 Ursprung Enzym
  •  
  •  
  • Dagens uppgift: Sekvensera (ta fram ordningen på baserna) DNA från ert hår!
  • Polymorfism Primer: I16203 G C T T A Polymorfism A A C T C C C Bas 27 26 25 24 23 22 16221 Plats