Kriminalteknologi med PYROSEKVENSERING
Kriminalteknologi <ul><li>Tidigare metoder </li></ul><ul><li>Analys av:  blodgrupp, serumproteiner och enzymer  </li></ul>...
DNA Deoxyribonucleic Acid <ul><li>DNA – kroppens recept –  kodar för gener (ca 22 000 st) </li></ul><ul><li>Socker, fosfat...
DNA <ul><li>I varje cellkärna och i mitokondrierna </li></ul><ul><li>Hälften av kärn-DNAt från varje förälder </li></ul><u...
STR - Metod DNA    CSI? Hitta och säkerställa spår!
STR Short Tandem Repeats <ul><li>Standardmetod    kriminal  </li></ul><ul><li>DNA från minst 100 celler </li></ul><ul><li...
1 chans på 1 miljon att 2 obesläktade personer har samma DNA-profil 1. Kopiering    PCR 2. Separering efter storlek    e...
DNA-register <ul><li>Svenska register upprättades 1999 </li></ul><ul><li>Används för att lösa / koppla samman ouppklarade ...
Framtid <ul><li>Snabbare analyser </li></ul><ul><li>Skadat / gammalt DNA </li></ul><ul><li>Små mängder DNA </li></ul><ul><...
<ul><li>DNA från mitokondrierna  </li></ul><ul><li>(energistationer i cellen) </li></ul><ul><li>Ärvs från mamman </li></ul...
Pyrosekvensering mtDNA analyseras med hjälp av…
<ul><li>Utvinning av DNA från biologiskt spår </li></ul><ul><li>PCR för att öka mängden DNA vi vill sekvensera </li></ul><...
1. Extraktion & Rening <ul><li>Nedbrytning  </li></ul><ul><li>SDS  bryter ned cellmembran. </li></ul><ul><li>Proteinas K  ...
2. Polymerase Chain Reaction (PCR) <ul><li>Masskopiering av DNA </li></ul><ul><li>Syntes av DNA i cykel: </li></ul><ul><li...
3. Provberedning    Magneter kopplas till den ena DNA-strängen    DNA-strängarna separeras med NaOH    Sekvenseringspri...
Magnet Vätska PCR skräp DNA fragment utan biotin Nukleotider Enzym NaOH DNA sträng utan biotin Obundna sekvenseringprimers
4. Pyrosekvensering
 
PP i Potatis Apyros 4 Eldfluga Luciferas 3 Jäst Sulfyrulas 2 Bakterie Polymeras 1 Ursprung Enzym
 
 
Dagens uppgift: Sekvensera (ta fram ordningen  på baserna) DNA från ert hår!
Polymorfism Primer: I16203 G C T T A Polymorfism A A C T C C C Bas 27 26 25 24 23 22 16221 Plats
Upcoming SlideShare
Loading in …5
×

Kriminallab pyro (ej mord)

3,005 views
2,742 views

Published on

Kriminallab från Vetenskapenshus

0 Comments
0 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

No Downloads
Views
Total views
3,005
On SlideShare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
2
Actions
Shares
0
Downloads
4
Comments
0
Likes
0
Embeds 0
No embeds

No notes for slide
  • DNA profilering beskrev av en engelsman (genetiker) Alec Jeffrey, 1985  vissa regioner upprepade sig och antalet upprepningar skiljde sig mellan individer
  • DNA från cellkärna, men om kropp mycket förstörd (eller förruttnad)  mtDNA! Man kollar på STR fragment, då identifiering av brottsling baserat på DNA fragment är svårt. Detta har att göra med att DNA ofta är skadat (eller blandat  sexual assault). PCR funkar bättre då fragmenten är små, då DNA är skadat. STR färre mutationer  data mer stabilt och predictable
  • Att använda DNA från cellkärnan kan emellertid vara svårt om förruttnelseprocessen har gått långt. Då måste man utgå från en annan typ av DNA som finns i mitokondrierna ute i cellplasman, mtDNA. I benrester t ex kan detta mtDNA bevaras under mycket lång tid. Metoden är krångligare, och här behövs referensmaterial från flera släktingar för att identifieringen ska bli säker.
  • Bygger på cellens eget replikations system  Effektivt Nobelpris 1993 (Kary B. Mullis) Dubblering av antalet DNA molekyler/cykel Påkoppling av Biotin mha biotinylerade primers
  • Nämn stark bindning mellan BIOTIN och STREPTAVIDIN!!!!!!!
  • Kriminallab pyro (ej mord)

    1. 1. Kriminalteknologi med PYROSEKVENSERING
    2. 2. Kriminalteknologi <ul><li>Tidigare metoder </li></ul><ul><li>Analys av: blodgrupp, serumproteiner och enzymer </li></ul><ul><li>Färska och tillräckligt stora blodspår krävs </li></ul><ul><li>Endast uteslutning  Ej identifiering </li></ul><ul><li>DNA-metoder </li></ul><ul><li>Analys av: de flesta biologiska spår såsom blod, </li></ul><ul><li>saliv, sperma, hårstrån och hud </li></ul><ul><li>Ersatt traditionella metoder (from 1994) </li></ul><ul><li>Gamla och små spår kan användas </li></ul><ul><li>Mycket specifik  Identifierar </li></ul><ul><li>Spår från fel person? </li></ul>
    3. 3. DNA Deoxyribonucleic Acid <ul><li>DNA – kroppens recept – kodar för gener (ca 22 000 st) </li></ul><ul><li>Socker, fosfat och fyra baser; A (Adenin) T (Tymin) </li></ul><ul><li>C (Cytosin) G (Guanin) </li></ul><ul><li>Baserna binder ( A = T och C ≡ G )  bildar DNA-kod (ex ACTTG) </li></ul><ul><li>Människans DNA  2 meter (3 000 000 000 baspar) / cell! </li></ul>
    4. 4. DNA <ul><li>I varje cellkärna och i mitokondrierna </li></ul><ul><li>Hälften av kärn-DNAt från varje förälder </li></ul><ul><li>Alla cellers DNA hos en person är identiska </li></ul><ul><li>Varierar ej med tiden </li></ul><ul><li>Unikt hos varje individ </li></ul>
    5. 5. STR - Metod DNA  CSI? Hitta och säkerställa spår!
    6. 6. STR Short Tandem Repeats <ul><li>Standardmetod  kriminal </li></ul><ul><li>DNA från minst 100 celler </li></ul><ul><li>STR-områden = repetitioner om 4 baser (ex AATG AATG AATG) + kön </li></ul><ul><li>Nonsens-DNA </li></ul><ul><li>1/1 000 000 undersöks  10 specifika områden </li></ul><ul><li>Skillnad i antal upprepningar </li></ul><ul><li>Dubbel uppsättning (från mamma och pappa) </li></ul>AATG Uppsättning från 1 individ
    7. 7. 1 chans på 1 miljon att 2 obesläktade personer har samma DNA-profil 1. Kopiering  PCR 2. Separering efter storlek  elekrofores 3. Utläsning  DNA-profil
    8. 8. DNA-register <ul><li>Svenska register upprättades 1999 </li></ul><ul><li>Används för att lösa / koppla samman ouppklarade brott </li></ul><ul><li>Innehåller DNA-profiler (STR)  brottsplatsspår </li></ul><ul><li>  fällda gärningsmän </li></ul><ul><li>Endast nonsens-DNA </li></ul><ul><li>Register med hela befolkningen? </li></ul>
    9. 9. Framtid <ul><li>Snabbare analyser </li></ul><ul><li>Skadat / gammalt DNA </li></ul><ul><li>Små mängder DNA </li></ul><ul><li>Automatisering, microchips </li></ul><ul><li>På-plats-labb </li></ul><ul><li>Få ut info från DNA: längd, ögon- & hårfärg </li></ul><ul><li>Internationellt samarbete </li></ul>
    10. 10. <ul><li>DNA från mitokondrierna </li></ul><ul><li>(energistationer i cellen) </li></ul><ul><li>Ärvs från mamman </li></ul><ul><li>Tåligare, kortare och mindre variation i baserna </li></ul><ul><li>I varje cell finns flera mitokondrier  mer mtDNA än kärnDNA i varje cell  färre celler krävs </li></ul><ul><li>Mord, identifiering av lik, komplement till STR. </li></ul><ul><li>Små och gamla spår. </li></ul>Mitokondrie-DNA (mtDNA)
    11. 11. Pyrosekvensering mtDNA analyseras med hjälp av…
    12. 12. <ul><li>Utvinning av DNA från biologiskt spår </li></ul><ul><li>PCR för att öka mängden DNA vi vill sekvensera </li></ul><ul><li>Förbehandla provet och sätta till sekvenseringsprimers (idag!) </li></ul><ul><li>Syntetisera DNA med hjälp av Pyrosekvensering (idag!) </li></ul>Vid förbehandling av provet separeras de två DNA – strängarna.
    13. 13. 1. Extraktion & Rening <ul><li>Nedbrytning </li></ul><ul><li>SDS bryter ned cellmembran. </li></ul><ul><li>Proteinas K bryter ned proteiner bundna till DNA. </li></ul><ul><li>Rening </li></ul><ul><li>Kolonn binder DNA. </li></ul><ul><li>Cellrester tvättas bort. </li></ul><ul><li>Eluering </li></ul><ul><li>DNA sköljs ur kolonn. </li></ul><ul><li>Rent DNA i provröret! </li></ul>
    14. 14. 2. Polymerase Chain Reaction (PCR) <ul><li>Masskopiering av DNA </li></ul><ul><li>Syntes av DNA i cykel: </li></ul><ul><li>Denaturering: Separation av </li></ul><ul><li>DNA strängar (95°C) </li></ul><ul><li>Hybridisering: Primer </li></ul><ul><li>fästs (~50°C) </li></ul><ul><li>Elongering: Komplementär </li></ul><ul><li>sträng syntetiseras (70°C) </li></ul><ul><li>Biotin sätts fast på DNA mha Primer </li></ul>
    15. 15. 3. Provberedning  Magneter kopplas till den ena DNA-strängen  DNA-strängarna separeras med NaOH  Sekvenseringsprimers tillsätts A G G C G T T A A C A Strepatividin S S S S S S S S S S S T C C G C A A T T G T T C C G Biotin NaOH A G G C G T T A A C A T C C G C A A T T G T Biotin A G G C G T T A A C A T C C G C A A T T G T Biotin T C C G T C C G T C C G
    16. 16. Magnet Vätska PCR skräp DNA fragment utan biotin Nukleotider Enzym NaOH DNA sträng utan biotin Obundna sekvenseringprimers
    17. 17. 4. Pyrosekvensering
    18. 19. PP i Potatis Apyros 4 Eldfluga Luciferas 3 Jäst Sulfyrulas 2 Bakterie Polymeras 1 Ursprung Enzym
    19. 22. Dagens uppgift: Sekvensera (ta fram ordningen på baserna) DNA från ert hår!
    20. 23. Polymorfism Primer: I16203 G C T T A Polymorfism A A C T C C C Bas 27 26 25 24 23 22 16221 Plats

    ×