HEMATOLOGIA

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Como se realiza un extendido sanguineo

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HEMATOLOGIA

  1. 1. EXAMEN DE EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFÉRICA
  2. 2. Obtención de la muestra y preparación del extendido de sangre periférica <ul><li>Casi todas las muestras para hematología se recolectan en tubos de tapa lila que contienen EDTA ( que anticoagula la sangre por quelación de calcio) </li></ul><ul><li>Los extendidos deben realizarse dentro de 2 a 3 horas de la toma de muestra </li></ul><ul><li>El EDTA impide la aglutinación de las plaquetas en el portaobjetos. </li></ul>
  3. 3. PREPARACIÓN DEL EXTENDIDO DE SANGRE PERIFÉRICA <ul><li>La sangre de ciertos pacientes sufre satelitosis plaquetaria cuando se aglutina con EDTA ( las plaquetas rodean al neutrófilo). </li></ul><ul><li>Debe tomarse la muestra en tubos con citrato de sodio al 3,8% </li></ul><ul><li>Los leucocitos y plaquetas se multiplican por 1.1 para obtener resultados exactos. </li></ul><ul><li>Punción talón, dedo – extendidos inmediatos. </li></ul>
  4. 4. TIPOS DE EXTENDIDOS <ul><li>Manual con dos portaobjetos en ángulo </li></ul><ul><li>2 portaobjetos de vidrio de 75 x 25 mm limpios, bordes biselados y esquinas romas </li></ul><ul><li>También puede hacerse con un cubreobjetos de hemocitómetro </li></ul>
  5. 5. TÉCNICA DE EXTENDIDOS <ul><li>Se coloca una gota de sangre de 2 a 3 mm de diámetro en el extremo del portaobjeto. </li></ul><ul><li>El tamaño de la gota es importante. Demasiado grueso ,extendido muy largo o muy grueso. </li></ul><ul><li>Demasiado pequeña extendido corto o delgado. </li></ul>
  6. 6. TÉCNICAS DE EXTENDIDO <ul><li>El portaobjeto extensor se sostiene con firmeza con la mano dominante a un ángulo de 30 a 45 grados , se lleva hacia atrás hasta tocar la gota de sangre, dejando que se esparza en todo lo ancho del portaobjetos. </li></ul><ul><li>Entonces se empuja con rapidez y suavidad hacia delante, hasta el final del portaobjetos </li></ul>
  7. 7. TÉCNICAS DE EXTENDIDO <ul><li>Toda la gota debe incluirse en el extendido . </li></ul><ul><li>Movimiento lento produce mala distribución de los leucocitos, porque desplza las cél más grandes hacia el final y los lados del extendido. </li></ul><ul><li>En Hto altos ángulo de 25 grados. </li></ul><ul><li>En Hto bajos aumentar el ángulo </li></ul>
  8. 8. CARACTERÍSTICAS DE UN EXTENDIDO BIEN PEPARADO <ul><li>Debe cubrir de dos tercios a tres cuartas partes de la longitud del extendido. </li></ul><ul><li>Tiene forma de dedo, ligeramente redondeado en el borde más fino </li></ul><ul><li>Los bordes laterales deben ser visibles. </li></ul><ul><li>Extendido parejo, sin agujeros ni estrías. </li></ul><ul><li>Toda la gota debe ser incluída y extendida </li></ul><ul><li>Al colocar contra la luz la porción delgada debe tener aspecto en arco iris </li></ul>
  9. 9. PREPARACIÓN Y TINCIÓN AUTOMATIZADA DE EXTENDIDOS <ul><li>Después que el equipo analizó una muestra, el portador desplaza el tubo y lee el código de barras. </li></ul><ul><li>De acuerdo con el Hto el sistema ajusta el tamaño de la gota a usar, y el ángulo y la velocidad del portaobjetos extensor </li></ul><ul><li>Luego de preparar el extendido , el portaobjetos extensor se limpia en forma automática </li></ul>
  10. 10. TINCIÓN AUTOMÁTICA DE EXTENDIDOS <ul><li>El nombre, número y fecha de la muestra se imprime en el portaobjetos </li></ul><ul><li>Luego se seca , se carga un cassette y se va al sitio de tinción, cuando la tinción está terminada, el portaobjetos se desplaza a un sitio de secado, luego a una zona de almacenamiento, para ser leido. </li></ul><ul><li>Deben secarse tan rápido como sea posible. </li></ul>
  11. 11. TINCIÓN DE LOS EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFÉRICA <ul><li>Wright o Wright – Giemsa (Romanowsky) </li></ul><ul><li>Estas coloraciones son policromáticas pues tienen eosina y azul de metileno . </li></ul><ul><li>El metanol fija las células al portaobjetos </li></ul><ul><li>El azul de metileno oxidado y la eosina, tiñe los componentes neutros. </li></ul><ul><li>El buffer que se agrega a la tinción debe ser fosfato de sodio 0,05 o agua destilada </li></ul>
  12. 12. TINCIÓN DE LOS EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFÉRICA <ul><li>El azul de metileno tiñe los componentes célulares ácidos ( Basófilos) como el RNA. </li></ul><ul><li>La eosina libre es ácida y tiñe y tiñe los componentes básicos ( eosinófilos) la Hb, los gránulos eosinófilos </li></ul><ul><li>Los neutrofilos se denominan así porque tienen gránulos citoplasmáticos con pH neutro y toman algunas características de tinción de ambas coloraciones. </li></ul><ul><li>Los portaobjetos deben secarse antes de teñirlos. </li></ul>
  13. 13. MÉTODOS DE COLORACIÓN DE WRIGHT <ul><li>Se realiza sobre un soporte para coloraciones </li></ul><ul><li>Puede filtrarse antes de usarlo en forma directa desde la botella </li></ul><ul><li>Es importante cubrir el portaobjetos por completo. </li></ul><ul><li>El colorante debe permanecer sobre el portaobjetos de 1 a 3 minutos </li></ul>
  14. 14. MÉTODO DE COLORACIÓN DE WRIGHT <ul><li>Luego se pone una cantidad igual de buffer al portaobjetos. </li></ul><ul><li>Si la mezcla es correcta debe aparecer en el portaobjetos un brillo metálico. </li></ul><ul><li>Cuando termina la coloración , se lava el portaobjetos con un chorro de agua continuo, pero suave. </li></ul><ul><li>La parte de atrás se limpia para eliminar residuo del colorante. </li></ul><ul><li>El portaobjetos se deja secar al aire en posición vertical. </li></ul>
  15. 15. TINCIÓN DE WRIGHT <ul><li>Se realiza con balanza de precisión bien calibrada y en gramos. </li></ul><ul><li>Para 500 ml: </li></ul><ul><li>1.6 gr Wright </li></ul><ul><li>16 ml glicerina </li></ul><ul><li>485 milímetros de metanol </li></ul><ul><li>En el mortero se coloca el glicerol más el Wright, se diluye y lava con el metileno; se filtra por 24 horas. </li></ul>
  16. 16. DISPOSITIVOS DE TINCIÓN AUTOMATIZADOS <ul><li>Utiles en laboratorios con alto volumen de muestras. </li></ul><ul><li>Se necesita 5 a 10 min. Para teñir un lote de portaobjetos. </li></ul><ul><li>Los portaobjetos se sumergen automáticamente en el colorante ,luego en el buffer y en una serie de lavados. </li></ul>
  17. 17. DISPOSITIVOS DE TINCIÓN AUTOMÁTIZADOS <ul><li>Una vez que el proceso de tinción inicio no pueden agregarse portaobjetos al lote. </li></ul><ul><li>Las soluciones de tinción son estables de 3 a 6 horas. </li></ul>
  18. 18. CARACTERÍSTICAS DE UN EXTENDIDO BIEN TEÑIDO <ul><li>Debe ser de color rosa o púrpura. </li></ul><ul><li>Los eritrocitos deben tener un color anaranjado a rosa salmón. </li></ul><ul><li>Los núcleos de los leucocitos color púrpura a azules. </li></ul><ul><li>El citoplasma de los neutrófilos de color rosa a bronceado, con gránulos de color anaranjado brillante. </li></ul><ul><li>Los mejores resultados se obtienen de una extensión bien realizada </li></ul>
  19. 19. EXAMEN DE LOS EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFÉRICA <ul><li>EXAMEN MACROSCÓPICO </li></ul><ul><li>Coloración más azul - proteinas sanguíneas </li></ul><ul><li>Vacuolas dispersas - aumento de los lípidos </li></ul><ul><li>Aspecto grumoso - aglutinaciones de eritrocitos </li></ul>
  20. 20. EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFÉRICA <ul><li>EXAMEN MICROSCOPICO </li></ul><ul><li>El microscopio debe calibrase </li></ul><ul><li>La luz debe centrarse de manera adecuada </li></ul><ul><li>El condensador debe estar elevado casi por completo </li></ul><ul><li>Calibrar correctamente el aumento </li></ul><ul><li>Diafragma abrir una cantidad de luz cómoda para el ojo. </li></ul><ul><li>Uso de filtro. </li></ul>
  21. 21. EXAMEN CON EL OBJETIVO DE 10x <ul><li>Puede evaluarse la calidad del extendido, el color y la distribución de las células. </li></ul><ul><li>Cantidad desproporcionada de monocitos en el borde indica mala extensión. </li></ul><ul><li>Presencia de filamentos de fibrina, distribución de los eritrocitos, formación de rodillos o aglutinación. </li></ul>
  22. 22. EXAMEN CON EL OBJETIVO DE 40x <ul><li>Luego usar el objetivo seco fuerte 40x </li></ul><ul><li>El número de leucocitos por campo se multiplica por 2000 para obtener una aproximación adecuada del recuento de leucocitos. </li></ul>
  23. 23. EXAMEN CON LENTE DE 100x <ul><li>Se utiliza aceite de inmersión </li></ul><ul><li>Se cuenta 100 leucocitos y se informa con porcentaje de leucocitos. </li></ul><ul><li>Un área demasiado delgada, no es aceptable. </li></ul><ul><li>Un área demasiado espesa distorsiona los eritrocitos al amontonarlos uno encima de otro. </li></ul><ul><li>Portaobjetos al revés. </li></ul><ul><li>Debe quitarse el aceite. </li></ul>
  24. 24. REALIZACIÓN DE FÓRMULA LEUCOCITARIA <ul><li>Debe leerse en serpentina hacia delante y hacia atrás, para disminuir los errores de distribución. </li></ul><ul><li>Se cuenta 100 leucocitos y se clasifican con contadores o pianos ( 200) </li></ul><ul><li>Los resultados se informan como porcentajes – 100% </li></ul><ul><li>Es importante incluir los bordes laterales por los monocitos, linfocitos inmaduros y células reactivas </li></ul>
  25. 25. RECUENTO DE PLAQUETAS <ul><li>Se hace con el objetivo de aceite de 100x </li></ul><ul><li>En una zona del extendido, donde los eritrocitos apenas se topen entre sí se cuenta el # de plaquetas en 10 CIA. </li></ul><ul><li>El # aproximado de plaquetas X C. X 20.000 es aproximadamente el recuento de plaquetas. </li></ul>
  26. 26. RECUENTO DE PLAQUETAS <ul><li>Una estimación grosera es si hay de 3 a 25 plaquetas por C. el recuento es adecuado siempre y cuando haya unos 200 leucocitos por C. </li></ul><ul><li>Cuando el pcte, está anémico o tiene eritrocitosis las proporciones plaqueta- eritrocitos se altera, puede usarse la siguiente fòrmula. </li></ul><ul><li># promedio de plaquetas x recuento de eritrocitos </li></ul><ul><li>200 </li></ul>
  27. 27. GRACIAS

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