2. Toma de Material
Los métodos más utilizados son:
• Biopsias
• Necropsias
• Improntas
• Frotis de células superficiales
• Frotis de células sanguíneas
• Animales de experimentación
• Aplastados celulares
3. Fijación
• La fijación debe realizarse lo más rápido posible
luego de tomada la muestra, para evitar los
procesos de autolisis. Además se debe escoger el
método más adecuado al objetivo del estudio a
realizar.
• Se pueden clasificar en los siguientes métodos:
Por inmersión: pequeños trozos del tejido son
sumergidos en el liquido fijador.
Por perfusión: el líquido fijador se aplica por inyección
vascular.
Por vapores: consiste en utilizar líquidos fijadores que
emitan vapores, se debe realizar bajo campana
extractora de gases.
4. Deshidratación
Luego de que la muestra ha sido fijada se debe
eliminar el fijador y deshidratar.
Para esto se utiliza una serie gradual de soluciones
acuosas con una concentración de menor a mayor
del agente deshidratante, como por ejemplo alcohol
etílico.
La deshidratación gradual se hace para evitar la
deformación de la morfología del tejido, debido a la
rápida salida del agua.
5. Aclaramiento
Posterior a la deshidratación el tejido se debe
sumergir en un líquido que sea miscible tanto en el
medio de inclusión como en el medio de
deshidratación.
El líquido comúnmente utilizado es el xilol.
Esta etapa se llama aclaramiento debido a que el
tejido se vuelve transparente.
6. Inclusión
Para poder obtener cortes delgados que puedan ser
observados al microscopio óptico, los tejido deben
ser incluidos en una sustancia de consistencia firme,
la cual puede ser hidrófila o hidrófoba.
Un medio hidrófobo que se puede utilizar es la
parafina o el paraplast. Este último es una parafina
altamente purificada a la cual se le han agregado
cantidades variables de polímeros especiales, lo
cual le dará distinta dureza y plasticidad al taco de
inclusión.
7. Corte
El taco obtenido en la inclusión se debe cortar en
secciones lo suficientemente delgadas que permitan
el paso de la luz, para esto se utiliza un aparato
llamado micrótomo.
Para esto el bloque se debe tallar, para eliminar el
exceso de parafina, formando una pirámide
truncada.
8. Corte
Los cortes que se van obteniendo se deben ir
estirando, esto se puede realizar en un baño
termoregulado (40-45 ºC). El estiramiento se
basa en la dilatación de la parafina producto del
calor.
Luego estos cortes se van recogiendo con un
portaobjetos.
9. Tinción
Primero la parafina debe ser eliminada
sumergiendo los portaobjetos con los cortes en un
solvente orgánico que puede ser xilol.
Luego los cortes deben ser hidratados pasando por
una serie de graduaciones decreciente de alcohol
etílico, hasta llegar a una solución que sea 100%
agua.
Una vez rehidratado el tejido puede ser teñido. Los
colorantes más utilizados son hematoxilina y eosina.
10. Montaje
Luego de teñir el tejido este debe ser deshidratado
nuevamente, para esto hay que pasarlo por una
serie de alcoholes en grado ascendente.
Posteriormente hay que pasar el tejido por xilol, de
modo de hacerlo miscible con el medio de montaje.
Finalmente se le agrega el medio de montaje y se le
coloca el cubreobjetos, teniendo cuidado en no dejar
burbujas.
